Endotheliale-mesenchymale Transition in hypoxen mikrovaskulären Endothelzellen und der Einfluss auf die TGFβ₁/SMAD-Signalkaskade:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Gießen
VVB Laufersweiler Verlag
2023
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| Ausgabe: | 1. Auflage |
| Schriftenreihe: | Edition scientifique
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| Beschreibung: | V, 91 Seiten Illustrationen, Diagramme 21 cm, 180 g |
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INHALTSVERZEICHNIS
3.5
PROLIFERATIONSMESSUNGEN
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
III
1
EINLEITUNG
1
1.1
AUFBAU
UND
FUNKTION
DES
GEFAESSSYSTEMS
1
1.2
ENDOTHELZELLEN
UND
DEREN
FUNKTION
2
1.3
ENDOTHELIALE
DYSFUNKTION
3
1.4
HYPOXIE
4
1.5
TGF6
AKTIVIERUNG
5
1.6
TGFSSI-SIGNALWEG
UEBER
SMADS
6
1.7
BEDEUTUNG
DES
TGF6I-SIGNALWEGS
IN
ENDOTHELZELLEN
7
1.8
ENDOTHELIALE-MESENCHYMALE
TRANSITION
(ENDOMT)
9
1.9
ZIEL
DER
ARBEIT
10
2
MATERIAL
12
2.1
CHEMIKALIEN
12
2.2
ANTIKOERPER
14
2.3
GERAETE
UND
LABORBEDARF
16
3
METHODEN
19
3.1
ZELLKULTURMETHODEN
19
3.1.1
VERSUCHSTIERE
19
3.1.2
ISOLIERUNG
VON
KARDIALEN
MIKROVASKULAEREN
ENDOTHELZELLEN
AUS
DER
RATTE
19
3.1.3
KULTIVIERUNG
21
3.1.4
SUBKULTIVIERUNG
22
3.1.5
NORMOXIE
UND
HYPOXIE
DER
ENDOTHELZELLEN
23
3.2
PROTEINBIOCHEMISCHE
METHODEN
24
3.2.1
HERSTELLUNG
VON
PROTEINLYSATEN
MIT
RIPA
24
3.2.2
QUANTITATIVE
BESTIMMUNG
DES
GESAMTPROTEINGEHALTS
NACH
LOWRY
25
3.2.3
PROTEINDENATURIERUNG
MIT
LAEMMLI-PUFFER
26
3.2.4
DISKONTINUIERLICHE
SDS-PAGE
27
3.2.5
WESTERN
BLOT
29
3.3
IMMUNZYTOCHEMISCHE
METHODEN
33
3.3.1
FIXIERUNG
DER
ENDOTHELZELLEN
33
3.3.2
INDIREKTE
IMMUNFLUORESZENZ
33
3.4
HOE-ASSAY
ZUM
APOPTOSE-NACHWEIS
36
36
3.5.1
BESTIMMUNG
DER
ZELLDICHTE
DURCH
TRYPSINIERUNG
36
3.5.2
BESTIMMUNG
DER
ABGESTORBENEN
ZELLEN
IM
UEBERSTAND
37
3.6
STATISTIK
37
4
ERGEBNISSE
38
4.1
ENTWICKLUNG
DER
ZELLKULTUR
38
4.1.1
ZELLMORPHOLOGIE
VON
MIKROVASKULAEREN
ENDOTHELZELLEN
38
4.1.2
ANPASSUNG
DER
ENZYMDIGESTION
39
4.1.3
ANPASSUNG
DER
ADHAESIONSZEIT
41
4.1.4
ETABLIERUNG
DER
IMMUNZYTOCHEMIE
42
4.2
INDUKTION
DES
TGF6I/SMAD-SIGNALWEGS
UNTER
HYPOXIE
48
4.2.1
EFFIZIENZ
DER
HYPOXIE
48
4.2.2
AKTIVIERUNG
DES
ALKI-SIGNALWEGES
UNTER
HYPOXIE/REOXYGENIERUNG
49
4.2.3
AKTIVIERUNG
DES
ALK5-SIGNALWEGES
UNTER
HYPOXIE/REOXYGENIERUNG
51
4.2.4
TGFSSI-UNABHAENGIGER
SMAD-SIGNALWEG
UNTER
HYPOXIE/
REOXYGENIERUNG
53
4.3
ZELLTOD
ODER
PROLIFERATION
UNTER
HYPOXIE/REOXYGENIERUNG
54
4.3.1
ZELLTOD
UND
PROLIFERATION
NACH
EINER
STUNDE
HYPOXIE/REOXYGENIERUNG
55
4.3.2
ZELLTOD
UND
PROLIFERATION
NACH
DREI
TAGEN
HYPOXIE
59
4.4
ENDOTHELIALE-MESENCHYMALE
TRANSITION
DER
MVECS
61
4.4.1
ANPASSUNG
DER
HYPOXIEZEITEN
61
4.4.2
IMMUNZYTOCHEMIE
NACH
DREITAEGIGER
HYPOXIE
63
4.4.3
IMMUNZYTOCHEMIE
NACH
TGFSSI-GABE
66
4.4.4
PROTEINANALYSE
NACH
DREITAEGIGER
HYPOXIE
69
5
DISKUSSION
71
6
ZUSAMMENFASSUNG
77
7
SUMMARY
79
8
LITERATURVERZEICHNIS
81
9
DANKSAGUNG
90 |
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Inhaltsverzeichnis