Rezeptor-vermittelte RNAi-Therapie von Synovialsarkomzellen:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Münster
2022
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| Beschreibung: | III, 114 Blätter Illustrationen, Diagramme 30 cm |
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INHALT
INHALT
1.
EINLEITUNG
4
1.1
SYNOVIALSARKOM
4
1.1.1
EPIDEMIOLOGIE,
HISTOLOGIE
UND
SYMPTOMATIK
4
1.1.2
THERAPIE
DES
SYNOVIALSARKOMS
5
1.1.2
.A
ZYTOTOXISCHE
THERAPIE
5
1.1.2
.B
ZIELGERICHTETE
THERAPIEN
5
1.1.2
.C
IMMUNTHERAPIE
6
1.1.3
GENETISCHER
HINTERGRUND
7
1.1.4
REZEPTOREN
10
1.2
RNA-INTERFERENZ
11
1.2.1
PRINZIP
11
1.2.2
APPLIKATION
VON
SIRNAS
IN
EINE
ZIELZELLE
14
1.3
ZIELSETZUNG
17
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
19
2.1
MATERIAL
19
2.1.1
GERAETSCHAFTEN
UND
VERBRAUCHSMATERIALIEN
19
2.1.2
CHEMIKALIEN
21
2.1.3
ANTIKOERPER
23
2.1.4
SIRNAS
24
2.1.5
PLASMID
24
2.2
METHODEN
24
2.2.1
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
REZEPTOREXPRESSIONSANALYSE
24
2.2.2
KOPPLUNG
VON
PROTAMIN
AN
EINEN
ANTIKOERPER
MITTELS
SULFO-SMCC
25
2.2.
2
.A
GELFILTRATION
DES
ANTIKOERPER-PROTAMIN-KOMPLEXES
27
2.2.3
SDS-PAGE
GELELEKTROPHORESE
28
2.2.4
BAND-SHIFT
ASSAY:
UEBERPRUEFUNG
DER
SIRNA-BINDUNGSKAPAZITAET
EINES
ANTIKOERPER
KOMPLEXES
29
2.2.5
INTERNALISIERUNG
DES
ANTIKOERPER-PROTAMIN-KOMPLEXES
-
FLUORESZENZMIKROSKOPIE
30
2.2.5
.A
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
ANALYSE
DER
INTERNALISIERUNG
31
2.2.6
COLONY
FORMATION
ASSAY
32
2.2.7
NACHWEIS
DES
PROTEIN-KNOCKDOWNS
NACH
LIPOFEKTION
UND
ANTIKOERPER-VERMITTELTER
SIRNA-BEHANDLUNG
-
WESTERN
BLOT
33
2.2.8
KLONIERUNG
DES
&IGF1R-A12-SIP
VEKTORS
PCDNA3.1
IRES-GFP/A12-SIP-PROTAMIN
36
INHALT
2.2.8
.A
AMPLIFIKATION
AIGF1R-A12-SIP-INSERTS
MITTELS
GRADIENTEN-PCR
36
2.2.8
.B
LIGATION
DES
PCDNA3.1
VEKTORS
UND
DES
ALGFLR-A12-SIP-FRAGMENT
37
2.2.8
.C
TRANSFORMATION
DES
PCDNA3.1
IRES-GFP/A12-SIP-PROTAMIN
IN
Z-KOMPETENTE
BAKTERIEN
39
2.2.8
.D
SEQUENZIERUNG
DES
PCDNA3.1
IRES-GFP/A12-SIP-PROTAMIN
KONSTRUKTES
41
2.2.9
PRODUKTION
DES
HUMANEN
OIGF1R-A12-SIP
42
2.2.9
.
A
KULTIVIERUNG
DER
CHO-S-ZELLEN
FUER
DIE
PRODUKTION
DES
OIGF1R-A12-SIP
43
2.2.9
.B
TRANSFEKTION
DER
CHO-S-ZELLEN
MIT
DEM
PLASMID
PCDNA3.1-IRES-GFP/A12-SIP
PROTAMIN
43
2.2.9
.C
AUFREINIGUNG
DES
ALGFLR-A12-SIP
MITTELS
HOCHLEISTUNGSFLUESSIGKEITSCHROMATOGRAFIE
(HPLC)
45
2.2.9
.D
SELEKTION
EINES
STABILE
OIGF1R-A12-SIP
PRODUKIONSKLONS
46
2.2.10
STATISTISCHE
ANALYSE
48
2.3
ZELLKULTUR
48
3.
ERGEBNISSE
50
3.1
REZEPTOREXPRESSIONSANALYSE
MITTELS
IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG
UND
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHER
AUS
WERTUNG
50
3.1.1
1273/99-,
CME--,
HS-SY-II
UND
SYO-I-ZELLEN
EXPRIMIEREN
IGFIR
50
3.1.2
1273/99-,
CME-1-,
HS-SY-II
UND
SYO-I-ZELLEN
EXPRIMIEREN
EGFR
52
3.2
NUTZUNG
DES
ALGFLR-MAB~A12VL
ZUR
TARGETIERUNG
VON
SYNOVIALSARKOMZELLEN
53
3.2.1
DER
ALGFLR-MAB-A12VL-PROTAMIN-KOMPLEX
BINDET
SIRNA
54
3.2.2
DER
ALGFLR-MAB-A12VL-PROTAMIN-SIRNA-ALEXA488-KOMPLEX
INTERNALISIERT
IN
SYNOVIALSARKOMZELLEN
56
3.2.3
ANTIPROLIFERATIVE
WIRKUNG
DER
ALGFLR-MAB-A12VL-PROTAMIN-SIRNA-SS18-SSX-BP
KOMPLEX-BEHANDLUNG
AUF
SYNOVIALSARKOMZELLEN
59
3.3
HERSTELLUNG
UND
ANALYSE
DES
ALGFLR-A12-SIP
63
3.3.1
KONZEPTION
VOM
ALGFLR-A12-SIP
63
3.3.2
PRODUKTION
VOM
ALGFLR-A12-SIP
67
3.4
NUTZUNG
DES
AEGFR-MAB-CETUXIMAB
ZUR
TARGETIERUNG
VON
SYNOVIALSARKOMZELLEN
70
3.4.1
DER
AEGFR-MAB-CETUXIMAB-PROTAMIN-KOMPLEX
BINDET
SIRNAS
70
3.4.2
DER
AEGFR-MAB-CETUXIMAB-PROTAMIN-KOMPLEX
INTERNALISIERT
IN
SYNOVIALSARKOMZELLEN
73
3.4.3
ANTIPROLIFERATIVE
WIRKUNG
DES
AEGFR-MAB-CETUXIMAB-PROTAMIN-SIRNA-SS18-SSX-BP
KOMPLEXES
AUF
SYNOVIALSARKOMZELLEN
76
3.4.4
DIE
AEGFR-MAB-CETUXIMAB-PROTAMIN-SIRNA-SS18-SSX-BP-KOMPLEX-BEHANDLUNG
FUEHRT
IN
SYO-I-ZELLEN
ZUM
SS18-SSX-KNOCKDOWN
79
II
INHALT
4.
DISKUSSION
82
4.1
DIE
RNAI-THERAPIE
ALS
ZIELGERICHTETE
THERAPIE
82
4.2
HERAUSFORDERUNGEN
DER
SYSTEMISCHEN
SIRNA-THERAPIE
83
4.3
DIE
ANTIKOERPER-VERMITTELTE
SIRNA-THERAPIE
IM
SYNOVIALSARKOM
87
4.3.1
DIE
IGFIR-VERMITTELTE
SIRNA-THERAPIE
IM
SYNOVIALSARKOM
88
4.3.2
DAS
IGFIR-ANTIKOERPERFRAGMENT
A12-SIP
90
4.3.3
DIE
EGFR-VERMITTELTE
SIRNA-THERAPIE
IM SYNOVIALSARKOM
92
4.4 ZUSAMMENFASSUNG
UND
AUSBLICK
94
5.
LITERATURVERZEICHNIS
97
6.
LEBENSLAUF
111
7.
DANKSAGUNG
113 |
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