Differentielle Zytokinfreisetzung von Harnwegsepithelien nach Infektion mit uropathogenen Escherichia coli-Stämmen:
Gespeichert in:
1. Verfasser: | |
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Format: | Abschlussarbeit Buch |
Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
Münster
2023
|
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Datensatz im Suchindex
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
.
1
1.1.
HARNWEGSINFEKTIONEN
.
1
1.2.
ESCHERICHIA
COLI
.
1
1.2.1.
UROPATHOGENE
ESCHERICHIA
COLI
UND
SEINE
VIRULENZFAKTOREN
.
2
1.2.1.1.
ADHAESINE
.
3
1.2.1.2.
FLAGELLEN
.
4
1.2.1.3.
EXO
UND
ENDOTOXINE
.
4
1.2.1.4.
IMMUNEVASION
UND
IMMUNMODULATION
.
5
1.3.
IMMUNSYSTEM
DES
HARNWEGSTRAKTES.
6
1.3.1.
UROEPITHELZELLEN
.
7
1.3.1.1.
ERKENNUNG
VON
UPEC
.
7
1.3.2.
UROEPITHELIALE
IMMUNANTWORT
AUF
PATHOGENERKENNUNG
.
8
1.3.2.1.
ZYTOKINE
.
11
1.3.2.2.
UNTERSCHIEDE
DER
ZYTOKIN-AUSSCHUETTUNG
BEI
OBERER
UND
UNTERER
HWI
.
14
1.4.
ZIEL
DER
ARBEIT
.
15
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
16
2.1.
MATERIAL
.
16
2.1.1.
VERWENDETE
EUKARYOTISCHE
ZELLLINIEN
.
16
2.1.2.
VERWENDETE
ESCHERICHIA
COLI
STAEMME
.
16
2.1.3.
LOESUNGEN,
PUFFER,
NAEHRMEDIEN
.
17
2.1.3.1.
ZELLKULTURMEDIEN
.
17
2.1.3.2.
NAEHRMEDIEN
FUER
EUKARYOTISCHE
ZELLEN
.
18
2.1.3.3,
NAEHRMEDIEN
FUER
BAKTERIEN
.
19
2.1.3.4.
LOESUNGEN
UND
PUFFER
FUER
DIE
GELELEKTROPHORESE
.
19
2.1.4.
OLIGONUKLEOTID-PRIMER
.
20
2.1.5.
CHEMIKALIEN
.
20
2.1.6.
MATERIALIEN
.
21
2.1.7.
GERAETE
.
22
2.1.8.
GEBRAUCHSFERTIGE
KITS
.
23
2.2.
METHODEN
.
24
2.2.1.
PHAENOTYPISIERUNG
DER
BAKTERIENSTAEMME
.
24
2.2.1.1.
HAEMOLYSEVERHALTEN
.
24
2.2.1.2.
MOTILITAETSASSAY
MITTELS
SCHWAERMAGAR
.
24
2.2.2.
ZELLKULTUR
.
24
2.2.2.1.
SUBKULTIVIERUNG
ADHAERENTER
ZELLEN
.
24
2.2.2.2.
AUSSAAT
DER
ZELLEN
.
25
2.2.3.
KULTIVIERUNG
VON
BAKTERIEN
.
26
2.2.3.1.
UEBERNACHTKULTUREN
(UEN-KULTUREN)
.
26
2.2.3.2.
QUANTIFIZIERUNG
DURCH
MESSUNG
DER
OPTISCHEN
DICHTE
.
26
2.2.3.3.
QUANTIFIZIERUNG
DURCH
BESTIMMUNG
DER
BAKTERIELLEN
LEBENDZELLZAHL
.
27
2.2.4.
KOKULTIVIERUNG
EUKARYOTISCHER
ZELLEN
UND
DER
BAKTERIEN
.
28
2.2.4.1.
INFEKTIONEN
MIT
VERSCHIEDENEN
FBS
KONZENTRATIONEN
.
28
2.2.4.2.
BAKTERIELLES
WACHSTUM
WAEHREND
DER
KOKULTIVIERUNG
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
DER
MENGE
AN
LB-MEDIUM
IM
UEBERSTAND
.
29
2.2.4.3.
ABNAHME
DES
UEBERSTANDES
.
29
2.2.5.
ZYTOKIN-QUANTIFIZIERUNG
MITTELS
ENZYME-LINKED-IMMUNOSORBENT
ASSAY
(ELISA)
.
29
2.2.6.
ZYTOKIN-QUANTIFIZIERUNG
MITTELS
BEAD-BASIERTEM
IMMUNOASSAY
(SSIOLEGEND
'
S
LEGENDPLEXYY)
.
30
2.2.7.
QUANTIFIZIERUNG
DER
MRNA
.
32
2.2.7.1.
RNA-ISOLATION
UND
DNA-ELIMINATION
MITTELS
DNASE
.
32
2.2.7.2.
QUALITAETSKONTROLLE
DER
RNA
.
33
2.2.7.3.
CDNA-SYNTHESE
UND
RT-QPCR
.
35
2.2.8.
STATISTISCHE
ANALYSEN
.
37
2.2.8.1.
QUANTIFIZIERUNG
DER
ZYTOKINKONZENTRATIONEN
.
37
2.2.8.2.
CLUSTER-ANALYSE
DER
ZYTOKINPROFILE
.
37
2.2.8.3.
QUANTIFIZIERUNG
DER
MRNA
.
38
3.
ERGEBNISSE
.
39
3.1.
PHAENOTYPISIERUNG
DER
BAKTERIEN
.
39
3.1.1.
HAEMOLYSEVERHALTEN
.
39
3.1.2.
MOTILITAET
DER
BAKTERIEN
.
39
3.2.
ETABLIERUNG
DES
INFEKTIONSMODELLS
.
40
3.2.1.
BAKTERIELLES
WACHSTUM
WAEHREND
DER
INFEKTION
.
40
3.2.2.
EINFLUSS
VON
CHARCOAL-STRIPPED
FBS
AUF
DIE
ZYTOKINSEKRETION.
41
3.2.3.
EINFLUSS
DER
INFEKTIONSDAUER
AUF
DIE
ZYTOKINSEKRETION
.
42
3.2.4.
EINFLUSS
DER
SERUMKONZENTRATION
AUF
DIE
ZYTOKINSEKRETION
.
44
3.3.
MESSUNG
DES
ZYTOKINPROFILS
NACH
INFEKTION
.
46
3.3.1.
VERGLEICHENDE
CLUSTER-ANALYSE
DER
ZYTOKINPROFILE
UNTERSCHIEDLICHER
ZELLLINIEN
.
47
3.3.2.
SEKRETIONSMUSTER
DER
ZELLLINIE
A-498
.
48
3.3.3.
SEKRETIONSMUSTER
DER
ZELLLINIE
CAKI-2
.
50
3.3.4.
SEKRETIONSMUSTER
DER
ZELLLINIE
RT-1
12
.
51
3.3.5.
SEKRETIONSMUSTER
DER
ZELLLINIE
5637
.
52
3.3.6.
SEKRETIONSMUSTER
DER
ZELLLINIE
T24
.
52
3.3.7.
VERGLEICH
DER
ZYTOKINSEKRETION
DER
VERSCHIEDENEN
ZELLLINIEN
NACH
INFEKTION
MIT
AUSGEWAEHLTEN
STAEMMEN
.
54
3.4.
QUANTIFIZIERUNG
DER
MRNA
NACH
INFEKTION
VON
T24
BLASENEPITHELZELLEN
.
57
4.
DISKUSSION
.
59
4.1.
DIE
AUSWAHL
DER
RICHTIGEN
INFEKTIONSBEDINGUNGEN.
59
4.2.
ZEITLICHER
VERLAUF
DER
ZYTOKINAUSSCHUETTUNG
.
62
4.2.1.
VERGLEICHBARKEIT
VON
MRNA-EXPRESSION
UND
PROTEINSEKRETION
.
62
4.3.
BAKTERIELLER
EINFLUSS
AUF
DIE
ZYTOKINSEKRETION
.
64
4.3.1.
EINFLUSS
DER
ISOLAT-HERKUNFT
.
65
4.3.2.
EINFLUSS
DER
VIRULENZFAKTOREN
TYP
1
-FIMBRIEN,
FLAGELLEN
UND
A
HAEMOLYSIN
.
66
4.4.
INHOMOGENE
REAKTIONEN
INNERHALB
VON
ZELLEN
GLEICHEN
URSPRUNGS
.
69
4.4.1.
BESONDERHEITEN
DES
T24
ZYTOKINPROFILS
.
70
4.4.2.
MUTATIONEN
UND
POLYMORPHISMEN
FUHREN
ZU
HETEROGENITAET
.
71
4.5.
SCHLUSSBETRACHTUNG
UND
AUSBLICK
.
71
5.
LITERATURVERZEICHNIS
.
75
DANKSAGUNG
.
87
LEBENSLAUF
.
88
ANHANG
.
1
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
I
GESAMTDATEN DER
MULTIPLEX-ZYTOKIN-ANALYSE
(MITTELWERTE,
N=3)
.
IV |
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