Zusammenspiel des Transkriptionsfaktors MYC und des Mikrophthalmie-assoziierten Transkriptionsfaktors (MITF) im malignen Melanom:
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Bonn
2022
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
5
1.
EINLEITUNG
7
1.1
MALIGNES
MELANOM
7
1.1.1
EPIDEMIOLOGIE,
SYMPTOMATIK,
DIAGNOSE,
THERAPIE,
PROGNOSE
7
1.1.2
PATHOGENESE,
HISTOPATHOLOGIE
9
1.2
BRAF-/MEK-INHIBITOREN
10
1.3
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
MYC
UND
MITF
12
1.4
FRAGESTELLUNG
15
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
16
2.1
MATERIALIEN
16
2.1.1
ZELLKULTURMEDIEN
UND
CHEMIKALIEN
16
2.1.2
ENZYME
17
2.1.3
PUFFER
17
2.1.4
ANTIKOERPER
18
2.1.5
PRIMER
FUER
RT-QPCR
19
2.1.6
INHIBITOREN
20
2.1.7
VERBRAUCHSMATERIALIEN
20
2.1.8
GERAETE
20
2.1.9
ZELLLINIEN
21
2.2
METHODEN
21
2.2.1
ZELLKULTUR
21
2.2.1.1
MELANOMZELLLINIEN
22
2.2.2
KOLONIEBILDUNGSTEST
(COLONY
FORMATION
ASSAY)
22
2.2.3
WESTERN-BLOT
ANALYSE
22
2.2.4
INDIREKTE
IMMUNFLUORESZENZ-FAERBUNG
24
2.2.5
REVERSE
TRANSKRIPTASE
QUANTITATIVE
POLYMERASEKETTENREAKTION
25
2.2.6
SIRNS-INDUZIERTER
MRNS-KNOCKDOWN
26
2.2.7
ZELL-T
RANSFEKTIONEN
27
2.2.8
STATISTISCHE
ANALYSEN
28
4
3.
ERGEBNISSE
29
3.1
MYC
UND
MITF
WERDEN
UEBERWIEGEND
KOEXPRIMIERT
29
3.2
EINFLUSS
VON
MEK
BZW.
BRAF-INHIBITOREN
AUF
UNTERSCHIEDLICHE
MELANOMZELLLINIEN
31
3.2.1
TRAMETINIB
HEMMT
MELANOMZELLPROLIFERATION
32
3.2.2
TRAMETINIB
FUEHRT
ZU
MYC-DEGRADATION
AUF
MRNS
UND
PROTEINEBENE
SOWIE
ABNAHME
VON
P-ERK
AUF
PROTEINEBENE
32
3.2.3
AUCH
BRAF-INHIBITOREN
BEWIRKEN
MYC-DEGRADATION
UND
ABNAHME
VON
P-ERK
AUF
PROTEINEBENE
36
3.2.4
KANN
HGF
BRAF-BLOCKADE
TEILKOMPENSIEREN?
39
3.3
SIRNS-INDUZIERTER
MRNS-KNOCKDOWN
VON
MYC
BZW.
MITF
41
3.3.1
MITFHIGH-LINIEN
WEISEN
MITF-ABHAENGIGE
PROLIFERATION
AUF,
MITF
L0W
-ZELLLINIEN
KOENNEN
MITF-UNABHAENGIG
PROLIFERIEREN
41
3.3.2
SIRNS
VERMITTELTER
MYC-KNOCKDOWN
FUEHRT
IN
MITFLOW.
UND
MITFHIGH-ZELLLINIEN
ZUM
WACHSTUMSARREST
50
3.4
WECHSELSEITIGE
BEEINFLUSSUNG
VON
MYC
UND
MITF-EXPRESSION
55
3.5
KANN
MYC
UEBEREXPRESSION
MITF-KNOCKDOWN
TEILKOMPENSIEREN?
59
4.
DISKUSSION
67
4.1
SOWOHL
HGF-EXPOSITION
ALS
AUCH
MYC-UEBEREXPRESSION
BEWIRKEN
GERINGERE
P-ERK-ABNAHME
NACH
BRAF-BLOCKADE,
MERKMAL
EINER
REAKTIVIERUNG
DES
MAPK-SIGNALWEGS
67
4.2
ROLLE
VON
MYC
FUER
PROLIFERATION
UND
WACHSTUM
VON
MELANOMZELLEN
68
4.3
ESSENTIELLE
ROLLE
VON
MITF
FUER
DIFFERENZIERUNG
UND
PROLIFERATION
VON
MITFHIGH.
JEDOCH
NICHT
MITF
|OW
-MELANOMZELLLINIEN
69
4.4
GIBT
ES
EINE
MYC-MITF
INTERAKTION
IN
MELANOMZELLEN?
71
5.
ZUSAMMENFASSUNG
74
6.
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
76
7.
TABELLENVERZEICHNIS
79
8.
LITERATURVERZEICHNIS
80
9.
DANKSAGUNG
94
|
| adam_txt |
3
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
5
1.
EINLEITUNG
7
1.1
MALIGNES
MELANOM
7
1.1.1
EPIDEMIOLOGIE,
SYMPTOMATIK,
DIAGNOSE,
THERAPIE,
PROGNOSE
7
1.1.2
PATHOGENESE,
HISTOPATHOLOGIE
9
1.2
BRAF-/MEK-INHIBITOREN
10
1.3
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
MYC
UND
MITF
12
1.4
FRAGESTELLUNG
15
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
16
2.1
MATERIALIEN
16
2.1.1
ZELLKULTURMEDIEN
UND
CHEMIKALIEN
16
2.1.2
ENZYME
17
2.1.3
PUFFER
17
2.1.4
ANTIKOERPER
18
2.1.5
PRIMER
FUER
RT-QPCR
19
2.1.6
INHIBITOREN
20
2.1.7
VERBRAUCHSMATERIALIEN
20
2.1.8
GERAETE
20
2.1.9
ZELLLINIEN
21
2.2
METHODEN
21
2.2.1
ZELLKULTUR
21
2.2.1.1
MELANOMZELLLINIEN
22
2.2.2
KOLONIEBILDUNGSTEST
(COLONY
FORMATION
ASSAY)
22
2.2.3
WESTERN-BLOT
ANALYSE
22
2.2.4
INDIREKTE
IMMUNFLUORESZENZ-FAERBUNG
24
2.2.5
REVERSE
TRANSKRIPTASE
QUANTITATIVE
POLYMERASEKETTENREAKTION
25
2.2.6
SIRNS-INDUZIERTER
MRNS-KNOCKDOWN
26
2.2.7
ZELL-T
RANSFEKTIONEN
27
2.2.8
STATISTISCHE
ANALYSEN
28
4
3.
ERGEBNISSE
29
3.1
MYC
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MITF
WERDEN
UEBERWIEGEND
KOEXPRIMIERT
29
3.2
EINFLUSS
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MEK
BZW.
BRAF-INHIBITOREN
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UNTERSCHIEDLICHE
MELANOMZELLLINIEN
31
3.2.1
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32
3.2.2
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32
3.2.3
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ABNAHME
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36
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HGF
BRAF-BLOCKADE
TEILKOMPENSIEREN?
39
3.3
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BZW.
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41
3.3.1
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PROLIFERATION
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41
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VERMITTELTER
MYC-KNOCKDOWN
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MITFLOW.
UND
MITFHIGH-ZELLLINIEN
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WACHSTUMSARREST
50
3.4
WECHSELSEITIGE
BEEINFLUSSUNG
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MITF-EXPRESSION
55
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MYC
UEBEREXPRESSION
MITF-KNOCKDOWN
TEILKOMPENSIEREN?
59
4.
DISKUSSION
67
4.1
SOWOHL
HGF-EXPOSITION
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AUCH
MYC-UEBEREXPRESSION
BEWIRKEN
GERINGERE
P-ERK-ABNAHME
NACH
BRAF-BLOCKADE,
MERKMAL
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REAKTIVIERUNG
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MAPK-SIGNALWEGS
67
4.2
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MYC
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PROLIFERATION
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WACHSTUM
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MELANOMZELLEN
68
4.3
ESSENTIELLE
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DIFFERENZIERUNG
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PROLIFERATION
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MITFHIGH.
JEDOCH
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MITF
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-MELANOMZELLLINIEN
69
4.4
GIBT
ES
EINE
MYC-MITF
INTERAKTION
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MELANOMZELLEN?
71
5.
ZUSAMMENFASSUNG
74
6.
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
76
7.
TABELLENVERZEICHNIS
79
8.
LITERATURVERZEICHNIS
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