Charakterisierung genetisch modifizierter Pigmentepithelzellen nach SB100X vermittelter Transfektion mit dem Gen für Brain-Derived-Neurotrophic-Factor:
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Aachen
[2022]
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|---|---|
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ABBILDUNGSVERZEICHNIS
........................................................................................................
IV
TABELLENVERZEICHNIS
............................................................................................................
VI
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.....................................................................................................
VII
1.
EINLEITUNG
.........................................................................................................................
1
1.1
HINTERGRUND
DER
ARBEIT
...............................................................................................
1
1.2
ALTERSBEDINGTE
MAKULADEGENERATION
(AMD)
..............................................................
3
1.3
GENTHERAPEUTISCHE
BEHANDLUNGSSTRATEGIEN
...............................................................
8
1.3.1
VEKTOREN
UND
VEKTORSYSTEME
GENTHERAPEUTISCHER
BEHANDLUNGSSTRATEGIEN
....
10
1.3.1.1
VIRALE
VEKTORSYSTEME
.....................................................................................
11
1.3.1.2
NICHT-VIRALE
VEKTORSYSTEME
...........................................................................
12
1.4
DAS
SLEEPING
BEAUTY-TRANSPOSONSYSTEM
(SB100X)
..............................................
14
1.5
KLINISCHE
IMPLEMENTIERUNG
DES
SLEEPING
BEAUTY-TRANSPOSONSYSTEMS
IN
DER
THERAPIE
DER
AMD
......................................................................................................
17
1.6
BRAIN-DERIVED
NEUROTROPHIC
FACTOR
(BDNF)
...............................................................
19
1.7
ZIELSETZUNG
.................................................................................................................
22
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
................................................................................................
23
2.1
MATERIALIEN
................................................................................................................
23
2.2
.
METHODEN
..........................................................................................................
26
2.2.1
KULTIVIERUNG
VON
ARPE-19
ZELLEN
..........................................................................
26
2.2.2
ISOLIERUNG
UND
KULTIVIERUNG
PRIMAERER
HUMANER
RPE
ZELLEN
...............................
27
2.2.3
..............................................................................................................................
27
2.2.4
TRANSFEKTION
VON
ARPE-19
ZELLEN
UND
HRPE
ZELLEN
.............................................
28
2.2.5
ANALYSE
DES
PROLIFERATIONSVERHALTENS
VON
ARPE-19-ZELLEN
NACH
TRANSFEKTION..
30
2.2.6
VITALITAETSTEST
VON
ARPE-19
ZELLEN
NACH
TRANSFEKTION
.........................................
31
2.2.7
PROTEINREINIGUNG
..................................................................................................
32
2.2.8
SDS-PAGE
.............................................................................................................
33
2.2.9
WESTERN
BLOT
........................................................................................................
34
2.2.10
ELISA-BASIERTE
QUANTIFIZIERUNG
DER
GESAMTEN
BDNF-SEZERNIERUNG
.................
36
2.2.11
ISOLIERUNG
VON
RNA
UND
REVERSE
TRANSKRIPTION
................................................
37
2.2.12
BESTIMMUNG
DER
NUKLEINSAEURE-KONZENTRATION
.................................................
37
CHARAKTERISIERUNG
GENETISCH
MODIFIZIERTER
PIGMENTEPITHELZELLEN
NACH
SB100X
VERMITTELTER
TRANSFEKTION
MIT
DEM
GEN
FUER
BRAIN-DERIVED-NEUROTROPHIC-FACTOR
2.2.13
QUANTITATIVE
REAL-TIME
PCR
...............................................................................
38
2.2.14
STATISTISCHE
ANALYSE
............................................................................................
39
3.
ERGEBNISSE
.......................................................................................................................
40
3.1
.
BESTIMMUNG
DES
OPTIMALEN
VERHAELTNIS
VON
SB100X-TRANSPOSASE
ZU
..................................................................................................................................40
3.2
SEKRETIONS
UND
GENEXPRESSIONSDYNAMIK
VON
BDNF-TRANSFIZIERTEN
ARPE-19
ZELLEN
...........................................................................................................
42
3.2.1
NACHWEIS
UND
QUANTIFIZIERUNG DER
BDNF
SEZERNIERUNG
IN
TRANSFIZIERTEN
ARPE-19
ZELLEN
......................................................................................................
42
3.2.2
NACHWEIS
UND
QUANTIFIZIERUNG DER
BDNF
GENEXPRESSION
IN
TRANSFIZIERTEN
ARPE-19
ZELLEN
......................................................................................................
45
3.3
ZELLWACHSTUM
UND
VITALITAET
VON
BDNF-TRANSFIZIERTEN
ARPE-19
ZELLEN
....................
46
3.3.1
UNTERSUCHUNG
DES
ZELLWACHSTUMS
VON
ARPE-19
ZELLEN
NACH
.....................................................................................................................
46
3.3.2
UNTERSUCHUNG
DER
ZELLVITALITAET
NACH
BD/VF-TRANSFEKTION...................................
49
3.3.3
NACHWEIS
UND
QUANTIFIZIERUNG DER
BDNF
SEZERNIERUNG
UND
BDNF
GENEXPRESSION
............................................................................................
50
3.4
SEKRETIONS
UND
GENEXPRESSIONSDYNAMIK
VON
BDNF-TRANSFIZIERTEN
HRPE-ZELLEN...
52
3.4.1
NACHWEIS
UND
QUANTIFIZIERUNG
DER
BDNF
SEZERNIERUNG
IN
TRANSFIZIERTEN
HRPE-ZELLEN
..........................................................................................................
52
3.4.2
NACHWEIS
UND
QUANTIFIZIERUNG DER
BDNF
GENEXPRESSION
IN
TRANSFIZIERTEN
HRPE-ZELLEN
...........................................................................................................
55
4.
DISKUSSION
.......................................................................................................................
57
5.
ZUSAMMENFASSUNG
..........................................................................................................
69
6.
LITERATURVERZEICHNIS
........................................................................................................
71
DANKSAGUNG
.........................................................................................................................
83
LEBENSLAUF
...........................................................................................................................
87
|
| adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
.
IV
TABELLENVERZEICHNIS
.
VI
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
VII
1.
EINLEITUNG
.
1
1.1
HINTERGRUND
DER
ARBEIT
.
1
1.2
ALTERSBEDINGTE
MAKULADEGENERATION
(AMD)
.
3
1.3
GENTHERAPEUTISCHE
BEHANDLUNGSSTRATEGIEN
.
8
1.3.1
VEKTOREN
UND
VEKTORSYSTEME
GENTHERAPEUTISCHER
BEHANDLUNGSSTRATEGIEN
.
10
1.3.1.1
VIRALE
VEKTORSYSTEME
.
11
1.3.1.2
NICHT-VIRALE
VEKTORSYSTEME
.
12
1.4
DAS
SLEEPING
BEAUTY-TRANSPOSONSYSTEM
(SB100X)
.
14
1.5
KLINISCHE
IMPLEMENTIERUNG
DES
SLEEPING
BEAUTY-TRANSPOSONSYSTEMS
IN
DER
THERAPIE
DER
AMD
.
17
1.6
BRAIN-DERIVED
NEUROTROPHIC
FACTOR
(BDNF)
.
19
1.7
ZIELSETZUNG
.
22
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
23
2.1
MATERIALIEN
.
23
2.2
.
METHODEN
.
26
2.2.1
KULTIVIERUNG
VON
ARPE-19
ZELLEN
.
26
2.2.2
ISOLIERUNG
UND
KULTIVIERUNG
PRIMAERER
HUMANER
RPE
ZELLEN
.
27
2.2.3
.
27
2.2.4
TRANSFEKTION
VON
ARPE-19
ZELLEN
UND
HRPE
ZELLEN
.
28
2.2.5
ANALYSE
DES
PROLIFERATIONSVERHALTENS
VON
ARPE-19-ZELLEN
NACH
TRANSFEKTION.
30
2.2.6
VITALITAETSTEST
VON
ARPE-19
ZELLEN
NACH
TRANSFEKTION
.
31
2.2.7
PROTEINREINIGUNG
.
32
2.2.8
SDS-PAGE
.
33
2.2.9
WESTERN
BLOT
.
34
2.2.10
ELISA-BASIERTE
QUANTIFIZIERUNG
DER
GESAMTEN
BDNF-SEZERNIERUNG
.
36
2.2.11
ISOLIERUNG
VON
RNA
UND
REVERSE
TRANSKRIPTION
.
37
2.2.12
BESTIMMUNG
DER
NUKLEINSAEURE-KONZENTRATION
.
37
CHARAKTERISIERUNG
GENETISCH
MODIFIZIERTER
PIGMENTEPITHELZELLEN
NACH
SB100X
VERMITTELTER
TRANSFEKTION
MIT
DEM
GEN
FUER
BRAIN-DERIVED-NEUROTROPHIC-FACTOR
2.2.13
QUANTITATIVE
REAL-TIME
PCR
.
38
2.2.14
STATISTISCHE
ANALYSE
.
39
3.
ERGEBNISSE
.
40
3.1
.
BESTIMMUNG
DES
OPTIMALEN
VERHAELTNIS
VON
SB100X-TRANSPOSASE
ZU
.40
3.2
SEKRETIONS
UND
GENEXPRESSIONSDYNAMIK
VON
BDNF-TRANSFIZIERTEN
ARPE-19
ZELLEN
.
42
3.2.1
NACHWEIS
UND
QUANTIFIZIERUNG DER
BDNF
SEZERNIERUNG
IN
TRANSFIZIERTEN
ARPE-19
ZELLEN
.
42
3.2.2
NACHWEIS
UND
QUANTIFIZIERUNG DER
BDNF
GENEXPRESSION
IN
TRANSFIZIERTEN
ARPE-19
ZELLEN
.
45
3.3
ZELLWACHSTUM
UND
VITALITAET
VON
BDNF-TRANSFIZIERTEN
ARPE-19
ZELLEN
.
46
3.3.1
UNTERSUCHUNG
DES
ZELLWACHSTUMS
VON
ARPE-19
ZELLEN
NACH
.
46
3.3.2
UNTERSUCHUNG
DER
ZELLVITALITAET
NACH
BD/VF-TRANSFEKTION.
49
3.3.3
NACHWEIS
UND
QUANTIFIZIERUNG DER
BDNF
SEZERNIERUNG
UND
BDNF
GENEXPRESSION
.
50
3.4
SEKRETIONS
UND
GENEXPRESSIONSDYNAMIK
VON
BDNF-TRANSFIZIERTEN
HRPE-ZELLEN.
52
3.4.1
NACHWEIS
UND
QUANTIFIZIERUNG
DER
BDNF
SEZERNIERUNG
IN
TRANSFIZIERTEN
HRPE-ZELLEN
.
52
3.4.2
NACHWEIS
UND
QUANTIFIZIERUNG DER
BDNF
GENEXPRESSION
IN
TRANSFIZIERTEN
HRPE-ZELLEN
.
55
4.
DISKUSSION
.
57
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
69
6.
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.
71
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.
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| spelling | Otten, Katrin 1993- Verfasser (DE-588)1280004312 aut Charakterisierung genetisch modifizierter Pigmentepithelzellen nach SB100X vermittelter Transfektion mit dem Gen für Brain-Derived-Neurotrophic-Factor vorgelegt von Katrin Otten Aachen [2022] VIII, 86 Seiten Illustrationen, Diagramme 21 cm txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Dissertation Rheinisch-Westfälische Technische Hochschule Aachen 2022 2\p Transfektion (DE-588)4185874-8 gnd 3\p Brain-derived neurotrophic factor (DE-588)4291642-2 gnd 4\p Genexpression (DE-588)4020136-3 gnd (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content B:DE-101 application/pdf https://d-nb.info/1283035901/04 Inhaltsverzeichnis DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=034810213&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis 1\p dnb 20230530 DE-101 https://d-nb.info/provenance/plan#dnb 2\p emagnd 0,22235 20230529 DE-101 https://d-nb.info/provenance/plan#emagnd 3\p emagnd 0,21978 20230529 DE-101 https://d-nb.info/provenance/plan#emagnd 4\p emagnd 0,09947 20230529 DE-101 https://d-nb.info/provenance/plan#emagnd |
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