Verfügbarkeit: Die Bedeutung der Gene cldn5b, eif4ebp3l und her6 bei der Herzregeneration des Zebrabärblings und deren Rolle bei Revaskularisation

Die Bedeutung der Gene cldn5b, eif4ebp3l und her6 bei der Herzregeneration des Zebrabärblings und deren Rolle bei Revaskularisation:

Gespeichert in:

Bibliographische Detailangaben
1. Verfasser:	Andree, Theresa 1993- (VerfasserIn)
Format:	Abschlussarbeit Buch
Sprache:	German
Veröffentlicht:	Freiburg im Breisgau [2023]
Schlagworte:	Angiogenese Genexpression Tiermodell Hochschulschrift
Online-Zugang:	Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis
Beschreibung:	IX, 104, II-XXI Blätter Illustrationen, Diagramme 30 cm

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adam_text	INHALTSVERZEICHNIS I INHALTSVERZEICHNIS ABKUERZUNGSVERZEICHNIS....................................................................................................... VI 1 EINLEITUNG ............................................................................................... 1 1.1 MYOKARDINFARKT IM MENSCHEN.................................................................................... 1 1.1.1 PATHOPHYSIOLOGIE ............................................................................................... 1 1.1.2 AKTUELLE THERAPIEOPTIONEN UND NEUE THERAPIEANSAETZE ..................................... 2 1.2 LIMITIERTE REGENERATIONSFAEHIGKEIT VON HERZEN DER SAEUGETIERE .................................. 4 1.3 DER ZEBRABAERBLING ALS MODELLORGANISMUS................................................................ 5 1.3.1 GEFAESSENTSTEHUNG ............................................................................................. 6 1.3.2 KARDIALE REGENERATIONSFAEHIGKEIT....................................................................... 9 1.3.2.1 REVASKULARISATION - ESSENTIELL FUER DIE REGENERATION .................................... 12 1.4 ENDOTHELSPEZIFISCHE GENKANDIDATEN ...................................................................... 13 1.4.1 IDENTIFIKATION MOEGLICHER GENKANDIDATEN ......................................................... 13 1.4.2 CHARAKTERISIERUNG DER GENKANDIDATEN............................................................ 14 1.4.2.1 TRANSMEMBRANPROTEIN CLDN5B .................................................................... 14 1.4.2.1.1 AUFBAU UND FUNKTION DER CLAUDINE ....................................................... 14 1.4.2.1.2 BEDEUTUNG VON CLDN5/CLDN5 IM HERZ UND IN GEFAESSEN ........................ 14 1.4.2.2 T RANSLATIONSREPRESSOR EIF4EBP3L ................................................................. 16 1.4.2.2.1 AUFBAU, FUNKTION UND REGULATION ......................................................... 16 1 .4.2.2.2 ELF4E IN ANGIOGENESE UND AKUTER MYOKARDIALER ISCHAEMIE ................... 17 1.4.2.2.3 EINFLUSS VON EIF4EBP3L AUF DAS MUSKELWACHSTUM IM ZEBRABAERBLING .... 18 1.4.2.3 T RANSKRIPTIONSREPRESSOR HER6 .................................................................... 19 1.4.2.3.1 HER6/HES1 - EIN BASIC HELIX-LOOP-HELIX PROTEIN ................................... 19 1 .4.2.3.2 HER6/HES1 IN DER ENTWICKLUNG ............................................................ 19 1.4.2.3.3 BEDEUTUNG VON HES1/NOTCH IM HERZ UND KARDIALEN ZELLEN .................. 20 1.5 ZIELSETZUNG DER ARBEIT ............................................................................................ 21 INHALTSVERZEICHNIS II 2 MATERIAL ......................................................................................................................... 22 2.1 GERAETE UND GEBRAUCHSGEGENSTAENDE ...................................................................... 22 2.2 VERBRAUCHSMATERIALIEN............................................................................................ 25 2.3 CHEMIKALIEN UND REAGENZIEN................................................................................. 26 2.4 PUFFER UND LOESUNGEN .............................................................................................. 30 2.4.1 FISCHHALTUNG .................................................................................................... 30 2.4.2 AFOG-FAERBUNG ............................................................................................... 30 2.4.3 WHOLE MOUNT IN SITU HYBRIDISIERUNG (WISH) .................................................... 30 2.4.4 IN-SITU-HYBRIDISIERUNG (ISH ) AUF SCHNITTEN ....................................................... 31 2.4.5 GFP-IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG ...................................................................... 33 2.4.6 MOLEKULARBIOLOGIE............................................................................................ 33 2.4.6.1 AGAROSEGELE ................................................................................................. 33 2.5 KITS ........................................................................................................................ 34 2.6 BAKTERIENSTAEMME UND NAEHRMEDIEN ............................................................................... 34 2.7 PLASMIDE ................................................................................................................. 35 2.8 OLIGONUKLEOTIDE ....................................................................................................... 35 2.8.1 PRIMER ............................................................................................................. 35 2.8.2 MORPHOLINOS .................................................................................................... 36 2.9 ENZYME................................................................................................................... 36 2.10 ANTIKOERPER ............................................................................................................... 37 2.11 FISCHLINIEN ............................................................................................................... 37 2.12 SOFTWARE ................................................................................................................. 37 3 METHODEN ..................................................................................................................... 39 3.1 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN ............................................................................. 39 3.1.1 RN A-ISOLATION ................................................................................................. 39 3.1.2 CDNA-SYNTHESE .............................................................................................. 39 3.1.3 POLYMERASE-KETTENREAKTION ............................................................................ 40 3.1.4 GELELEKTROPHORESE .......................................................................................... 41 INHALTSVERZEICHNIS III 3.1.5 KLONIERUNG VON PCR FRAGMENTEN IN VEKTOREN ................................................ 41 3.1.5.1 TRANSFORMATION IN CHEMOKOMPETENTE BAKTERIEN ......................................... 41 3.1.5.2 AMPLIFIKATION UND PLASMIDAUFREINIGUNG .......................................................42 3.1.5.3 ANALYTISCHE RESTRIKTIONSVERDAUE................................................................. 42 3.1.5.4 UMKLONIERUNG DURCH LIGATION ......................................................................43 3.1.6 GENERIERUNG DER SONDEN ................................................................................43 3.1.7 TOL2 TRANSPOSON SYSTEM - GENERIERUNG VON EXPRESSIONSKONSTRUKTEN........... 45 3.1.7.1 AMPLIFIKATION DER OPEN READING FRAMES VON EIF4 UND HERSS .........................46 3.1.7.2 KLONIERUNG IN PCR2.1-TOPO-VEKTOR........................................................... 47 3.1.7.3 BLAU-WEISS-SELEKTION NACH TRANSFORMATION DER PLASMIDE IN CHEMOKOMPETENTE BAKTERIEN ..................................................................................... 47 3.1.7.4 AMPLIFIKATION VON AFF-S/FE-PCR-PRODUKTEN ................................................. 47 3.1.7.5 BP-REAKTION UND LR-REAKTION................................................................... 48 3.1.8 HERSTELLUNG VON MRNA ................................................................................... 49 3.1.8.1 TRANSKRIPTION DER MRNA ............................................................................ 50 3.2 ZEBRABAERBLINGSSPEZIFISCHE METHODEN ............................................................ 50 3.2.1 ETHIK ................................................................................................................ 50 3.2.2 ZEBRABAERBLINGSZUCHT UND HALTUNG ................................................................... 50 3.2.3 MIKROINJEKTIONEN IN ZEBRAFISCHEIER ................................................................. 51 3.2.3.1 MORPHOLINO UND MRNA-MIKROINJEKTIONEN .................................................. 52 3.2.3.2 MIKROINJEKTION DER EXPRESSIONSKONSTRUKTE DES TOL2-SYSTEMS..................... 53 3.2.3.2. 1 HITZESCHOCKINDUKTION........................................................................... 53 3.2.4 OPERATIONSVERFAHREN CRYOINJURY...................................................................... 53 3.3 HISTOLOGISCHE METHODEN ........................................................................................ 54 3.3.1 FIXIERUNG VON ZEBRABAERBLINGSEMBRYONEN ....................................................... 54 3.3.2 FIXIERUNG UND HERSTELLUNG VON GEFRIERSCHNITTEN DER ZEBRABAERBLINGSHERZEN ... 54 3.3.3 AFOG-FAERBUNG .............................................................................................. 55 3.3.4 IN-SITU-HYBRIDISIERUNG...................................................................................... 55 INHALTSVERZEICHNIS IV 3.3.4.1 WHOLE-MOUNT-IN-SITU-HYBRIDISIERUNG ............................................................ 55 3.3.4.2 IN-SITU-HYBRIDISIERUNG AUF SCHNITTEN ............................................................ 57 3.3.5 ANTI-GFP-DOPPELFAERBUNG ................................................................................. 58 3.4 MIKROSKOPIE ........................................................................................................... 59 3.4.1 BINOKULARMIKROSKOPIE ..................................................................................................... 59 3.4.2 AUFLICHTMIKROSKOPIE & FLUORESZENZMIKROSKOPIE .............................................. 59 3.4.3 INVERSE MIKROSKOPIE 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RNA-SONDE CLDN5B ..................................................................................... 69 4.2.2.2 RNA-SONDE EIF4EBP3L ................................................................................. 70 4.2.2.3 RNA-SONDE HER6 ........................................................................................ 70 4.2.3 EXPRESSIONSANALYSE DER GENKANDIDATEN IM ZEBRAFISCHHERZ NACH CRYOINJURY 71 4.2.3.1 GENEXPRESSIONSMUSTER VON CLDN5B ............................................................ 71 4.2.3.2 GENEXPRESSIONSMUSTER VON EIF4EBP3L ........................................................ 74 4.2.3.3 GENEXPRESSIONSMUSTER VON HER6 ................................................................ 75 4.2.4 UNTERSUCHUNG AUF ENDOTHELSPEZIFITAET DER GENEXPRESSION ............................... 77 4.2.4.1 ENDOTHELSPEZIFITAET VON CLDN5B ..................................................................... 78 4.2.4.2 ENDOTHELSPEZIFITAET VON HERSS 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II 8 LITERATURVERZEICHNIS ...................................................................................................... III 9 ABBILDUNGSVERZEICHNIS .............................................................................................. XIII 10 TABELLENVERZEICHNIS .............................................................................................. XV 11 ANHANG ................................................................................................................... XVI PUBLIKATIONEN................................................................................................................... XVI CURRICULUM VITAE ............................................................................................................. XVII EIDESSTATTLICHE VERSICHERUNG ........................................................................................... XIX ERKLAERUNG ZUM EIGENANTEIL ............................................................................................... XX DANKSAGUNG .................................................................................................................... XXI
adam_txt	INHALTSVERZEICHNIS I INHALTSVERZEICHNIS ABKUERZUNGSVERZEICHNIS. VI 1 EINLEITUNG . 1 1.1 MYOKARDINFARKT IM MENSCHEN. 1 1.1.1 PATHOPHYSIOLOGIE . 1 1.1.2 AKTUELLE THERAPIEOPTIONEN UND NEUE THERAPIEANSAETZE . 2 1.2 LIMITIERTE REGENERATIONSFAEHIGKEIT VON HERZEN DER SAEUGETIERE . 4 1.3 DER ZEBRABAERBLING ALS MODELLORGANISMUS. 5 1.3.1 GEFAESSENTSTEHUNG . 6 1.3.2 KARDIALE REGENERATIONSFAEHIGKEIT. 9 1.3.2.1 REVASKULARISATION - ESSENTIELL FUER DIE REGENERATION . 12 1.4 ENDOTHELSPEZIFISCHE GENKANDIDATEN . 13 1.4.1 IDENTIFIKATION MOEGLICHER GENKANDIDATEN . 13 1.4.2 CHARAKTERISIERUNG DER GENKANDIDATEN. 14 1.4.2.1 TRANSMEMBRANPROTEIN CLDN5B . 14 1.4.2.1.1 AUFBAU UND FUNKTION DER CLAUDINE . 14 1.4.2.1.2 BEDEUTUNG VON CLDN5/CLDN5 IM HERZ UND IN GEFAESSEN . 14 1.4.2.2 T RANSLATIONSREPRESSOR EIF4EBP3L . 16 1.4.2.2.1 AUFBAU, FUNKTION UND REGULATION . 16 1 .4.2.2.2 ELF4E IN ANGIOGENESE UND AKUTER MYOKARDIALER ISCHAEMIE . 17 1.4.2.2.3 EINFLUSS VON EIF4EBP3L AUF DAS MUSKELWACHSTUM IM ZEBRABAERBLING . 18 1.4.2.3 T RANSKRIPTIONSREPRESSOR HER6 . 19 1.4.2.3.1 HER6/HES1 - EIN BASIC HELIX-LOOP-HELIX PROTEIN . 19 1 .4.2.3.2 HER6/HES1 IN DER ENTWICKLUNG . 19 1.4.2.3.3 BEDEUTUNG VON HES1/NOTCH IM HERZ UND KARDIALEN ZELLEN . 20 1.5 ZIELSETZUNG DER ARBEIT . 21 INHALTSVERZEICHNIS II 2 MATERIAL . 22 2.1 GERAETE UND GEBRAUCHSGEGENSTAENDE . 22 2.2 VERBRAUCHSMATERIALIEN. 25 2.3 CHEMIKALIEN UND REAGENZIEN. 26 2.4 PUFFER UND LOESUNGEN . 30 2.4.1 FISCHHALTUNG . 30 2.4.2 AFOG-FAERBUNG . 30 2.4.3 WHOLE MOUNT IN SITU HYBRIDISIERUNG (WISH) . 30 2.4.4 IN-SITU-HYBRIDISIERUNG (ISH ) AUF SCHNITTEN . 31 2.4.5 GFP-IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG . 33 2.4.6 MOLEKULARBIOLOGIE. 33 2.4.6.1 AGAROSEGELE . 33 2.5 KITS . 34 2.6 BAKTERIENSTAEMME UND NAEHRMEDIEN . 34 2.7 PLASMIDE . 35 2.8 OLIGONUKLEOTIDE . 35 2.8.1 PRIMER . 35 2.8.2 MORPHOLINOS . 36 2.9 ENZYME. 36 2.10 ANTIKOERPER . 37 2.11 FISCHLINIEN . 37 2.12 SOFTWARE . 37 3 METHODEN . 39 3.1 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN . 39 3.1.1 RN A-ISOLATION . 39 3.1.2 CDNA-SYNTHESE . 39 3.1.3 POLYMERASE-KETTENREAKTION . 40 3.1.4 GELELEKTROPHORESE . 41 INHALTSVERZEICHNIS III 3.1.5 KLONIERUNG VON PCR FRAGMENTEN IN VEKTOREN . 41 3.1.5.1 TRANSFORMATION IN CHEMOKOMPETENTE BAKTERIEN . 41 3.1.5.2 AMPLIFIKATION UND PLASMIDAUFREINIGUNG .42 3.1.5.3 ANALYTISCHE RESTRIKTIONSVERDAUE. 42 3.1.5.4 UMKLONIERUNG DURCH LIGATION .43 3.1.6 GENERIERUNG DER SONDEN .43 3.1.7 TOL2 TRANSPOSON SYSTEM - 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II 8 LITERATURVERZEICHNIS . III 9 ABBILDUNGSVERZEICHNIS . XIII 10 TABELLENVERZEICHNIS . XV 11 ANHANG . XVI PUBLIKATIONEN. XVI CURRICULUM VITAE . XVII EIDESSTATTLICHE VERSICHERUNG . XIX ERKLAERUNG ZUM EIGENANTEIL . XX DANKSAGUNG . XXI
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