Charakterisierung der Funktion von miR-100 in Kardiomyozyten anhand von in-vivo- und in-vitro-Modellen:
Gespeichert in:
1. Verfasser: | |
---|---|
Format: | Abschlussarbeit Buch |
Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
Freiburg im Breisgau
[2021]
|
Schlagworte: | |
Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis |
Beschreibung: | III, 89 Blätter, Blatt IV-XXV Illustrationen, Diagramme 30 cm |
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---|---|
adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
1
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
1
2
EINLEITUNG
5
2.1
DAS
SYNDROM
HERZINSUFFIZIENZ
5
2.1.1
DEFINITION
UND
KLINIK
DER
CHRONISCHEN
HERZINSUFFIZIENZ
5
2.1.2
AETIOLOGIE
UND
EPIDEMIOLOGIE
7
2.2
FUNKTIONELLE
PATHOPHYSIOLOGIE
DER
CHRONISCHEN
LINKSHERZINSUFFIZIENZ
8
2.2.1
SYSTOLISCHE
VENTRIKELFUNKTIONSSTOERUNG
9
2.2.2
DIASTOLISCHE
VENTRIKELFUNKTIONSSTOERUNG
10
2.3
MOLEKULARE
MECHANISMEN
DER
CHRONISCHEN
LINKSHERZINSUFFIZIENZ
10
2.3.1
OXIDATIVER
STRESS
UND
REAKTIVE
SAUERSTOFFSPEZIES
11
2.3.2
METABOLISMUS
DER
KARDIOMYOZYTEN
12
2.4
DIAGNOSTIK
15
2.5
THERAPIE
DER
CHRONISCHEN
LINKSHERZINSUFFIZIENZ
16
2.6
ENTSTEHUNG
UND
FUNKTION
VON
MIRNAS
17
2.7
BISHER
BEKANNTE
FUNKTIONEN
VON
MICRORNA-100
19
2.8
ZIELE
DER
ARBEIT
20
3
MATERIAL
21
3.1
GERAETE
UND
GEBRAUCHSGEGENSTAENDE
21
3.3
VERBRAUCHSMATERIALIEN
23
3.4
CHEMIKALIEN
UND
REAGENZIEN
24
3.5
PUFFER
UND
LOESUNGEN
26
3.6
KITS
30
3.7
OLIGONUKLEOTIDE
30
3.8
PRIMER
31
3.9
MARKER
32
3.10
ENZYME
32
3.11
ANTIKOERPER
33
3.12 PROGRAMME
33
4
METHODEN
34
4.1
MAUSMODELL
34
4.2
ORGANENTNAHME
34
4.3
ECHOKARDIOGRAPHIE
35
4.4
TRANSVERSE
AORTENKONSTRIKTION
35
4.5
MICROARRAY
ZUR
ANALYSE
DER
GENEXPRESSION
36
INHALTSVERZEICHNIS
II
4.6
ISOLIERUNG
DER
KARDIOMYOZYTEN
36
4.6.1
ORGANENTNAHME
36
4.6.2
PERFUSION
36
4.6.3
ZELLISOLATION
36
4.6.4
KALZIUMEINFUEHRUNG
37
4.6.5
AUSPLATTIEREN
DER
ZELLEN
37
4.7
FETTSAEURE-AUFNAHME-ASSAY
37
4.8
HISTOLOGISCHE
FAERBEMETHODEN
38
4.8.1
WGA-UND
DAPI-FAERBUNG
38
4.8.2
MASSON-TRICHROME-FAERBUNG
38
4.9
RNA-ANALYSE
40
4.9.1
PRIMER-HERSTELLUNG
40
4.9.2
RNA-ISOLIERUNG
40
4.9.3
CDNA-SYNTHESE
41
4.9.4 QUANTITATIVE
ECHTZEIT-PCR
MIT
SYBR
GREEN
I
41
4.9.5
QUANTITATIVE
YYSTEM-LOOP
ECHTZEIT-PCR
MIT
TAQMAN
42
4.10
PROTEIN-ANALYSE
43
4.10.1
HERSTELLUNG
EINES
PROTEINEXTRAKTES
43
4.10.2
BESTIMMUNG
DER
PROTEINKONZENTRATION
43
4.10.3
GELELEKTROPHORESE
43
4.10.4
WESTERN
BLOT
44
4.11
LUCIFERASE-ASSAY
45
4.12 SEAHORSE
ASSAY
XF
CELL
MITOCHONDRIAL
STRESS
TEST
46
4.13
SEAHORSE
ASSAY
XF
CELL
GLYCOLYTIC
STRESS
TEST
47
4.14
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
48
5
ERGEBNISSE
49
5.1
PHAENOTYPISIERUNG
DER
MIR
1
00-UBEREXPRESSIONSMAEUSE
49
5.1.1
KARDIOMYOZYTENSPEZIFISCHE
UEBEREXPRESSION
VON
MIR
100
IM
MAUSMODELL
49
5.1.2
KOERPERPARAMETER
DER
ADULTEN
MAEUSE
50
5.1.3
HISTOLOGISCHE
UNTERSUCHUNG
DER
ZELLGROESSE
DER
JUNGEN
UND
ADULTEN
MAEUSE
51
5.1.4
HISTOLOGISCHE
UNTERSUCHUNG
DES
KARDIALEN
FIBROSE-ANTEILS
DER
GEALTERTEN
MAEUSE
52
5.1.5
BEEINFLUSSUNG
DER
HERZPARAMETER
DER
ADULTEN
MAEUSE
53
5.1.6
ECHOKARDIOGRAPHISCHE
MESSUNG
DER
HERZFUNKTION
VON
JUNGEN
UND
ADULTEN
MAEUSEN
54
5.2
UEBEREXPRESSION
VON
MIR-100
IM
MAUSMODELL
DER
DRUCKINDUZIERTEN
HERZINSUFFIZIENZ
56
5.2.1
EXPRESSION
DER
MIR-100
IN
JUNGEN
MAEUSEN
NACH
SHAM
UND
TAC-OPERATION
56
5.2.2
HISTOLOGISCHE
UNTERSUCHUNG
DER
ZELLGROESSE
DER
KARDIOMYOZYTEN
JUNGER
MAEUSE
NACH
TAC-OPERATION
57
INHALTSVERZEICHNIS
III
5.2.3
ECHOKARDIOGRAPHISCHE
MESSUNG
DER
HERZFUNKTION
VON
JUNGEN
MAEUSEN
NACH
SHAM
UND
TAC-OPERATION
58
5.3
ANALYSE
DER
GENEXPRESSION
VON
MIR-100-UEBEREXPRESSIONSMAEUSEN
MITTELS
MICROARRAY
61
5.4
EINFLUSS
DER
MIR-100
AUF
OXIDATIVEN
STRESS
62
5.5
EINFLUSS
VON
MIR-100
AUF
DEN
METABOLISMUS
DER
KARDIOMYOZYTEN
66
5.5.1
MITOCHONDRIALE
BEEINFLUSSUNG
DURCH
MIR-100
66
5.5.2
GLYKOLYTISCHER
PHAENOTYP
DURCH
UEBEREXPRESSION
VON
MIR
100
69
5.5.3
REGULATION
VON
METABOLISCHEN
ENZYMEN
71
5.5.4
DIREKTE
REGULATION
VON
CD36
DURCH
MIR-100
73
5.5.5
BEEINFLUSSUNG
DER
FETTSAEUREAUFNAHME
DURCH
MIR-100
75
6
DISKUSSION
77
6.1
ERGEBNIS
DIESER
ARBEIT
77
6.2
DIE
MIR-100-UEBEREXPRESSION
BEWIRKT
KEINE
KARDIALE
FUNKTIONSEINSCHRAENKUNG,
ABER
EINE
MODERATE
KARDIALE
FIBROSE
UNTER
BASALBEDINGUNGEN
77
6.3
MIR-100
WIRKT
KARDIOPROTEKTIV
BEI
DRUCKINDUZIERTER
HERZINSUFFIZIENZ
79
6.4
MIR-100
HEMMT
DIE
PRODUKTION
VON
4-HNE
UND
REGULIERT
NOX4
UND
ALOX5
81
6.5
DIE
MIR-100-UEBEREXPRESSION
VERMINDERT
MODERAT
DIE
MITOCHONDRIALE
RESPIRATION
UND
INDUZIERT
EINEN
GLYKOLYTISCHEN
PHAENOTYP
83
6.6
MIR-100
REGULIERT
DIE
EXPRESSION
VON
CD36
IN
KARDIOMYOZYTEN
UND
VERRINGERT
DIE
AUFNAHME
VON
FETTSAEUREN
85
6.7
AUSBLICK
87
7
ZUSAMMENFASSUNG
89
8
LITERATURVERZEICHNIS
IV
9
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
XVII
10
TABELLENVERZEICHNIS
XIX
11
CURRICULUM
VITAE
XX
12
EIDESSTATTLICHE
VERSICHERUNG
XXII
13
ERKLAERUNG
ZUM
EIGENANTEIL
AN
DER
DISSERTATION
XXIII
14
ERKLAERUNG
ZUM
EIGENANTEIL
AN
DER
PUBLIKATION
XXIV
15
DANKSAGUNG
XXV
|
adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
1
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
1
2
EINLEITUNG
5
2.1
DAS
SYNDROM
HERZINSUFFIZIENZ
5
2.1.1
DEFINITION
UND
KLINIK
DER
CHRONISCHEN
HERZINSUFFIZIENZ
5
2.1.2
AETIOLOGIE
UND
EPIDEMIOLOGIE
7
2.2
FUNKTIONELLE
PATHOPHYSIOLOGIE
DER
CHRONISCHEN
LINKSHERZINSUFFIZIENZ
8
2.2.1
SYSTOLISCHE
VENTRIKELFUNKTIONSSTOERUNG
9
2.2.2
DIASTOLISCHE
VENTRIKELFUNKTIONSSTOERUNG
10
2.3
MOLEKULARE
MECHANISMEN
DER
CHRONISCHEN
LINKSHERZINSUFFIZIENZ
10
2.3.1
OXIDATIVER
STRESS
UND
REAKTIVE
SAUERSTOFFSPEZIES
11
2.3.2
METABOLISMUS
DER
KARDIOMYOZYTEN
12
2.4
DIAGNOSTIK
15
2.5
THERAPIE
DER
CHRONISCHEN
LINKSHERZINSUFFIZIENZ
16
2.6
ENTSTEHUNG
UND
FUNKTION
VON
MIRNAS
17
2.7
BISHER
BEKANNTE
FUNKTIONEN
VON
MICRORNA-100
19
2.8
ZIELE
DER
ARBEIT
20
3
MATERIAL
21
3.1
GERAETE
UND
GEBRAUCHSGEGENSTAENDE
21
3.3
VERBRAUCHSMATERIALIEN
23
3.4
CHEMIKALIEN
UND
REAGENZIEN
24
3.5
PUFFER
UND
LOESUNGEN
26
3.6
KITS
30
3.7
OLIGONUKLEOTIDE
30
3.8
PRIMER
31
3.9
MARKER
32
3.10
ENZYME
32
3.11
ANTIKOERPER
33
3.12 PROGRAMME
33
4
METHODEN
34
4.1
MAUSMODELL
34
4.2
ORGANENTNAHME
34
4.3
ECHOKARDIOGRAPHIE
35
4.4
TRANSVERSE
AORTENKONSTRIKTION
35
4.5
MICROARRAY
ZUR
ANALYSE
DER
GENEXPRESSION
36
INHALTSVERZEICHNIS
II
4.6
ISOLIERUNG
DER
KARDIOMYOZYTEN
36
4.6.1
ORGANENTNAHME
36
4.6.2
PERFUSION
36
4.6.3
ZELLISOLATION
36
4.6.4
KALZIUMEINFUEHRUNG
37
4.6.5
AUSPLATTIEREN
DER
ZELLEN
37
4.7
FETTSAEURE-AUFNAHME-ASSAY
37
4.8
HISTOLOGISCHE
FAERBEMETHODEN
38
4.8.1
WGA-UND
DAPI-FAERBUNG
38
4.8.2
MASSON-TRICHROME-FAERBUNG
38
4.9
RNA-ANALYSE
40
4.9.1
PRIMER-HERSTELLUNG
40
4.9.2
RNA-ISOLIERUNG
40
4.9.3
CDNA-SYNTHESE
41
4.9.4 QUANTITATIVE
ECHTZEIT-PCR
MIT
SYBR
GREEN
I
41
4.9.5
QUANTITATIVE
YYSTEM-LOOP
"
ECHTZEIT-PCR
MIT
TAQMAN
42
4.10
PROTEIN-ANALYSE
43
4.10.1
HERSTELLUNG
EINES
PROTEINEXTRAKTES
43
4.10.2
BESTIMMUNG
DER
PROTEINKONZENTRATION
43
4.10.3
GELELEKTROPHORESE
43
4.10.4
WESTERN
BLOT
44
4.11
LUCIFERASE-ASSAY
45
4.12 SEAHORSE
ASSAY
XF
CELL
MITOCHONDRIAL
STRESS
TEST
46
4.13
SEAHORSE
ASSAY
XF
CELL
GLYCOLYTIC
STRESS
TEST
47
4.14
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
48
5
ERGEBNISSE
49
5.1
PHAENOTYPISIERUNG
DER
MIR
1
00-UBEREXPRESSIONSMAEUSE
49
5.1.1
KARDIOMYOZYTENSPEZIFISCHE
UEBEREXPRESSION
VON
MIR
100
IM
MAUSMODELL
49
5.1.2
KOERPERPARAMETER
DER
ADULTEN
MAEUSE
50
5.1.3
HISTOLOGISCHE
UNTERSUCHUNG
DER
ZELLGROESSE
DER
JUNGEN
UND
ADULTEN
MAEUSE
51
5.1.4
HISTOLOGISCHE
UNTERSUCHUNG
DES
KARDIALEN
FIBROSE-ANTEILS
DER
GEALTERTEN
MAEUSE
52
5.1.5
BEEINFLUSSUNG
DER
HERZPARAMETER
DER
ADULTEN
MAEUSE
53
5.1.6
ECHOKARDIOGRAPHISCHE
MESSUNG
DER
HERZFUNKTION
VON
JUNGEN
UND
ADULTEN
MAEUSEN
54
5.2
UEBEREXPRESSION
VON
MIR-100
IM
MAUSMODELL
DER
DRUCKINDUZIERTEN
HERZINSUFFIZIENZ
56
5.2.1
EXPRESSION
DER
MIR-100
IN
JUNGEN
MAEUSEN
NACH
SHAM
UND
TAC-OPERATION
56
5.2.2
HISTOLOGISCHE
UNTERSUCHUNG
DER
ZELLGROESSE
DER
KARDIOMYOZYTEN
JUNGER
MAEUSE
NACH
TAC-OPERATION
57
INHALTSVERZEICHNIS
III
5.2.3
ECHOKARDIOGRAPHISCHE
MESSUNG
DER
HERZFUNKTION
VON
JUNGEN
MAEUSEN
NACH
SHAM
UND
TAC-OPERATION
58
5.3
ANALYSE
DER
GENEXPRESSION
VON
MIR-100-UEBEREXPRESSIONSMAEUSEN
MITTELS
MICROARRAY
61
5.4
EINFLUSS
DER
MIR-100
AUF
OXIDATIVEN
STRESS
62
5.5
EINFLUSS
VON
MIR-100
AUF
DEN
METABOLISMUS
DER
KARDIOMYOZYTEN
66
5.5.1
MITOCHONDRIALE
BEEINFLUSSUNG
DURCH
MIR-100
66
5.5.2
GLYKOLYTISCHER
PHAENOTYP
DURCH
UEBEREXPRESSION
VON
MIR
100
69
5.5.3
REGULATION
VON
METABOLISCHEN
ENZYMEN
71
5.5.4
DIREKTE
REGULATION
VON
CD36
DURCH
MIR-100
73
5.5.5
BEEINFLUSSUNG
DER
FETTSAEUREAUFNAHME
DURCH
MIR-100
75
6
DISKUSSION
77
6.1
ERGEBNIS
DIESER
ARBEIT
77
6.2
DIE
MIR-100-UEBEREXPRESSION
BEWIRKT
KEINE
KARDIALE
FUNKTIONSEINSCHRAENKUNG,
ABER
EINE
MODERATE
KARDIALE
FIBROSE
UNTER
BASALBEDINGUNGEN
77
6.3
MIR-100
WIRKT
KARDIOPROTEKTIV
BEI
DRUCKINDUZIERTER
HERZINSUFFIZIENZ
79
6.4
MIR-100
HEMMT
DIE
PRODUKTION
VON
4-HNE
UND
REGULIERT
NOX4
UND
ALOX5
81
6.5
DIE
MIR-100-UEBEREXPRESSION
VERMINDERT
MODERAT
DIE
MITOCHONDRIALE
RESPIRATION
UND
INDUZIERT
EINEN
GLYKOLYTISCHEN
PHAENOTYP
83
6.6
MIR-100
REGULIERT
DIE
EXPRESSION
VON
CD36
IN
KARDIOMYOZYTEN
UND
VERRINGERT
DIE
AUFNAHME
VON
FETTSAEUREN
85
6.7
AUSBLICK
87
7
ZUSAMMENFASSUNG
89
8
LITERATURVERZEICHNIS
IV
9
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
XVII
10
TABELLENVERZEICHNIS
XIX
11
CURRICULUM
VITAE
XX
12
EIDESSTATTLICHE
VERSICHERUNG
XXII
13
ERKLAERUNG
ZUM
EIGENANTEIL
AN
DER
DISSERTATION
XXIII
14
ERKLAERUNG
ZUM
EIGENANTEIL
AN
DER
PUBLIKATION
XXIV
15
DANKSAGUNG
XXV |
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