Auswirkungen eines postnatalen Verlusts von Lhx6 auf aus der MGE stammende Interneurone:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Freiburg im Breisgau
2020
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | vii, 94 Seiten Illustrationen, Diagramme 30 cm |
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Datensatz im Suchindex
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
............................................................................................................................
5
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
.............................................................................................................
7
1
EINLEITUNG
..........................................................................................................................
1
1.1
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
ALS
ENTSCHEIDENDE
BAUSTEINE
IN
DER
ZELLDIFFERENZIERUNG
.........
1
1.2
ENTWICKLUNG
KORTIKALER
UND
HIPPOKAMPALER
INTERNEURONEN
..........................................
4
1.3
DIFFERENZIERUNG
KORTIKALER
UND
HIPPOKAMPALER
INTERNEURONEN
IN
UNTERSCHIEDLICHE
SUBTYPEN
.................................................................................................................................
9
1.3.1
DLX1
UND
DLX
2
LOESEN
EINE
DIFFERENZIERUNG
ZUM
GABAERGEN
PHAENOTYP
AUS
.
9
1.3.2
NKX2-1
INDUZIERT
DIE
ENSTEHUNG
DER
MGE
UND
IST
ESSENZIELL
FUER
DIE
ENTWICKLUNG
DER
AUS
IHR ENTSTEHENDEN
INTERNEURONE
..............................................................................
10
1.3.3
ROLLE
VON
LHX6
IN
DER
ENTWICKLUNG
AUS
DER MGE
STAMMENDER INTERNEURONE...
10
1.3.4
ROLLE
AUSGEWAEHLTER
ZIELGENE
VON
LHX6
IN
DER
INTERNEURONENTWICKLUNG
...........
12
1.3.5
EXTRAZELLULAERE
SIGNALE
SIND
ENTSCHEIDEND
FUER
DIE
DIFFERENZIERUNG VON
INTERNEURONEN
...................................................................................................................
14
1.4
IN
DER
PRAENATALEN
DIFFERENZIERUNG
ENTSCHEIDENDE
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
HABEN
EINFLUSS
AUF
DIE
POSTNATALE
ENTWICKLUNG
GABAERGER
NEURONEN
IM
KORTEX
UND
HIPPOKAMPUS
........................................................................................................................
15
1.5
ARTIFIZIELL
INDUZIERTE
LHX6
EXPRESSION ERMOEGLICHT
DIE
DIFFERENZIERUNG PLURIPOTENTER
STAMMZELLEN
IN
GABAERGE
NEURONE
...................................................................................
18
1.6
FUNKTION
KORTIKALER
UND
HIPPOKAMPALER GABAERGER
INTERNEURONE
..........................
18
1.6.1
FUNKTION
PV+
INTERNEURONEN
IN
SCHALTKREISEN
DES
KORTEX
UND
HIPPOKAMPUS
..19
1.6.2
BEITRAG
PV+ INTERNEURONEN
ZU
BESTIMMTEN
VERHALTENSWEISEN
............................
19
1.6.3
STOERUNGEN
DER
PV+
INTERNEURONEN
IN
NEUROLOGISCHEN
UND
PSYCHIATRISCHEN
ERKRANKUNGEN
..................................................................................................................
20
1.7
ZIEL
DER
ARBEIT
............................................................................................................
22
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.................................................................................................
23
2.1
V
ERSUCHSTIERE
............................................................................................................
23
2.2
STEREOTAKTISCHE
VIRUSINJEKTION
IN
DEN
HIPPOKAMPUS
ADULTER
MAEUSE
.........................
23
2.3
VERHALTENSEXPERIMENTE
..............................................................................................
25
2.3.1
SPONTANEOUS
ALTERNATION
......................................................................................
25
2.3.2
NOVELTY-PREFERENCE
..............................................................................................
26
2.3.3
OPEN-FIELD-TEST
..................................................................................................
26
2.3.4
NOVEL
OBJECT
RECOGNTITION
....................................................................................
26
2.3.5
BARNES
MAZE
........................................................................................................
27
2.4
IMMUNHISTOCHEMIE
....................................................................................................
28
2.4.1
INTRAKARDIALE
PERFUSION
........................................................................................
28
2.4.2
ANTIKOERPER
..........................................................................................................
28
2.4.3
IMMUNFAERBUNG
PERFUNDIERTER
GEHIRNSCHNITTE
......................................................
30
2.4.4
IMMUNFAERBUNG
FIXIERTER
AKUTER
GEHRINSCHNITTE
....................................................
30
2.4.5
ANALYSE
IMMUNHISTOCHEMISCHER
FAERBUNGEN
.......................................................
30
2.5
ELEKTROPHYSIOLOGIE
.....................................................................................................
31
2.5.1
AKUTE
HIRNSCHNITTPRAEPARATE
.................................................................................
31
2.5.2
BESTIMMUNG
ELEKTROPHYSIOLOGISCHER
BASISEIGENSCHAFTEN
PARVALBUMIN+
INTERNEURONE
.....................................................................................................................
32
2.6
STATISTISCHE
DATENANALYSE
.............................................................................................
33
2.7
PUFFER
UND
LOESUNGEN
....................................................................................................
34
3
ERGEBNISSE
.......................................................................................................................
35
3.1
ETABLIERUNG
EINER
GEEIGNETEN AAV9-CRE-GFP
VIRUSKONZENTRATION
...........................
35
3.2
AUSWIRKUNGEN
DER
UNTERSCHIEDLICHEN
KNOCKOUT
VARIANTEN
AUF
DIE
GESAMTZAHL
LHX6+
ZELLEN38
3.3
VERMINDERTE
EXPRESSION
VON
LHX6
IN
PV+
INTERNEURONEN
NACH
LHX6
KNOCKOUT
AUF
UNTERSCHIEDLICHE
WEISEN
......................................................................................................
41
3.4
VERMINDERTE
EXPRESSION
VON
LHX6
IN
MGLURLA+
INTERNEURONEN
NACH
LHX6
KNOCKOUT
DURCH VIRALE
INJEKTION
..........................................................................................................
43
3.5
UNVERAENDERTE
DICHTE
VON
PV+
UND
MGLURL
A+
INTERNEURONEN
NACH
LHX6
KNOCKOUT
45
3.6
REDUZIERTE
FLUORESZENZSIGNALINTENSITAET
VON
ZIELGENEN
IN
AUS
DER
MGE
STAMMENDEN
INTERNEURONEN
NACH
UNTERSCHIEDLICHEN
ARTEN
DES
LHX6
KNOCKOUTS
......................................
48
3.6.1
REDUZIERTE
FLUORESZENZSIGNALINTENSITAET
VON
ARX
IN
PV+
INTERNEURONEN
NACH
UNTERSCHIEDLICHEN
ARTEN
DES
LHX6
KNOCKOUTS
.................................................................
48
3.6.2
REDUZIERTE
SOX6
FLUORESZENZSIGNALINTENSITAET
IN
PV+
INTERNEURONEN
NACH
UNTERSCHIEDLICHEN
ARTEN
DES
LHX6
KNOCKOUTS
.................................................................
51
3.6.3
REDUZIERTE
SATBL
FLUORESZENZSIGNALINTENSITAET
IN
MGLURLA+
INTERNEURONEN
NACH
UNTERSCHIEDLICHEN
ARTEN
DES
LHX6
KNOCKOUTS
.................................................................
52
3.7
UNVERAENDERTE
AKTIVE
UND
PASSIVE
ELEKTROPHYSIOLOGISCHE
EIGENSCHAFTEN
DER
PV+
INTERNEURONEN
DES
GYRUS
DENTATUS NACH
VIRALEM
KNOCKOUT
VON
LHX6
.................................
55
3.8
UNVERAENDERTE
MORPHOLOGISCHE
EIGENSCHAFTEN
DER
PV+
INTERNEURONEN
DES
GYRUS
DENTATUS
NACH
VIRALEM
KNOCKOUT
VON
LHX6
..........................................................................
58
3.9
LHX6LOXP/OXP;
PV-CRE
MAEUSE
ZEIGEN UNVERAENDERTES
VERHALTEN
IN
KOGNITIVEN
TESTS
...
60
3.9.1
GLEICHE
RATE
AN
ALTERNATIONEN
IM
Y-MAZE
IN
BEIDEN
GRUPPEN
.........................
60
3.9.2
UNVERAENDERTE
AUFENTHALTSZEIT
IM
NEUEN
ARM
DES
Y-MAZE
BEIM
YYNOVELTY
PREFERENCE
TEST
..............................................................................................................
.
3.9.3
UNVERAENDERTE
VERHALTEN
WAEHREND DES
YYOPEN
FIELD
TEST
..................................
60
3.9.4
GLEICHES
INTERESSE
AN
EINEM NEUEN
OBJEKT
NACH
5
MINUTEN
UND
24
STUNDEN
....
61
3.9.5
VERGLEICHBARES
LERNVERHALTEN
IM BARNES
MAZE
UEBER
5
TAGE
.............................
61
4
DISKUSSION
........................................................................................................................
65
4.1
ERSTE
ETABLIERUNG
EINES
PRAENATALEN
KNOCKOUTS
VON
LHX6
..........................................
65
4.1.1
BEIDE
VERWENDETEN
ARTEN
DES
CRE-LOXP
SYSTEMS
FUEHREN
ZUM
VERLUST
VON
LHX6
65
4.1.2
DAS
AUSMASS
DES
KNOCKOUTS
UNTERSCHEIDET
SICH
IN
DEN
BEIDEN
ANSAETZEN
.........
65
4.2
LHX6
IST
KEIN
UEBERLEBENSFAKTOR
FUER
PV+
UND
SST+
INTERNEURONEN
IM HIPPOKAMPUS
UND
SEINE
FUNKTION
VERAENDERT
SICH
IM LAUFE
DER
ENTWICKLUNG
.............................................
66
4.3
LHX6
IST
POSTNATAL
KEINE
VORAUSSETZUNG
FUER
DIE
EXPRESSION
VON
ARX,
SOX6
UND
SATBL,
BEEINFLUSST
IHRE
EXPRESSION
ABER
WEITERHIN
................................................................
68
4.4
DIE
DIFFERENZIERUNG
UND
FUNKTIONALITAET
PV+
INTERNEURONEN
IST
POSTNATAL
ZU
EINEM
GEWISSEN
GRAD
UNABHAENGIG
VON
DER
AKTIVITAET
LHXOES
...........................................................
69
4.5
DER
POSTNATALE
VERLUST
VON
LHX6
IN
PV+
INTERNEURONEN
FUEHRT
NICHT
ZU
ABNORMEN
VERHALTEN
ODER
EINSCHRAENKUNGEN
IN
KOGNITIVEN
TESTS
..........................................................
71
4.6
ZUSAMMENFASSUNG
.....................................................................................................
72
4.7
AUSBLICK
.......................................................................................................................
5
LITERATURVERZEICHNIS
........................................................................................................
75
5.1
PUBLIKATIONEN
IM
RAHMEN
DES
DISSERTATIONSPROJEKTES
...............................................
89
IV
|
| adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
.
5
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
.
7
1
EINLEITUNG
.
1
1.1
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
ALS
ENTSCHEIDENDE
BAUSTEINE
IN
DER
ZELLDIFFERENZIERUNG
.
1
1.2
ENTWICKLUNG
KORTIKALER
UND
HIPPOKAMPALER
INTERNEURONEN
.
4
1.3
DIFFERENZIERUNG
KORTIKALER
UND
HIPPOKAMPALER
INTERNEURONEN
IN
UNTERSCHIEDLICHE
SUBTYPEN
.
9
1.3.1
DLX1
UND
DLX
2
LOESEN
EINE
DIFFERENZIERUNG
ZUM
GABAERGEN
PHAENOTYP
AUS
.
9
1.3.2
NKX2-1
INDUZIERT
DIE
ENSTEHUNG
DER
MGE
UND
IST
ESSENZIELL
FUER
DIE
ENTWICKLUNG
DER
AUS
IHR ENTSTEHENDEN
INTERNEURONE
.
10
1.3.3
ROLLE
VON
LHX6
IN
DER
ENTWICKLUNG
AUS
DER MGE
STAMMENDER INTERNEURONE.
10
1.3.4
ROLLE
AUSGEWAEHLTER
ZIELGENE
VON
LHX6
IN
DER
INTERNEURONENTWICKLUNG
.
12
1.3.5
EXTRAZELLULAERE
SIGNALE
SIND
ENTSCHEIDEND
FUER
DIE
DIFFERENZIERUNG VON
INTERNEURONEN
.
14
1.4
IN
DER
PRAENATALEN
DIFFERENZIERUNG
ENTSCHEIDENDE
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
HABEN
EINFLUSS
AUF
DIE
POSTNATALE
ENTWICKLUNG
GABAERGER
NEURONEN
IM
KORTEX
UND
HIPPOKAMPUS
.
15
1.5
ARTIFIZIELL
INDUZIERTE
LHX6
EXPRESSION ERMOEGLICHT
DIE
DIFFERENZIERUNG PLURIPOTENTER
STAMMZELLEN
IN
GABAERGE
NEURONE
.
18
1.6
FUNKTION
KORTIKALER
UND
HIPPOKAMPALER GABAERGER
INTERNEURONE
.
18
1.6.1
FUNKTION
PV+
INTERNEURONEN
IN
SCHALTKREISEN
DES
KORTEX
UND
HIPPOKAMPUS
.19
1.6.2
BEITRAG
PV+ INTERNEURONEN
ZU
BESTIMMTEN
VERHALTENSWEISEN
.
19
1.6.3
STOERUNGEN
DER
PV+
INTERNEURONEN
IN
NEUROLOGISCHEN
UND
PSYCHIATRISCHEN
ERKRANKUNGEN
.
20
1.7
ZIEL
DER
ARBEIT
.
22
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.
23
2.1
V
ERSUCHSTIERE
.
23
2.2
STEREOTAKTISCHE
VIRUSINJEKTION
IN
DEN
HIPPOKAMPUS
ADULTER
MAEUSE
.
23
2.3
VERHALTENSEXPERIMENTE
.
25
2.3.1
SPONTANEOUS
ALTERNATION
.
25
2.3.2
NOVELTY-PREFERENCE
.
26
2.3.3
OPEN-FIELD-TEST
.
26
2.3.4
NOVEL
OBJECT
RECOGNTITION
.
26
2.3.5
BARNES
MAZE
.
27
2.4
IMMUNHISTOCHEMIE
.
28
2.4.1
INTRAKARDIALE
PERFUSION
.
28
2.4.2
ANTIKOERPER
.
28
2.4.3
IMMUNFAERBUNG
PERFUNDIERTER
GEHIRNSCHNITTE
.
30
2.4.4
IMMUNFAERBUNG
FIXIERTER
AKUTER
GEHRINSCHNITTE
.
30
2.4.5
ANALYSE
IMMUNHISTOCHEMISCHER
FAERBUNGEN
.
30
2.5
ELEKTROPHYSIOLOGIE
.
31
2.5.1
AKUTE
HIRNSCHNITTPRAEPARATE
.
31
2.5.2
BESTIMMUNG
ELEKTROPHYSIOLOGISCHER
BASISEIGENSCHAFTEN
PARVALBUMIN+
INTERNEURONE
.
32
2.6
STATISTISCHE
DATENANALYSE
.
33
2.7
PUFFER
UND
LOESUNGEN
.
34
3
ERGEBNISSE
.
35
3.1
ETABLIERUNG
EINER
GEEIGNETEN AAV9-CRE-GFP
VIRUSKONZENTRATION
.
35
3.2
AUSWIRKUNGEN
DER
UNTERSCHIEDLICHEN
KNOCKOUT
VARIANTEN
AUF
DIE
GESAMTZAHL
LHX6+
ZELLEN38
3.3
VERMINDERTE
EXPRESSION
VON
LHX6
IN
PV+
INTERNEURONEN
NACH
LHX6
KNOCKOUT
AUF
UNTERSCHIEDLICHE
WEISEN
.
41
3.4
VERMINDERTE
EXPRESSION
VON
LHX6
IN
MGLURLA+
INTERNEURONEN
NACH
LHX6
KNOCKOUT
DURCH VIRALE
INJEKTION
.
43
3.5
UNVERAENDERTE
DICHTE
VON
PV+
UND
MGLURL
A+
INTERNEURONEN
NACH
LHX6
KNOCKOUT
45
3.6
REDUZIERTE
FLUORESZENZSIGNALINTENSITAET
VON
ZIELGENEN
IN
AUS
DER
MGE
STAMMENDEN
INTERNEURONEN
NACH
UNTERSCHIEDLICHEN
ARTEN
DES
LHX6
KNOCKOUTS
.
48
3.6.1
REDUZIERTE
FLUORESZENZSIGNALINTENSITAET
VON
ARX
IN
PV+
INTERNEURONEN
NACH
UNTERSCHIEDLICHEN
ARTEN
DES
LHX6
KNOCKOUTS
.
48
3.6.2
REDUZIERTE
SOX6
FLUORESZENZSIGNALINTENSITAET
IN
PV+
INTERNEURONEN
NACH
UNTERSCHIEDLICHEN
ARTEN
DES
LHX6
KNOCKOUTS
.
51
3.6.3
REDUZIERTE
SATBL
FLUORESZENZSIGNALINTENSITAET
IN
MGLURLA+
INTERNEURONEN
NACH
UNTERSCHIEDLICHEN
ARTEN
DES
LHX6
KNOCKOUTS
.
52
3.7
UNVERAENDERTE
AKTIVE
UND
PASSIVE
ELEKTROPHYSIOLOGISCHE
EIGENSCHAFTEN
DER
PV+
INTERNEURONEN
DES
GYRUS
DENTATUS NACH
VIRALEM
KNOCKOUT
VON
LHX6
.
55
3.8
UNVERAENDERTE
MORPHOLOGISCHE
EIGENSCHAFTEN
DER
PV+
INTERNEURONEN
DES
GYRUS
DENTATUS
NACH
VIRALEM
KNOCKOUT
VON
LHX6
.
58
3.9
LHX6LOXP/OXP;
PV-CRE
MAEUSE
ZEIGEN UNVERAENDERTES
VERHALTEN
IN
KOGNITIVEN
TESTS
.
60
3.9.1
GLEICHE
RATE
AN
ALTERNATIONEN
IM
Y-MAZE
IN
BEIDEN
GRUPPEN
.
60
3.9.2
UNVERAENDERTE
AUFENTHALTSZEIT
IM
NEUEN
ARM
DES
Y-MAZE
BEIM
YYNOVELTY
PREFERENCE
"
TEST
.
.
3.9.3
UNVERAENDERTE
VERHALTEN
WAEHREND DES
YYOPEN
FIELD
"
TEST
.
60
3.9.4
GLEICHES
INTERESSE
AN
EINEM NEUEN
OBJEKT
NACH
5
MINUTEN
UND
24
STUNDEN
.
61
3.9.5
VERGLEICHBARES
LERNVERHALTEN
IM BARNES
MAZE
UEBER
5
TAGE
.
61
4
DISKUSSION
.
65
4.1
ERSTE
ETABLIERUNG
EINES
PRAENATALEN
KNOCKOUTS
VON
LHX6
.
65
4.1.1
BEIDE
VERWENDETEN
ARTEN
DES
CRE-LOXP
SYSTEMS
FUEHREN
ZUM
VERLUST
VON
LHX6
65
4.1.2
DAS
AUSMASS
DES
KNOCKOUTS
UNTERSCHEIDET
SICH
IN
DEN
BEIDEN
ANSAETZEN
.
65
4.2
LHX6
IST
KEIN
UEBERLEBENSFAKTOR
FUER
PV+
UND
SST+
INTERNEURONEN
IM HIPPOKAMPUS
UND
SEINE
FUNKTION
VERAENDERT
SICH
IM LAUFE
DER
ENTWICKLUNG
.
66
4.3
LHX6
IST
POSTNATAL
KEINE
VORAUSSETZUNG
FUER
DIE
EXPRESSION
VON
ARX,
SOX6
UND
SATBL,
BEEINFLUSST
IHRE
EXPRESSION
ABER
WEITERHIN
.
68
4.4
DIE
DIFFERENZIERUNG
UND
FUNKTIONALITAET
PV+
INTERNEURONEN
IST
POSTNATAL
ZU
EINEM
GEWISSEN
GRAD
UNABHAENGIG
VON
DER
AKTIVITAET
LHXOES
.
69
4.5
DER
POSTNATALE
VERLUST
VON
LHX6
IN
PV+
INTERNEURONEN
FUEHRT
NICHT
ZU
ABNORMEN
VERHALTEN
ODER
EINSCHRAENKUNGEN
IN
KOGNITIVEN
TESTS
.
71
4.6
ZUSAMMENFASSUNG
.
72
4.7
AUSBLICK
.
5
LITERATURVERZEICHNIS
.
75
5.1
PUBLIKATIONEN
IM
RAHMEN
DES
DISSERTATIONSPROJEKTES
.
89
IV |
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Inhaltsverzeichnis