Zellspezifische Wirkungen des P2Y2-Rezeptors in der Pathogenese des Asthma bronchiales:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Freiburg i. Br.
[2018]
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | XI, 77 Blätter Illustrationen, Diagramme 30 cm |
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Datensatz im Suchindex
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
I.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
........................................................................................
VII
II.
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
............................................................................................
X
III.
TABELLENVERZEICHNIS
...............................................................................................
XI
1.
EINLEITUNG
...................................................................................................................
1
1.1
ASTHMA
.............................................................................................................
1
1.1.1
ASTHMA,
DIE
HAEUFIGSTE
CHRONISCHE
ERKRANKUNG
BEI
KINDERN
...................
1
1.1.2
DEFINITION
DES
ASTHMA
BRONCHIALES
............................................................
1
1.1.2.1
EINTEILUNG
IN
ALLERGISCHES
UND
NICHT-ALLERGISCHES
ASTHMA
................
2
1.1.2.2
NEUE
EINTEILUNGEN
DES
ASTHMA
BRONCHIALES
....................................
2
1.1.3
GIBT
ES
EINE
ASTHMA-PRAEDISPOSITION?
.......................................................
4
1.1.3.1
GENETISCHE
PRAEDISPOSITION
..................................................................
4
1.1.3.2
HYGIENETHEORIE
.....................................................................................
5
1.1.3.3
RISIKOFAKTOREN
FUER
EINE
ASTHMAERKRANKUNG
.......................................
5
1.1.4
DIE
ASTHMAPATHOGENESE
UND
EFFEKTORZELLEN
...........................................
6
1.1.5
SYMPTOME
UND
DIAGNOSE
DES
ASTHMAS
...................................................
9
1.1.6
THERAPIE
DES
ASTHMAS
.............................................................................
11
1.2
PURINERGE
SIGNALTRANSDUKTION
.........................................................................
12
1.2.1
PURINERGE
REZEPTOREN
..............................................................................
12
1.2.2
FUNKTIONEN
DES
P2Y2-REZEPTORS
............................................................
14
1.3
UNTERSUCHUNG
VON
KONDITIONELLE
MAUSLINIEN
IM
CRE/LOXP-SYSTEM
..............
16
1.4
ZIELSETZUNG
........................................................................................................
17
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.........................................................................................
19
2.1
MATERIALIEN
........................................................................................................
19
2.1.1
PUFFER/LOESUNGEN
........................................................................................
19
2.1.2
ZELLKULTURMEDIEN
[HERSTELLER/FIRMA,
ORT]
................................................
21
2.1.3
REAGENZIEN
UND
KITS
[HERSTELLER/FIRMA,
ORT]
.........................................
21
2.1.4
GERAETE
[HERSTELLER,
ORT]
.............................................................................
24
2.1.5
SOFTWARE
[HERSTELLER/FIRMA,
ORT]
..............................................................
25
2.1.6
OLIGONUKLEOTIDE
FUER
DIE
QPCR
(5
-3
)
.......................................................
25
2.1.7
OLIGONUKLEOTIDE
FUER
DIE
PCR
....................................................................
26
2.2
MAEUSE
...............................................................................................................
26
2.2
METHODEN
..........................................................................................................
28
IN
2.2.1
MAUSMODELL
UND
ERHEBUNG
DER
ENTZUENDUNGSPARAMETER
.....................
28
2.2.1.1
MURINES
MODELL
AKUTER
HDM-INDUZIERTER
ATEMWEGSENTZUENDUNG.
28
2.2.1.2
LUNGENFUNKTIONSDIAGNOSTIK
...............................................................
28
2.2.1.3
FACS-ANALYSE
DER
ZELLEN
DER
BRONCHOALVEOLAEREN
LAVAGE
...........
29
2.2.1.4
RESTIMULIERUNG
MEDIASTINALER
LYMPHKNOTENZELLEN
.........................
30
2.2.1.5
MESSUNG
VON
ZYTOKINKONZENTRATIONEN
MITTELS
SANDWICH-ELISA
.
31
2.2.1.6
HERSTELLUNG
VON
LUNGENHOMOGENATEN
............................................
32
2.2.1.7
ANFERTIGUNG
UND
FAERBUNG
HISTOLOGISCHER
LUNGENSCHNITTE
.............
32
2.2.1.8
NACHWEIS
IL-33
AUF
MRNA
EBENE
...................................................
33
2.2.2
GENOTYPISIERUNG
DER
VERSUCHSTIERE
........................................................
33
2.2.2.1
VERPAARUNG
.........................................................................................
33
2.2.2.1
PROBENGEWINNUNG
..............................................................................
33
2.2.2.2
POLYMERASEKETTENREAKTION
(PCR)
....................................................
34
2.2.2.3
GELELEKTROPHORESE
.............................................................................
34
2.2.3
MIGRATIONSVERSUCHE
...................................................................................
35
2.2.3.1
HERSTELLUNG
VON
MONOZYTEN
AUS
KNOCHENMARKZELLEN
...................
35
2.2.3.2
HERSTELLUNG
VON
DENDRITISCHEN
ZELLEN
AUS
KNOCHENMARKZELLEN...
35
2.2.3.3
IN
VITRO
MIGRATION
IN
EINEM
TRANS-WELL
SYSTEM
..............................
35
2.2.4
NACHWEIS
DER
FUNKTION
DES
LOXP/CRE-SYSTEMS
......................................
37
2.2.4.1
ISOLATION
PRIMAERER
ZELLEN
ZUM
NACHWEIS
DER
ZELLTYPSPEZFISCHEN
REKOMBINASEAKTIVITAET
.....................................................................................
37
2.2.4.1.1
ISOLATION
VON
MONONUKLEAEREN
ZELLEN
UND
GRANULOZYTEN
AUS
PERIPHEREM
MURINEM
BLUT
...........................................................................
38
2.2.4.1.2
ENZYMATISCHER
VERDAU
VON
LUNGENGEWEBE
............................
39
2.2.4.1.3
ISOLIERUNG
EPITHELIALER
ZELLEN
PER
FACS-SORTER
.......................
39
2.2.4.1.4
ISOLIERUNG
VON
CD11C-POSITIVEN
ZELLEN
AUS
VERDAUTEN
LUNGEN
PER
MAGNETISCHER
ZELLSEPARATION
.............................................................
40
2.2.4.1.5
MAGNETISCHE
ZELLISOLIERUNG
VON
ENDOTHELIALEN
CD146
+
ZELLEN
AUS
DER
LUNGE
............................................................................................
40
2.2.4.1.6
ISOLIERUNG
VON
CD4
+
-POSITIVEN
ZELLEN
AUS
DER
MILZ
MIT
HILFE
MAGNETISCHER
ZELLSEPARATION
.....................................................................
40
2.2.4.1.7
DIFFERENZIERUNG
VON
MAKROPHAGEN
AUS
UNDIFFERENZIERTEN
KNOCHENMARKZELLEN
....................................................................................
41
2.2.4.2
DIE
QUANTITATIVE
POLYMERASE-KETTEN-REAKTION
(TAQMAN)
.............
41
2.2.4.2.1
RNA-ISOLATION
AUS
ZELLEN
...........................................................
42
2.2.4.2.2
DIE
CDNA-SYNTHESE
...................................................................
42
IV
2.2.4.2.3
QUANTITATIVE
ECHTZEIT-PCR
...........................................................
43
2.3
STATISTIK
.............................................................................................................
43
3.
ERGEBNISSE
.............................................................................................................
44
3.1
P2RY2-EXPRESSION
IN
KONDITIONEILEN
KNOCK-OUT
MAEUSEN
.................................
44
3.2
P2RY2-DEFIZIENZ
IN
ATEMWEGSEPITHELZELLEN
VERMINDERT
DIE
HDM-INDUZIERTE
ATEMWEGSENTZUENDUNG
...........................................................................................
47
3.3
KNOCKOUT
DER
P2RY2-EXPRESSION
IN
HAEMATOPOETISCHEN
ZELLEN
RESULTIERT
IN
EINER
VERMINDERTEN
ALLERGISCHEN
ATEMWEGSENTZUENDUNG
...................................
49
3.4
DELETION
VON
P2RY2
AUF
MYELOIDEN
ZELLEN
IN
P2RY^
LYSM-CRE
+
FUEHRT
ZU
EINER
ABGESCHWAECHTEN
HDM-VERMITTELTEN
AKUTEN
ATEMWEGSENTZUENDUNG
....
51
3.5
MAEUSE
DEREN
P2Y2-REZEPTOR
AUF
CD11C
+
ZELLEN
DELETIERT
IST,
ZEIGEN
VERMINDERTE
AKUTE
HDM-INDUZIERTE
ATEMWEGSENTZUENDUNG
..............................
52
3.6
DENDRITISCHE
ZELLEN,
DIE
AUS
KNOCHENMARKSZELLEN
VON
P2TY2^
L/FL
VAV-CRE
+
UND
CD11C-CRE
+
MAEUSEN
DIFFERENZIERT
WURDEN,
ZEIGEN
IN
VITRO
EINE
VERMINDERTE
MIGRATION
IN
RICHTUNG
ATP
53
3.7
DER
KNOCKOUT
VON
P2RY2
IN
CD4
+
-ZELLEN
IN
P2RY^
CD4-CRE
+
MAEUSEN
BEEINFLUSST
NICHT
DIE
HDM-INDUZIERTE
ATEMWEGSENTZUENDUNG
..............
:
..........
54
4.
DISKUSSION
..............................................................................................................
56
4.1
P2RY2-SIGNALTRANSDUKTION
AUF
ATEMWEGSEPITHELZELLEN
FOERDERT
DIE
AKUTE
HDM-INDUZIERTE
ATEMWEGSENTZUENDUNG
...............................................................
56
4.2
P2RY2-DEFIZIENZ
IN
HAEMATOPOETISCHEN
ZELLEN
MILDERT
ALLERGEN-INDUZIERTE
AKUTE
ATEMWEGSENTZUENDUNG
...............................................................................
57
4.3
P2RY2-VERMITTELTE
SIGNALTRANSDUKTION
IN
CD4-POSITIVEN
ZELLEN
BEEINFLUSST
NICHT
DIE
PATHOGENESE
EINER
HDM-INDUZIERTEN
ATEMWEGSENTZUENDUNG
.........
58
4.4
P2RY2-SIGNALTRANSDUKTION
IN
MONOZYTEN
UND
MAKROPHAGEN
VERMITTELT
PRO
INFLAMMATORISCHE
EFFEKTE
IN
DER
ALLERGEN-INDUZIERTEN
AKUTEN
ATEMWEGSENTZUENDUNG
59
4.5
P2RY2
AUF
DENDRITISCHE
ZELLEN
IST
ENTSCHEIDEND
FUER
DIE
MIGRATION
UND
ENTSTEHUNG
DER
ALLERGEN-INDUZIERTEN
ATEMWEGSENTZUENDUNG
...........................
60
4.6
THERAPEUTISCHE
ANSAETZE
IM
ZUSAMMENHANG
MIT
P2RY2
.........................
61
4.7
SCHLUSSFOLGERUNG
..............................................................................................
63
5.
ZUSAMMENFASSUNG
................................................................................................
64
6.
LITERATURVERZEICHNIS
...............................................................................................
65
7.
ANHANG
....................................................................................................................
74
7.1
LEBENSLAUF
........................................................................................................
74
7.2
EIDESSTATTLICHE
VERSICHERUNG
..........................................................................
75
V
7.3
ERKLAERUNG
ZUM
EIGENANTEIL
DER
DISSERTATIONSSCHRIFT
.....................................
76
7.4
DANKSAGUNG
......................................................................................................
77
VI
|
| adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
I.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
VII
II.
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
.
X
III.
TABELLENVERZEICHNIS
.
XI
1.
EINLEITUNG
.
1
1.1
ASTHMA
.
1
1.1.1
ASTHMA,
DIE
HAEUFIGSTE
CHRONISCHE
ERKRANKUNG
BEI
KINDERN
.
1
1.1.2
DEFINITION
DES
ASTHMA
BRONCHIALES
.
1
1.1.2.1
EINTEILUNG
IN
ALLERGISCHES
UND
NICHT-ALLERGISCHES
ASTHMA
.
2
1.1.2.2
NEUE
EINTEILUNGEN
DES
ASTHMA
BRONCHIALES
.
2
1.1.3
GIBT
ES
EINE
ASTHMA-PRAEDISPOSITION?
.
4
1.1.3.1
GENETISCHE
PRAEDISPOSITION
.
4
1.1.3.2
HYGIENETHEORIE
.
5
1.1.3.3
RISIKOFAKTOREN
FUER
EINE
ASTHMAERKRANKUNG
.
5
1.1.4
DIE
ASTHMAPATHOGENESE
UND
EFFEKTORZELLEN
.
6
1.1.5
SYMPTOME
UND
DIAGNOSE
DES
ASTHMAS
.
9
1.1.6
THERAPIE
DES
ASTHMAS
.
11
1.2
PURINERGE
SIGNALTRANSDUKTION
.
12
1.2.1
PURINERGE
REZEPTOREN
.
12
1.2.2
FUNKTIONEN
DES
P2Y2-REZEPTORS
.
14
1.3
UNTERSUCHUNG
VON
KONDITIONELLE
MAUSLINIEN
IM
CRE/LOXP-SYSTEM
.
16
1.4
ZIELSETZUNG
.
17
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
19
2.1
MATERIALIEN
.
19
2.1.1
PUFFER/LOESUNGEN
.
19
2.1.2
ZELLKULTURMEDIEN
[HERSTELLER/FIRMA,
ORT]
.
21
2.1.3
REAGENZIEN
UND
KITS
[HERSTELLER/FIRMA,
ORT]
.
21
2.1.4
GERAETE
[HERSTELLER,
ORT]
.
24
2.1.5
SOFTWARE
[HERSTELLER/FIRMA,
ORT]
.
25
2.1.6
OLIGONUKLEOTIDE
FUER
DIE
QPCR
(5
'
-3
'
)
.
25
2.1.7
OLIGONUKLEOTIDE
FUER
DIE
PCR
.
26
2.2
MAEUSE
.
26
2.2
METHODEN
.
28
IN
2.2.1
MAUSMODELL
UND
ERHEBUNG
DER
ENTZUENDUNGSPARAMETER
.
28
2.2.1.1
MURINES
MODELL
AKUTER
HDM-INDUZIERTER
ATEMWEGSENTZUENDUNG.
28
2.2.1.2
LUNGENFUNKTIONSDIAGNOSTIK
.
28
2.2.1.3
FACS-ANALYSE
DER
ZELLEN
DER
BRONCHOALVEOLAEREN
LAVAGE
.
29
2.2.1.4
RESTIMULIERUNG
MEDIASTINALER
LYMPHKNOTENZELLEN
.
30
2.2.1.5
MESSUNG
VON
ZYTOKINKONZENTRATIONEN
MITTELS
SANDWICH-ELISA
.
31
2.2.1.6
HERSTELLUNG
VON
LUNGENHOMOGENATEN
.
32
2.2.1.7
ANFERTIGUNG
UND
FAERBUNG
HISTOLOGISCHER
LUNGENSCHNITTE
.
32
2.2.1.8
NACHWEIS
IL-33
AUF
MRNA
EBENE
.
33
2.2.2
GENOTYPISIERUNG
DER
VERSUCHSTIERE
.
33
2.2.2.1
VERPAARUNG
.
33
2.2.2.1
PROBENGEWINNUNG
.
33
2.2.2.2
POLYMERASEKETTENREAKTION
(PCR)
.
34
2.2.2.3
GELELEKTROPHORESE
.
34
2.2.3
MIGRATIONSVERSUCHE
.
35
2.2.3.1
HERSTELLUNG
VON
MONOZYTEN
AUS
KNOCHENMARKZELLEN
.
35
2.2.3.2
HERSTELLUNG
VON
DENDRITISCHEN
ZELLEN
AUS
KNOCHENMARKZELLEN.
35
2.2.3.3
IN
VITRO
MIGRATION
IN
EINEM
TRANS-WELL
SYSTEM
.
35
2.2.4
NACHWEIS
DER
FUNKTION
DES
LOXP/CRE-SYSTEMS
.
37
2.2.4.1
ISOLATION
PRIMAERER
ZELLEN
ZUM
NACHWEIS
DER
ZELLTYPSPEZFISCHEN
REKOMBINASEAKTIVITAET
.
37
2.2.4.1.1
ISOLATION
VON
MONONUKLEAEREN
ZELLEN
UND
GRANULOZYTEN
AUS
PERIPHEREM
MURINEM
BLUT
.
38
2.2.4.1.2
ENZYMATISCHER
VERDAU
VON
LUNGENGEWEBE
.
39
2.2.4.1.3
ISOLIERUNG
EPITHELIALER
ZELLEN
PER
FACS-SORTER
.
39
2.2.4.1.4
ISOLIERUNG
VON
CD11C-POSITIVEN
ZELLEN
AUS
VERDAUTEN
LUNGEN
PER
MAGNETISCHER
ZELLSEPARATION
.
40
2.2.4.1.5
MAGNETISCHE
ZELLISOLIERUNG
VON
ENDOTHELIALEN
CD146
+
ZELLEN
AUS
DER
LUNGE
.
40
2.2.4.1.6
ISOLIERUNG
VON
CD4
+
-POSITIVEN
ZELLEN
AUS
DER
MILZ
MIT
HILFE
MAGNETISCHER
ZELLSEPARATION
.
40
2.2.4.1.7
DIFFERENZIERUNG
VON
MAKROPHAGEN
AUS
UNDIFFERENZIERTEN
KNOCHENMARKZELLEN
.
41
2.2.4.2
DIE
QUANTITATIVE
POLYMERASE-KETTEN-REAKTION
(TAQMAN)
.
41
2.2.4.2.1
RNA-ISOLATION
AUS
ZELLEN
.
42
2.2.4.2.2
DIE
CDNA-SYNTHESE
.
42
IV
2.2.4.2.3
QUANTITATIVE
ECHTZEIT-PCR
.
43
2.3
STATISTIK
.
43
3.
ERGEBNISSE
.
44
3.1
P2RY2-EXPRESSION
IN
KONDITIONEILEN
KNOCK-OUT
MAEUSEN
.
44
3.2
P2RY2-DEFIZIENZ
IN
ATEMWEGSEPITHELZELLEN
VERMINDERT
DIE
HDM-INDUZIERTE
ATEMWEGSENTZUENDUNG
.
47
3.3
KNOCKOUT
DER
P2RY2-EXPRESSION
IN
HAEMATOPOETISCHEN
ZELLEN
RESULTIERT
IN
EINER
VERMINDERTEN
ALLERGISCHEN
ATEMWEGSENTZUENDUNG
.
49
3.4
DELETION
VON
P2RY2
AUF
MYELOIDEN
ZELLEN
IN
P2RY^
LYSM-CRE
+
FUEHRT
ZU
EINER
ABGESCHWAECHTEN
HDM-VERMITTELTEN
AKUTEN
ATEMWEGSENTZUENDUNG
.
51
3.5
MAEUSE
DEREN
P2Y2-REZEPTOR
AUF
CD11C
+
ZELLEN
DELETIERT
IST,
ZEIGEN
VERMINDERTE
AKUTE
HDM-INDUZIERTE
ATEMWEGSENTZUENDUNG
.
52
3.6
DENDRITISCHE
ZELLEN,
DIE
AUS
KNOCHENMARKSZELLEN
VON
P2TY2^
L/FL
VAV-CRE
+
UND
CD11C-CRE
+
MAEUSEN
DIFFERENZIERT
WURDEN,
ZEIGEN
IN
VITRO
EINE
VERMINDERTE
MIGRATION
IN
RICHTUNG
ATP
53
3.7
DER
KNOCKOUT
VON
P2RY2
IN
CD4
+
-ZELLEN
IN
P2RY^
CD4-CRE
+
MAEUSEN
BEEINFLUSST
NICHT
DIE
HDM-INDUZIERTE
ATEMWEGSENTZUENDUNG
.
:
.
54
4.
DISKUSSION
.
56
4.1
P2RY2-SIGNALTRANSDUKTION
AUF
ATEMWEGSEPITHELZELLEN
FOERDERT
DIE
AKUTE
HDM-INDUZIERTE
ATEMWEGSENTZUENDUNG
.
56
4.2
P2RY2-DEFIZIENZ
IN
HAEMATOPOETISCHEN
ZELLEN
MILDERT
ALLERGEN-INDUZIERTE
AKUTE
ATEMWEGSENTZUENDUNG
.
57
4.3
P2RY2-VERMITTELTE
SIGNALTRANSDUKTION
IN
CD4-POSITIVEN
ZELLEN
BEEINFLUSST
NICHT
DIE
PATHOGENESE
EINER
HDM-INDUZIERTEN
ATEMWEGSENTZUENDUNG
.
58
4.4
P2RY2-SIGNALTRANSDUKTION
IN
MONOZYTEN
UND
MAKROPHAGEN
VERMITTELT
PRO
INFLAMMATORISCHE
EFFEKTE
IN
DER
ALLERGEN-INDUZIERTEN
AKUTEN
ATEMWEGSENTZUENDUNG
59
4.5
P2RY2
AUF
DENDRITISCHE
ZELLEN
IST
ENTSCHEIDEND
FUER
DIE
MIGRATION
UND
ENTSTEHUNG
DER
ALLERGEN-INDUZIERTEN
ATEMWEGSENTZUENDUNG
.
60
4.6
THERAPEUTISCHE
ANSAETZE
IM
ZUSAMMENHANG
MIT
P2RY2
.
61
4.7
SCHLUSSFOLGERUNG
.
63
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
64
6.
LITERATURVERZEICHNIS
.
65
7.
ANHANG
.
74
7.1
LEBENSLAUF
.
74
7.2
EIDESSTATTLICHE
VERSICHERUNG
.
75
V
7.3
ERKLAERUNG
ZUM
EIGENANTEIL
DER
DISSERTATIONSSCHRIFT
.
76
7.4
DANKSAGUNG
.
77
VI |
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Inhaltsverzeichnis