Verfügbarkeit: Die Rolle des Inducible cAMP Early Repressor (ICER) für das kardiale, elektrische Remodeling nach 24-stündiger β-adrenerger Stimulation im Mausmodell

Die Rolle des Inducible cAMP Early Repressor (ICER) für das kardiale, elektrische Remodeling nach 24-stündiger β-adrenerger Stimulation im Mausmodell:

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Bibliographische Detailangaben
1. Verfasser:	Obergassel, Justus 1995- (VerfasserIn)
Format:	Abschlussarbeit Buch
Sprache:	German
Veröffentlicht:	Münster 2022
Schlagworte:	Tiermodell Herzmuskelzelle Maus Hochschulschrift
Online-Zugang:	Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis
Beschreibung:	101, II Blätter Illustrationen, Diagramme 30 cm

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adam_text	INHALT 1 EINLEITUNG ................................................................................................................. 9 1.1 HERZMUSKELKONTRAKTION UND HERZAKTIONSPOTENTIAL ............................................ 9 1.2 KURZFRISTIGE SS-ADRENERGE REGULIERUNG DER HERZLEISTUNG ................................. 13 1.3 HERZINSUFFIZIENZ .............................................................................................. 13 1.4 KARDIALES REMODELING DURCH CHRONISCHE SS-ADRENERGE STIMULATION UND KARDIALE ARRHYTHMOGENITAET BEI HERZINSUFFIZIENZ ....................................................................... 15 1.5 TRANSKRIPTION BEI SS-ADRENERGER STIMULATION .................................................... 17 1.5.1 CAMP-ABHAENGIGER SIGNALWEG ..................................................................... 17 1.5.2 CAMP-ABHAENGIGE TRANSKRIPTIONSFAKTOREN ................................................... 17 1.5.3 CREM-GEN UND CREM-ISOFORMEN ............................................................. 18 1.5.4 TRANSKRIPTIONSFAKTOR ICER .......................................................................... 19 1.6 DIE BEDEUTUNG VON CREB, CREM UND ICER IM HERZEN .............................. 20 1.7 ZIELSETZUNG DER ARBEIT .................................................................................... 22 2 MATERIAL UND METHODEN ......................................................................................... 24 2.1 VERSUCHSTIERE ................................................................................................. 24 2.1.1 BEHANDLUNG DER MAEUSE MIT ISOPRENALIN ..................................................... 24 2.2 PATCH-CLAMP-TECHNIK AN ISOLIERTEN VENTRIKULAEREN KARDIOMYOZYTEN ............... 25 2.2.1 ISOLATION MURINER VENTRIKULAERER KARDIOMYOZYTEN ........................................ 26 2.2.2 AUFBAU DES PATCH-CLAMP MESSSTANDES .................................................... 28 2.2.3 HERSTELLUNG DER PATCHPIPETTEN .................................................................... 28 2.2.4 LOESUNGEN FUER DIE PATCH-CLAMP MESSUNGEN .............................................. 29 2.2.5 ELEKTRISCHE EIGENSCHAFTEN DER WHOLE-CELL KONFIGURATION .......................... 30 2.2.6 PRAKTISCHE DURCHFUEHRUNG DER PATCH-CLAMP MESSUNGEN ............................ 31 2.2.6.1 VORBEREITUNG DER MESSUNGEN ............................................................. 31 2.2.6.2 HERANFUEHREN DER PIPETTE, AUSGLEICHEN DES OFFSET-POTENTIALS, KAPAZITAETSKOMPENSATION, HERSTELLUNG DES SEALS .............................................. 31 2.2.6.3 ZELLWANDPERFORATION UND HERSTELLUNG DER WHOLE-CELL KONFIGURATION.. 33 2.2.7 STIMULATIONSPROTOKOLLE DER PATCH-CLAMP MESSUNGEN ................................ 33 2.2.7.1 STIMULATIONSPROTOKOLL AKTIONSPOTENTIALE UND UNSEPARIERTER GESAMTKALIUMSTROM (IK, TOTAL) ................................................................................ 33 2.2.7.2 STIMULATIONSPROTOKOLL L-TYP-CALCIUMSTROM ........................................ 35 2.2.8 AKUTE ISOPRENALIN-APPLIKATION MIT SCHNELLER KAMMERPERFUSION ................. 36 2.2.9 AUSWERTUNG DER PATCH-CLAMP MESSUNGEN ................................................ 37 2.2.9.1 AUSWERTUNG DER AKTIONSPOTENTIALE ...................................................... 37 2.2.9.2 AUSWERTUNG DER ZELLKAPAZITAET ............................................................. 37 2.2.9.3 AUSWERTUNG DES GESAMTKALIUMSTROMS ............................................... 38 2.2.9.4 AUSWERTUNG DES L-TYP-CALCIUMSTROMS .............................................. 41 2.3 BESTIMMUNG DES MRNA-SPIEGELS VON GENEN VERSCHIEDENER LONENKANALPROTEINE IN VCM MITTELS QUANTITATIVER ECHTZEIT-PCR ................................ 42 2.3.1 PROBENGEWINNUNG, MRNA-LSOLATION AUS DEM MURINEN GEWEBE UND UMSCHREIBEN IN CDNA MITTELS REVERSE-TRANSKRIPTASE-PCR ................................. 42 2.3.2 QUANTITATIVE ECHTZEIT-PCR MIT DEM LIGHTCYCLER 480 ............................. 43 2.3.3 PRIMER FUER DIE QUANTITATIVE ECHTZEIT-PCR ................................................... 45 2.4 WESTERN BLOT ANALYSE .................................................................................... 47 2.4.1 PROBENGEWINNUNG UND HOMOGENISIERUNG DER MURINEN PROBEN ................ 47 2.4.2 BESTIMMUNG DES PROTEIN-GEHALTS NACH BRADFORD ..................................... 47 2.4.3 NATRIUMDODECYLSULFAT -POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE ........................... 48 2.4.4 WESTERN BLOT.. ............................................................................................ 48 2.5 GRAPHISCHE DARSTELLUNG UND STATISTIK ............................................................ 50 3 ERGEBNISSE ............................................................................................................. 51 3.1 AUSWIRKUNG DER ICER-DELETION AUF DAS KARDIALE AKTIONSPOTENTIAL ................. 51 3.1.1 AKTIONSPOTENTIALDAUER UNTER BASALBEDINGUNGEN ....................................... 52 3.1.2 AKTIONSPOTENTIALDAUER UNTER AKUTER ISOPRENALIN-APPLIKATION ...................... 54 3.1.3 AKTIONSPOTENTIALAMPLITUDE ......................................................................... 57 3.2 AUSWIRKUNG DER ICER-DELETION AUF DEN GESAMTKALIUMSTROM .................... 58 3.3 AUSWIRKUNG DER ICER-DELETION AUF DIE L-TYP-CALCIUMSTROEME .................... 61 3.4 AUSWIRKUNG DER ICER-DELETION AUF DIE MRNA-SPIEGEL DER GENE VON 16 LONENKANALUNTEREINHEITEN .......................................................................................... 63 3.5 AUSWIRKUNG DER ICER-DELETION AUF DIE PROTEIN-SPIEGEL DER ITO LONENKANALUNTEREINHEITEN KV4.2, KV4.3 UND KCHLP2 ................................................. 65 4 DISKUSSION .............................................................................................................. 67 4.1 ICER SCHUETZT VOR VERLAENGERUNG DES AKTIONSPOTENTIALS NACH 24-STUENDIGER ISOPRENALIN-STIMULATION .............................................................................................. 68 4.1.1 ICER IST KEIN REGULATOR DER AKTIONSPOTENTIALDAUER UNTER PHYSIOLOGISCHEN BEDINGUNGEN ........................................................................................................ 71 4.2 ICER SCHUETZT VOR EINEM REMODELING DER KALIUM UND CALCIUMSTROEME NACH 24 STUENDIGER ISOPRENALIN-STIMULATION ............................................................................. 72 4.2.1 ICER SCHUETZT VOR EINER IKTOTAI-REDUKTION NACH 24-STUENDIGER ISOPRENALIN STIMULATION ............................................................................................................. 72 4.2.2 LCA,L-REDUKTION IN ICER-KO24HISO MAEUSEN ALS MOEGLICHER KOMPENSATIONSMECHANISMUS IM RAHMEN DER AP-VERLAENGERUNG ........................ 74 4.2.3 ICER HAT SCHEINBAR KEINEN EINFLUSS AUF EIN REMODELING DER NATRIUMSTROEME 76 4.3 ICER HAT KEINEN EINFLUSS AUF DIE TRANSKRIPTION ZENTRALER LONENKANALUNTEREINHEITEN NACH 24-STUENDIGER ISOPRENALIN-STIMULATION ...................... 76 4.4 REDUZIERTE STIMULATIONSFAEHIGKEIT DER ICER-KO24MSO MAEUSE UNTER AKUTER ISOPRENALIN-APPLIKATION DEUTET AUF EINE REGULATION DER PHOSPHORYLIERUNG VON LONENKANAELEN DURCH ICER HIN ................................................................................... 78 4.5 ZUSAMMENFASSENDE BEDEUTUNG VON ICER ZUM SCHUTZ VOR EINEM KARDIALEN REMODELING NACH 24-STUENDIGER SS-ADRENERGER STIMULATION ......................................... 79 4.6 AUSBLICK UND WEITERE FORSCHUNGSARBEIT ........................................................ 81 5 ZUSAMMENFASSUNG ................................................................................................. 83 6 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS .......................................................................................... 84 7 ABBILDUNGSVERZEICHNIS ........................................................................................... 91 8 TABELLENVERZEICHNIS ............................................................................................... 93 9 TABELLARISCHER LEBENSLAUF VON JUSTUS OBERGASSEL ................................................ 94 10 DANKSAGUNG .......................................................................................................... 96 11 LITERATUR ................................................................................................................. 97 12 ANHANG .................................................................................................................... I
adam_txt	INHALT 1 EINLEITUNG . 9 1.1 HERZMUSKELKONTRAKTION UND HERZAKTIONSPOTENTIAL . 9 1.2 KURZFRISTIGE SS-ADRENERGE REGULIERUNG DER HERZLEISTUNG . 13 1.3 HERZINSUFFIZIENZ . 13 1.4 KARDIALES REMODELING DURCH CHRONISCHE SS-ADRENERGE STIMULATION UND KARDIALE ARRHYTHMOGENITAET BEI HERZINSUFFIZIENZ . 15 1.5 TRANSKRIPTION BEI SS-ADRENERGER STIMULATION . 17 1.5.1 CAMP-ABHAENGIGER SIGNALWEG . 17 1.5.2 CAMP-ABHAENGIGE TRANSKRIPTIONSFAKTOREN . 17 1.5.3 CREM-GEN UND CREM-ISOFORMEN . 18 1.5.4 TRANSKRIPTIONSFAKTOR ICER . 19 1.6 DIE BEDEUTUNG VON CREB, CREM UND ICER IM HERZEN . 20 1.7 ZIELSETZUNG DER ARBEIT . 22 2 MATERIAL UND METHODEN . 24 2.1 VERSUCHSTIERE . 24 2.1.1 BEHANDLUNG DER MAEUSE MIT ISOPRENALIN . 24 2.2 PATCH-CLAMP-TECHNIK AN ISOLIERTEN VENTRIKULAEREN KARDIOMYOZYTEN . 25 2.2.1 ISOLATION MURINER VENTRIKULAERER KARDIOMYOZYTEN . 26 2.2.2 AUFBAU DES PATCH-CLAMP MESSSTANDES . 28 2.2.3 HERSTELLUNG DER PATCHPIPETTEN . 28 2.2.4 LOESUNGEN FUER DIE PATCH-CLAMP MESSUNGEN . 29 2.2.5 ELEKTRISCHE EIGENSCHAFTEN DER WHOLE-CELL KONFIGURATION . 30 2.2.6 PRAKTISCHE DURCHFUEHRUNG DER PATCH-CLAMP MESSUNGEN . 31 2.2.6.1 VORBEREITUNG DER MESSUNGEN . 31 2.2.6.2 HERANFUEHREN DER PIPETTE, AUSGLEICHEN DES OFFSET-POTENTIALS, KAPAZITAETSKOMPENSATION, HERSTELLUNG DES SEALS . 31 2.2.6.3 ZELLWANDPERFORATION UND HERSTELLUNG DER WHOLE-CELL KONFIGURATION. 33 2.2.7 STIMULATIONSPROTOKOLLE DER PATCH-CLAMP MESSUNGEN . 33 2.2.7.1 STIMULATIONSPROTOKOLL AKTIONSPOTENTIALE UND UNSEPARIERTER GESAMTKALIUMSTROM (IK, TOTAL) . 33 2.2.7.2 STIMULATIONSPROTOKOLL L-TYP-CALCIUMSTROM . 35 2.2.8 AKUTE ISOPRENALIN-APPLIKATION MIT SCHNELLER KAMMERPERFUSION . 36 2.2.9 AUSWERTUNG DER PATCH-CLAMP MESSUNGEN . 37 2.2.9.1 AUSWERTUNG DER AKTIONSPOTENTIALE . 37 2.2.9.2 AUSWERTUNG DER ZELLKAPAZITAET . 37 2.2.9.3 AUSWERTUNG DES GESAMTKALIUMSTROMS . 38 2.2.9.4 AUSWERTUNG DES L-TYP-CALCIUMSTROMS . 41 2.3 BESTIMMUNG DES MRNA-SPIEGELS VON GENEN VERSCHIEDENER LONENKANALPROTEINE IN VCM MITTELS QUANTITATIVER ECHTZEIT-PCR . 42 2.3.1 PROBENGEWINNUNG, MRNA-LSOLATION AUS DEM MURINEN GEWEBE UND UMSCHREIBEN IN CDNA MITTELS REVERSE-TRANSKRIPTASE-PCR . 42 2.3.2 QUANTITATIVE ECHTZEIT-PCR MIT DEM LIGHTCYCLER 480 . 43 2.3.3 PRIMER FUER DIE QUANTITATIVE ECHTZEIT-PCR . 45 2.4 WESTERN BLOT ANALYSE . 47 2.4.1 PROBENGEWINNUNG UND HOMOGENISIERUNG DER MURINEN PROBEN . 47 2.4.2 BESTIMMUNG DES PROTEIN-GEHALTS NACH BRADFORD . 47 2.4.3 NATRIUMDODECYLSULFAT -POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE . 48 2.4.4 WESTERN BLOT. . 48 2.5 GRAPHISCHE DARSTELLUNG UND STATISTIK . 50 3 ERGEBNISSE . 51 3.1 AUSWIRKUNG DER ICER-DELETION AUF DAS KARDIALE AKTIONSPOTENTIAL . 51 3.1.1 AKTIONSPOTENTIALDAUER UNTER BASALBEDINGUNGEN . 52 3.1.2 AKTIONSPOTENTIALDAUER UNTER AKUTER ISOPRENALIN-APPLIKATION . 54 3.1.3 AKTIONSPOTENTIALAMPLITUDE . 57 3.2 AUSWIRKUNG DER ICER-DELETION AUF DEN GESAMTKALIUMSTROM . 58 3.3 AUSWIRKUNG DER ICER-DELETION AUF DIE L-TYP-CALCIUMSTROEME . 61 3.4 AUSWIRKUNG DER ICER-DELETION AUF DIE MRNA-SPIEGEL DER GENE VON 16 LONENKANALUNTEREINHEITEN . 63 3.5 AUSWIRKUNG DER ICER-DELETION AUF DIE PROTEIN-SPIEGEL DER ITO LONENKANALUNTEREINHEITEN KV4.2, KV4.3 UND KCHLP2 . 65 4 DISKUSSION . 67 4.1 ICER SCHUETZT VOR VERLAENGERUNG DES AKTIONSPOTENTIALS NACH 24-STUENDIGER ISOPRENALIN-STIMULATION . 68 4.1.1 ICER IST KEIN REGULATOR DER AKTIONSPOTENTIALDAUER UNTER PHYSIOLOGISCHEN BEDINGUNGEN . 71 4.2 ICER SCHUETZT VOR EINEM REMODELING DER KALIUM UND CALCIUMSTROEME NACH 24 STUENDIGER ISOPRENALIN-STIMULATION . 72 4.2.1 ICER SCHUETZT VOR EINER IKTOTAI-REDUKTION NACH 24-STUENDIGER ISOPRENALIN STIMULATION . 72 4.2.2 LCA,L-REDUKTION IN ICER-KO24HISO MAEUSEN ALS MOEGLICHER KOMPENSATIONSMECHANISMUS IM RAHMEN DER AP-VERLAENGERUNG . 74 4.2.3 ICER HAT SCHEINBAR KEINEN EINFLUSS AUF EIN REMODELING DER NATRIUMSTROEME 76 4.3 ICER HAT KEINEN EINFLUSS AUF DIE TRANSKRIPTION ZENTRALER LONENKANALUNTEREINHEITEN NACH 24-STUENDIGER ISOPRENALIN-STIMULATION . 76 4.4 REDUZIERTE STIMULATIONSFAEHIGKEIT DER ICER-KO24MSO MAEUSE UNTER AKUTER ISOPRENALIN-APPLIKATION DEUTET AUF EINE REGULATION DER PHOSPHORYLIERUNG VON LONENKANAELEN DURCH ICER HIN . 78 4.5 ZUSAMMENFASSENDE BEDEUTUNG VON ICER ZUM SCHUTZ VOR EINEM KARDIALEN REMODELING NACH 24-STUENDIGER SS-ADRENERGER STIMULATION . 79 4.6 AUSBLICK UND WEITERE FORSCHUNGSARBEIT . 81 5 ZUSAMMENFASSUNG . 83 6 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS . 84 7 ABBILDUNGSVERZEICHNIS . 91 8 TABELLENVERZEICHNIS . 93 9 TABELLARISCHER LEBENSLAUF VON JUSTUS OBERGASSEL . 94 10 DANKSAGUNG . 96 11 LITERATUR . 97 12 ANHANG . I
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