Modulation des Phänotyps von vaskulären Glattmuskelzellen durch cAMP-abhängige Transkriptionsfaktoren:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Münster
2022
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| Beschreibung: | IV, 126 Blätter Illustrationen, Diagramme 30 cm |
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
I
1
EINLEITUNG
1
1.1
DAS
VASKULAERE
SYSTEM
1
1.1.1
ANATOMIE
DER
ARTERIENWAND
1
1.2
GEFAESSPROLIFERATIVE
ERKRANKUNGEN
UND
STRUKTURELLER
UMBAU
VON
BLUTGEFAESSEN
4
1.2.1
MOLEKULARE
MECHANISMEN
DER
NEOINTIMA-BILDUNG
6
1.3
CAMP-ABHAENGIGE
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
DER
CREB/CREM/ATF-1
FAMILIE
11
1.3.1
DAS
CREM
GEN
UND
SEINE
ISOFORMEN
ICER
UND
SMICER
13
1.3.2
PHYSIOLOGISCHE
BEDEUTUNG
VON
CREB,
CREM
UND
IHREN
ISOFORMEN
16
1.4
ZIELSETZUNG
DER
DISSERTATION
18
2
MATERIAL
UND
METHODEN
20
2.1
VERSUCHSTIERE
20
2.1.1
ZUCHT
UND
HALTUNG
DER
VERSUCHSTIERE
20
2.1.2
MAEUSE
MIT
GLOBALER
INAKTIVIERUNG
VON
ICER
21
2.1.3
MAEUSE
MIT
INDUZIERBARER,
GLATTMUSKELSPEZIFISCHER
AKTIVIERUNG
DER
CRE
REKOMBINASE
UNTER
DEM
SMMHC-PROMOTOR
21
2.2
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
22
2.2.1
POLYMERASE-KETTENREAKTION
FUER
DIE
GENOTYPISIERUNG
DER
VERSUCHSTIERE
22
2.2.2
GENOTYPISIERUNG
DER
ICER-KO
TIERLINIE
22
2.2.3
GENOTYPISIERUNG
DER
SM-ICRE-ERT2-CRE-DTTOMATO
TIERLINIE
23
2.2.4
DNA-AGAROSEGELELEKTROPHORESE
26
2.2.5
MRNA
ISOLATION
AUS
ZELLEN
26
2.2.6
PHOTOMETRISCHE
BESTIMMUNG
DER
RNA-KONZENTRATION
27
2.2.7
REVERSE
TRANSKRIPTION
FUER
DIE
CDNA-SYNTHESE
27
2.2.8
QUANTITATIVE
ECHTZEIT-PCR
(QRT-PCR)
28
2.2.9
PUFFER
FUER
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
30
2.2.10
OLIGONUKLEOTIDE
FUER
DIE
GENOTYPISIERUNGEN
DER
VERSUCHSTIERE
30
2.2.11
PRIMERSEQUENZEN
FUER
QRT-PCR
31
2.2.12
CHEMIKALIEN
FUER
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
32
2.3
ZELLBIOLOGISCHE
METHODEN:
SEKUNDAERE
ZELLKULTUR
32
2.3.1
KULTIVIERUNG
UND
PASSAGIEREN
VON
SEKUNDAEREN
ZELLLINIEN
(A7R5)
32
2.3.2
EINFRIEREN
/
AUFTAUEN
SEKUNDAERER
ZELLLINIEN
33
2.4
ZELLBIOLOGISCHE
METHODEN:
PRIMAERE
ZELLKULTUR
34
2.4.1
ISOLATION
PRIMAERER
MEDIALER
VSMCS
AUS
MURINEN
AORTEN
34
2.4.2
PASSAGIEREN
VON
PRIMAEREN
ZELLEN
35
2.4.3
FIXIERUNG
ADHAERENTER
VSMCS
35
2.4.4
PROLIFERATIONSUNTERSUCHUNGEN
MITTELS
REAL-TIME
CELL
ASSAY
(RTCA)
35
2.4.5
VORBEREITUNG
PRIMAERER
VSMCS
UND
ADVENTITIA-ZELLEN
FUER
PROLIFERATIONS
UNTERSUCHUNGEN
37
2.4.6
STIMULATION
PRIMAERER
VSMCS
UND
ADVENTITIA-ZELLEN
MIT
NKH477
UND
PDGF-BB
37
2.4.7
NAEHRMEDIEN,
LOESUNGEN
UND
CHEMIKALIEN
39
2.4.8
VERBRAUCHSMATERIAL
41
2.5
IMMUNHISTOLOGISCHE
FAERBUNGEN
42
2.5.1
IMMUNHISTOLOGISCHER
PROTEINNACHWEIS
IN
PRIMAEREN
VSMCS
42
2.5.2
IMMUNHISTOLOGISCHE
FAERBUNGEN
IN
MURINEN
AORTEN
43
2.5.2.1
EXPLANTATION
UND
HERSTELLUNG
HISTOLOGISCHER
PRAEPARATE
43
2.5.2.2
DEPARAFFINIERUNG
UND
REHYDRIERUNG
VON
PARAFFIN-GEWEBESCHNITTEN
44
2.5.2.3
IMMUNHISTOLOGISCHER
PROTEINNACHWEIS
45
2.5.3
ANTIKOERPER
FUER
IMMUNHISTOLOGISCHE
UNTERSUCHUNGEN
46
2.5.4
LOESUNGEN
UND
CHEMIKALIEN
46
2.5.5
VERBRAUCHSMATERIAL
47
2.6
STATISTISCHE
AUSWERTUNGEN
48
3
ERGEBNISSE
49
3.1
ETABLIERUNG
EINER
ISOLATIONSMETHODE
FUER
PRIMAERE
MURINE
VSMCS
UND
ADVENTITIA-ZELLEN
50
3.2
CHARAKTERISIERUNG
VON
PRIMAEREN
VSMCS
54
3.2.1
IMMUNFLUORESZENZFAERBUNGEN
MIT
PUBLIZIERTEN
VSMC-MARKERN
SIND
NICHT
ZUR
EINDEUTIGEN
CHARAKTERISIERUNG
VON
VSMCS
GEEIGNET
54
3.2.2
ANALYSE
DER
MRNA-SPIEGEL
UND
IDENTIFIKATION
VON
CD31
UND
CD34
ALS
POTENZIELLE
VSMC-MARKER
56
3.3
UNTERSUCHUNG
DER
PROLIFERATION
VON
PRIMAEREN
VSMCS
UND
ADVENTITIA-ZELLEN
IM
REAL-TIME
CELL
ASSAY
60
3.3.1
BASALE
PROLIFERATION
UND
SERUMENTZUG
62
3.3.2
AUSWIRKUNGEN
DER
STIMULATION
DES
CAMP-ABHAENGIGEN
SIGNALWEGES
DURCH
NKH477
63
3.3.3
PDGF-BB
HAT
KEINEN
EINFLUSS
AUF
DIE
PROLIFERATIONSRATE
64
3.4
UNTERSUCHUNG
DER
A7R5-ZELLLINIE
ALS
MODELL
FUER
PRIMAERE
VSMCS
67
3.4.1
BASALE
PROLIFERATION
VON
A7R5-ZELLEN
IM
REAL-TIME
CELL
ASSAY
67
3.4.2
AUSWIRKUNGEN
DER
STIMULATION
DES
CAMP-ABHAENGIGEN
SIGNALWEGES
DURCH
NKH477
68
3.4.3
AUSWIRKUNGEN
DER
STIMULATION
DES
CAMP-ABHAENGIGEN
SIGNALWEGES
AUF
DIE
MRNA-EXPRESSION
70
3.4.4
A7R5-ZELLEN
WEISEN
SIGNIFIKANTE
UNTERSCHIEDE
IN
DER
MRNA-EXPRESSION
ZU
PRIMAEREN
VSMCS
UND
ADVENTITIA-ZELLEN
AUF
72
3.5
DIE
BEDEUTUNG
VON
ICER
FUER
DIE
PROLIFERATION
VON
PRIMAEREN
VSMCS
73
3.5.1
KEINE
UNTERSCHIEDE
IN
DER
BASALEN
PROLIFERATION
VON
ICER-KO
UND
WT
VSMCS
IM
REAL-TIME
CELL
ASSAY
73
3.5.2
INHIBITION
DER
PROLIFERATION
VON
ICER-KO
UND
WT
ADVENTITIA-ZELLEN
DURCH
NHK477
75
3.5.3
INHIBITION
DER
PROLIFERATION
DURCH
NKH477
IN
BEIDEN
GENOTYPEN
AUCH
UNTER
PDGF-BB
STIMULATION
77
3.6
MRNA-SPIEGEL
VON
ICER-KO
UND
WT
VSMCS
IM
VERGLEICH
82
4
DISKUSSION
87
4.1
ISOLATION
UND
CHARAKTERISIERUNG
VON
REINEN
PRIMAEREN
VSMC-KULTUREN
88
4.3
A7R5-ZELLEN
UNTERSCHEIDEN
SICH
FUNKTIONELL
VON
PRIMAEREN
MURINEN
VSMCS
95
4.4
ICER
HAT
KEINEN
EINFLUSS
AUF
DIE
IN
VITRO
PROLIFERATION
VON
PRIMAEREN
VSMCS
97
5
ZUSAMMENFASSUNG
103
6
GERAETE
UND
CHEMIKALIEN
105
7
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
106
8
TABELLENVERZEICHNIS
109
9
LITERATURVERZEICHNIS
110
10
LEBENSLAUF
123
11
DANKSAGUNG
125
12
ERKLAERUNG
126
|
| adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
I
1
EINLEITUNG
1
1.1
DAS
VASKULAERE
SYSTEM
1
1.1.1
ANATOMIE
DER
ARTERIENWAND
1
1.2
GEFAESSPROLIFERATIVE
ERKRANKUNGEN
UND
STRUKTURELLER
UMBAU
VON
BLUTGEFAESSEN
4
1.2.1
MOLEKULARE
MECHANISMEN
DER
NEOINTIMA-BILDUNG
6
1.3
CAMP-ABHAENGIGE
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
DER
CREB/CREM/ATF-1
FAMILIE
11
1.3.1
DAS
CREM
GEN
UND
SEINE
ISOFORMEN
ICER
UND
SMICER
13
1.3.2
PHYSIOLOGISCHE
BEDEUTUNG
VON
CREB,
CREM
UND
IHREN
ISOFORMEN
16
1.4
ZIELSETZUNG
DER
DISSERTATION
18
2
MATERIAL
UND
METHODEN
20
2.1
VERSUCHSTIERE
20
2.1.1
ZUCHT
UND
HALTUNG
DER
VERSUCHSTIERE
20
2.1.2
MAEUSE
MIT
GLOBALER
INAKTIVIERUNG
VON
ICER
21
2.1.3
MAEUSE
MIT
INDUZIERBARER,
GLATTMUSKELSPEZIFISCHER
AKTIVIERUNG
DER
CRE
REKOMBINASE
UNTER
DEM
SMMHC-PROMOTOR
21
2.2
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
22
2.2.1
POLYMERASE-KETTENREAKTION
FUER
DIE
GENOTYPISIERUNG
DER
VERSUCHSTIERE
22
2.2.2
GENOTYPISIERUNG
DER
ICER-KO
TIERLINIE
22
2.2.3
GENOTYPISIERUNG
DER
SM-ICRE-ERT2-CRE-DTTOMATO
TIERLINIE
23
2.2.4
DNA-AGAROSEGELELEKTROPHORESE
26
2.2.5
MRNA
ISOLATION
AUS
ZELLEN
26
2.2.6
PHOTOMETRISCHE
BESTIMMUNG
DER
RNA-KONZENTRATION
27
2.2.7
REVERSE
TRANSKRIPTION
FUER
DIE
CDNA-SYNTHESE
27
2.2.8
QUANTITATIVE
ECHTZEIT-PCR
(QRT-PCR)
28
2.2.9
PUFFER
FUER
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
30
2.2.10
OLIGONUKLEOTIDE
FUER
DIE
GENOTYPISIERUNGEN
DER
VERSUCHSTIERE
30
2.2.11
PRIMERSEQUENZEN
FUER
QRT-PCR
31
2.2.12
CHEMIKALIEN
FUER
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
32
2.3
ZELLBIOLOGISCHE
METHODEN:
SEKUNDAERE
ZELLKULTUR
32
2.3.1
KULTIVIERUNG
UND
PASSAGIEREN
VON
SEKUNDAEREN
ZELLLINIEN
(A7R5)
32
2.3.2
EINFRIEREN
/
AUFTAUEN
SEKUNDAERER
ZELLLINIEN
33
2.4
ZELLBIOLOGISCHE
METHODEN:
PRIMAERE
ZELLKULTUR
34
2.4.1
ISOLATION
PRIMAERER
MEDIALER
VSMCS
AUS
MURINEN
AORTEN
34
2.4.2
PASSAGIEREN
VON
PRIMAEREN
ZELLEN
35
2.4.3
FIXIERUNG
ADHAERENTER
VSMCS
35
2.4.4
PROLIFERATIONSUNTERSUCHUNGEN
MITTELS
REAL-TIME
CELL
ASSAY
(RTCA)
35
2.4.5
VORBEREITUNG
PRIMAERER
VSMCS
UND
ADVENTITIA-ZELLEN
FUER
PROLIFERATIONS
UNTERSUCHUNGEN
37
2.4.6
STIMULATION
PRIMAERER
VSMCS
UND
ADVENTITIA-ZELLEN
MIT
NKH477
UND
PDGF-BB
37
2.4.7
NAEHRMEDIEN,
LOESUNGEN
UND
CHEMIKALIEN
39
2.4.8
VERBRAUCHSMATERIAL
41
2.5
IMMUNHISTOLOGISCHE
FAERBUNGEN
42
2.5.1
IMMUNHISTOLOGISCHER
PROTEINNACHWEIS
IN
PRIMAEREN
VSMCS
42
2.5.2
IMMUNHISTOLOGISCHE
FAERBUNGEN
IN
MURINEN
AORTEN
43
2.5.2.1
EXPLANTATION
UND
HERSTELLUNG
HISTOLOGISCHER
PRAEPARATE
43
2.5.2.2
DEPARAFFINIERUNG
UND
REHYDRIERUNG
VON
PARAFFIN-GEWEBESCHNITTEN
44
2.5.2.3
IMMUNHISTOLOGISCHER
PROTEINNACHWEIS
45
2.5.3
ANTIKOERPER
FUER
IMMUNHISTOLOGISCHE
UNTERSUCHUNGEN
46
2.5.4
LOESUNGEN
UND
CHEMIKALIEN
46
2.5.5
VERBRAUCHSMATERIAL
47
2.6
STATISTISCHE
AUSWERTUNGEN
48
3
ERGEBNISSE
49
3.1
ETABLIERUNG
EINER
ISOLATIONSMETHODE
FUER
PRIMAERE
MURINE
VSMCS
UND
ADVENTITIA-ZELLEN
50
3.2
CHARAKTERISIERUNG
VON
PRIMAEREN
VSMCS
54
3.2.1
IMMUNFLUORESZENZFAERBUNGEN
MIT
PUBLIZIERTEN
VSMC-MARKERN
SIND
NICHT
ZUR
EINDEUTIGEN
CHARAKTERISIERUNG
VON
VSMCS
GEEIGNET
54
3.2.2
ANALYSE
DER
MRNA-SPIEGEL
UND
IDENTIFIKATION
VON
CD31
UND
CD34
ALS
POTENZIELLE
VSMC-MARKER
56
3.3
UNTERSUCHUNG
DER
PROLIFERATION
VON
PRIMAEREN
VSMCS
UND
ADVENTITIA-ZELLEN
IM
REAL-TIME
CELL
ASSAY
60
3.3.1
BASALE
PROLIFERATION
UND
SERUMENTZUG
62
3.3.2
AUSWIRKUNGEN
DER
STIMULATION
DES
CAMP-ABHAENGIGEN
SIGNALWEGES
DURCH
NKH477
63
3.3.3
PDGF-BB
HAT
KEINEN
EINFLUSS
AUF
DIE
PROLIFERATIONSRATE
64
3.4
UNTERSUCHUNG
DER
A7R5-ZELLLINIE
ALS
MODELL
FUER
PRIMAERE
VSMCS
67
3.4.1
BASALE
PROLIFERATION
VON
A7R5-ZELLEN
IM
REAL-TIME
CELL
ASSAY
67
3.4.2
AUSWIRKUNGEN
DER
STIMULATION
DES
CAMP-ABHAENGIGEN
SIGNALWEGES
DURCH
NKH477
68
3.4.3
AUSWIRKUNGEN
DER
STIMULATION
DES
CAMP-ABHAENGIGEN
SIGNALWEGES
AUF
DIE
MRNA-EXPRESSION
70
3.4.4
A7R5-ZELLEN
WEISEN
SIGNIFIKANTE
UNTERSCHIEDE
IN
DER
MRNA-EXPRESSION
ZU
PRIMAEREN
VSMCS
UND
ADVENTITIA-ZELLEN
AUF
72
3.5
DIE
BEDEUTUNG
VON
ICER
FUER
DIE
PROLIFERATION
VON
PRIMAEREN
VSMCS
73
3.5.1
KEINE
UNTERSCHIEDE
IN
DER
BASALEN
PROLIFERATION
VON
ICER-KO
UND
WT
VSMCS
IM
REAL-TIME
CELL
ASSAY
73
3.5.2
INHIBITION
DER
PROLIFERATION
VON
ICER-KO
UND
WT
ADVENTITIA-ZELLEN
DURCH
NHK477
75
3.5.3
INHIBITION
DER
PROLIFERATION
DURCH
NKH477
IN
BEIDEN
GENOTYPEN
AUCH
UNTER
PDGF-BB
STIMULATION
77
3.6
MRNA-SPIEGEL
VON
ICER-KO
UND
WT
VSMCS
IM
VERGLEICH
82
4
DISKUSSION
87
4.1
ISOLATION
UND
CHARAKTERISIERUNG
VON
REINEN
PRIMAEREN
VSMC-KULTUREN
88
4.3
A7R5-ZELLEN
UNTERSCHEIDEN
SICH
FUNKTIONELL
VON
PRIMAEREN
MURINEN
VSMCS
95
4.4
ICER
HAT
KEINEN
EINFLUSS
AUF
DIE
IN
VITRO
PROLIFERATION
VON
PRIMAEREN
VSMCS
97
5
ZUSAMMENFASSUNG
103
6
GERAETE
UND
CHEMIKALIEN
105
7
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
106
8
TABELLENVERZEICHNIS
109
9
LITERATURVERZEICHNIS
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LEBENSLAUF
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