Untersuchungen zum Nachweis von Verotoxin-bildenden Escherichia coli 0157 aus artifiziell kontaminierten Rindfleischproben:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Giessen
VVB Laufersweiler Verlag
2022
|
| Ausgabe: | 1. Auflage |
| Schriftenreihe: | Edition scientifique
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | XVII, 237 Seiten Illustrationen, Diagramme |
| ISBN: | 9783835970731 |
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Datensatz im Suchindex
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
Inhaltsverzeichnis Vv
Tabellenverzeichnis IX
Abbildungsverzeichnis x
Abkürzungsverzeichnis XIV
1 Einleitung 1
2 Literaturübersicht 3
21 Escherichia coli 3
211 Eigenschaften 3
212 Vorkommen und Bedeutung uueneeessneesnnensenneennsennseennsnsnone re 4
2 2 Pathogene E coli 5
23_ Verotoxin-bildende E coli 8
231 Virulenzfaktoren 10
2311 Verotoxine
2312 Weitere Virulenzfaktoren
232 Serogruppen
233 Non-0157 VTEC
234E coli 0157:H7 case teeeneatenenteaeeen ene 20
2341 Spezifische Eigenschaften von E CONT OS TIH7 oo esesceesesereecenteeereeateeenteen 20
2342 Temazitat 0 21
2 4 Erkrankungen beim Menschen 23
241 Infektionsdosis cccesecsssessessesssssetesssssensssnnsnesaenatataceenscsnannencasenerecssnnensasessasastey 23
242 Risikogruppen
243 Klinische Sympomatik
2 5 Epidemiologie nene
251 Erregerausscheidung neeneneeeentenesese
252 Inzidenz EHEC-bedingter Erkrankungen
253_ Übertragungswege numemmenennenenssstentenrenteessennsneneenernesssessest sts sae
254 Vorkommen beim Tier
255 Vorkommen in Lebensmitteln een ees
256 Rechtliche Vorgaben eneeneneeeneseeneesrnssesr 45
26_ Nachweisverfahren für E coli O1 57:H7 aus Lebensmitteln
261 Beprobung emeeneneeenemeneneee tm
262 Anreicherungsmedien een
INHALTSVERZEICHNIS
263 Immunomagnetische Separation (IMS) ereneeesennenenssesnnnsensserennnnennnnnnnnennnnnnnee 50
264 Subkultivierungsmedien ursensessnsesnnnennnossnensensensensssssnnenensesnennsersennnnnennennn 50
265 Molekularbasierte Nachweisverfahren emeeresnesssneesnnnsnssnsssonensnusnnnnesnnse nennen 51
266 Bestätigung und Charakterisierung
2661 Serotypisierung
2662 Immunoassays
267 Validierte Alternativverfahren ueounssensennnnnensenenensen sonen ennnnenssnnnpnntnnossorna nen 55
3 Material und Methoden unnuneannsnnernnnnnnonnannensnernnennonenezn on sen ssnssennsurronennesntnnannane 57
3 1 Material 20nnsenneennsnsnennannunnnnnnennanannnnenansnnnantn nn
311 Referenzstämme
312 Probenmaterial
313 Medien und Lösungen
3131 Herstellung von Nährmedien und Lésungen Suneersessensenso nennen 60
314 Geräte und Labormaterialien nnssnsenssneennsneesannnenennnensennnenerennnennnne 62
3 2 Methoden uesrssnonesnnssornonponanennnnnennnnpnanssnnnnnsennsnensenännnnnsonssonsensasnsnnnssensnnann 67
321 Referenzverfahren nnensersessnssnsennesennuensnnsnnansnesannennannnensnnensnenssnsntnonnnsanssnsennn 67
323 Probenvorbereitung
324 Inokulation ueesesesensenesnennersnennnrennere nennen
3241 Anzucht und Kältebehandlung der Referenzst€MmMe ccecccsceeeneee 71
3242 Inokulation der Versuchsansätze unesesnssennenennsensnennunnonsennnanenensnnnonnn 72
325 Probenahmezeitpunkte u uusesseenessennennnsnnennesennunnennnnesnanensnannennnnnnasnannnensnenennn 73
326 Durchführungsprotokolle für die einzelnen Testverfahren 73
3261 IMS im Referenzverfahren
3262 IMS im Alternativverfahren
3263 Beimpfung und Auswertung des Rainbow® Agars O157 anne 74
3264 Beimpfung und Auswertung von CT-SMAC-AGar c cscsssssesessseseeseseeeeeees 75
3265 Latex-Agglutination
3266 Subkultur auf Blutagar cnnensesesssesssessensennsonsnennennnnsnnnsennensanenansneannnnnnere
3267 Singlepath® E coli 0157
3268 Duopath® Verotoxin
3269 Biochemische Reihe mit api 20E™
326 10 DNA-Extraktion mit dem foodproof® StarPrep One Kit 80
326 11 DNA-Extraktion durch KoChen cccccssessssesscccosssssscsesssesaversssessaseseessees 80
326 12 Real time-PCR mit dem foodproof® E coli 0157 Detection Kit
5’Nuclease
327 Untersuchung Rohmaterial
Vi
5
INHALTSVERZEICHNIS
3271 Begleitfora os escecsecsessesesssssseesesseessescecnsessssensussecuseavssssanssssacssuesresvasss 84
3272 Chemische Analysen csscscsscsssssssscssssssscesecsecersnvereeteree +84
328 Statistik und Kennwerte zur Ergebnisinterpretation cssssscsssessesssscesseseeeeeees 87
3281 Wiederfindungsrate zum Vergleich ungepaarter Proben
3282 Sensitivität zum Vergleich gepaarter Proben
3283 Spezifität zum Vergleich gepaarter Proben
3284 Bewertungskriterien bezüglich der Vergleichbarkeit der einzelnen Ansätze
Mersnstesssesnsssanessssneransnnenenssnensesnsonnennasnnnannsenennntanasnssennsnsessensseenn 88
3285 Festlegung einer Ergebnis-Kaskade cccccscssccscescesceeseesceesceserenseneeevecnes 89
Ergebnisse 92
2,1 Rohimatte rial ec cescecereeneassaeeeeseesnsersavensseccecerseconecseesensecesseedeessesauneasatneanacersesee 92
411 Chemische Analyse BR 92
412 Begleitflora 93
4 2 Inokulation 94
421 Anzucht von E coli 0157:H7 (ATCC 35150) zur Inokulation eeesee- 94
422 Inokulation von E coli ATCC 35150 als Positiv-Kontrolle neeeee
423 Inokulation von E coli ATCC 25922 als Negativ-Kontroile
424 Herstellung fraktioniert-inokulierter Proben
4 3 Bewertungskriterien zur Vergleichbarkeit der einzelnen Ansatze
4 4 Fraktioniert-inokulierte Proben
441 Wiederfindungsrate ccccsereeecceneneseeennennessnstenenaeentcaanenreesees
442 Sensitivität uessneeennnrnennenennesnnenssnsnrnsnsennmnnesssensrorensensnesssesensnsnn
443 Spezifität neseerseneneennennenrennsensenesenunserersn nennen
444 Auswertung von CrWerten der RT-POR nennen ernennen
Diskussion 114
5 1 Diskussion der Methodik
511 Rohmaterial es
512 Referenzverfahren
513 Probengröße
514 Auswahl der Referenzstamme
515 Kühlung vor Inokulation
516 Anlegen fraktioniert-positiver Proben
517 Inokulationsdosis und Detektionslimit
518 Vergleichbarkeit der Untersuchungen
519 Ergebnisauswertung mit PP- und ITT-Verfahren ansenseseneensnenneneeeessenatne 127
5 1 10 Molekularbiologischer Nachweis nuenenenenenenennetnesner 127
5 1 11 Immunologische Nachweisverfatiren saseueaeaneeccenesereeseseneaeseseeeestuearoesnenteseuenes 429
10
it
INHALTSVERZEICHNIS
5 1 12 Kulturelle Nachweisverfahren neenenennssensensnensenserersenernnnneseeneennnnann 131
52_ Diskussion der Ergebnisse nennnnsensnesssnsnensensentensessenenseterunntone 133
521 Kontrollen eusaseeeeeennenennenennennreneesnennnnnnensnnnerersonsnsnnnnsnersonssnsrsessarsnsnersnensnnn 133
522 Kontamination des Rohmaterials usesessnenneennenerasnnnenennanensensnennessnennsennesennnane 134
523 Anreicherung
5231 Anreicherungsmedium Aekemnsesnsunsnasensnesssanessenssenssstänsesnnnnsersaran nase 136
5232 Anreicherungsdauer
5233 Anreicherungstemperatur 138
524 Sensitivitat und Spezifitat 00 0 cece teererererstentnereneir | cuveeeetees cates 139
525 Wiederfindungsrate 0 tee eeeescnceseesrneerseessesreeneeseesantnetsers 0 laeeeveaees cevase 140
526 Bedeutung eines positiven E coli 0157:H7-Nachweises see ee 142
5 3 Eingliederung und AUSDIICK 0 esesessteessececesesseceesesensateecsecsccrre cestetsetnse catess 144
531 Kriterien fr ein geeignetes Nachweisverfahren cccccsccccceecsseseesesenceceseee 144
532 Bedeutung von HiirdenkonZepten eccccccssssssssesscecesusresserececsscecsustenesecesssees 147
533 Selektive Untersuchung auf E Coli O157 wo cssceccsssscssssssesvsesecssesstscseasensecensees 148
Schlussfolgerungen 150
Zusammenfassung vee vee 1 52
Summary 154
ANNAN ss sesseserssccsssessssescsccsssusssssssnessesssssnsssesnsssstssssesersrsssstsasesstsststtansesstecesosceseoseceececees 156
911 Legende zu den Rohdaten-Tabellen (Nrr 41-43)
912 Legende zur Bewertungs- und Vergleichs-Tabelle 44
913 Zusätzliche Ergebnisse Rohmaterial cccccscssssccscsssccssssssssses
914 Zusätzliche Ergebnisse der fraktioniert inokulierten Proben
915 Legende zur Auswertung der Cı-Werte in Tabelle 46
soeseetcasaeeecenaneeteeateneneaeneses 189
Literaturverzeichnis 193
Danksagung 235
Erklärung 237
Vill
|
| adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
Inhaltsverzeichnis Vv
Tabellenverzeichnis IX
Abbildungsverzeichnis x
Abkürzungsverzeichnis XIV
1 Einleitung 1
2 Literaturübersicht 3
21 Escherichia coli 3
211 Eigenschaften 3
212 Vorkommen und Bedeutung uueneeessneesnnensenneennsennseennsnsnone re 4
2 2 Pathogene E coli 5
23_ Verotoxin-bildende E coli 8
231 Virulenzfaktoren 10
2311 Verotoxine
2312 Weitere Virulenzfaktoren
232 Serogruppen
233 Non-0157 VTEC
234E coli 0157:H7 case teeeneatenenteaeeen ene 20
2341 Spezifische Eigenschaften von E CONT OS TIH7 oo esesceesesereecenteeereeateeenteen 20
2342 Temazitat 0 21
2 4 Erkrankungen beim Menschen 23
241 Infektionsdosis cccesecsssessessesssssetesssssensssnnsnesaenatataceenscsnannencasenerecssnnensasessasastey 23
242 Risikogruppen
243 Klinische Sympomatik
2 5 Epidemiologie nene
251 Erregerausscheidung neeneneeeentenesese
252 Inzidenz EHEC-bedingter Erkrankungen
253_ Übertragungswege numemmenennenenssstentenrenteessennsneneenernesssessest sts sae
254 Vorkommen beim Tier
255 Vorkommen in Lebensmitteln een ees
256 Rechtliche Vorgaben eneeneneeeneseeneesrnssesr 45
26_ Nachweisverfahren für E coli O1 57:H7 aus Lebensmitteln
261 Beprobung emeeneneeenemeneneee tm
262 Anreicherungsmedien een
INHALTSVERZEICHNIS
263 Immunomagnetische Separation (IMS) ereneeesennenenssesnnnsensserennnnennnnnnnnennnnnnnee 50
264 Subkultivierungsmedien ursensessnsesnnnennnossnensensensensssssnnenensesnennsersennnnnennennn 50
265 Molekularbasierte Nachweisverfahren emeeresnesssneesnnnsnssnsssonensnusnnnnesnnse nennen 51
266 Bestätigung und Charakterisierung
2661 Serotypisierung
2662 Immunoassays
267 Validierte Alternativverfahren ueounssensennnnnensenenensen sonen ennnnenssnnnpnntnnossorna nen 55
3 Material und Methoden unnuneannsnnernnnnnnonnannensnernnennonenezn on sen ssnssennsurronennesntnnannane 57
3 1 Material 20nnsenneennsnsnennannunnnnnnennanannnnenansnnnantn nn
311 Referenzstämme
312 Probenmaterial
313 Medien und Lösungen
3131 Herstellung von Nährmedien und Lésungen Suneersessensenso nennen 60
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3 2 Methoden uesrssnonesnnssornonponanennnnnennnnpnanssnnnnnsennsnensenännnnnsonssonsensasnsnnnssensnnann 67
321 Referenzverfahren nnensersessnssnsennesennuensnnsnnansnesannennannnensnnensnenssnsntnonnnsanssnsennn 67
323 Probenvorbereitung
324 Inokulation ueesesesensenesnennersnennnrennere nennen
3241 Anzucht und Kältebehandlung der Referenzst€MmMe ccecccsceeeneee 71
3242 Inokulation der Versuchsansätze unesesnssennenennsensnennunnonsennnanenensnnnonnn 72
325 Probenahmezeitpunkte u uusesseenessennennnsnnennesennunnennnnesnanensnannennnnnnasnannnensnenennn 73
326 Durchführungsprotokolle für die einzelnen Testverfahren 73
3261 IMS im Referenzverfahren
3262 IMS im Alternativverfahren
3263 Beimpfung und Auswertung des Rainbow® Agars O157 anne 74
3264 Beimpfung und Auswertung von CT-SMAC-AGar c cscsssssesessseseeseseeeeeees 75
3265 Latex-Agglutination
3266 Subkultur auf Blutagar cnnensesesssesssessensennsonsnennennnnsnnnsennensanenansneannnnnnere
3267 Singlepath® E coli 0157
3268 Duopath® Verotoxin
3269 Biochemische Reihe mit api 20E™
326 10 DNA-Extraktion mit dem foodproof® StarPrep One Kit 80
326 11 DNA-Extraktion durch KoChen cccccssessssesscccosssssscsesssesaversssessaseseessees 80
326 12 Real time-PCR mit dem foodproof® E coli 0157 Detection Kit
5’Nuclease
327 Untersuchung Rohmaterial
Vi
5
INHALTSVERZEICHNIS
3271 Begleitfora os escecsecsessesesssssseesesseessescecnsessssensussecuseavssssanssssacssuesresvasss 84
3272 Chemische Analysen csscscsscsssssssscssssssscesecsecersnvereeteree +84
328 Statistik und Kennwerte zur Ergebnisinterpretation cssssscsssessesssscesseseeeeeees 87
3281 Wiederfindungsrate zum Vergleich ungepaarter Proben
3282 Sensitivität zum Vergleich gepaarter Proben
3283 Spezifität zum Vergleich gepaarter Proben
3284 Bewertungskriterien bezüglich der Vergleichbarkeit der einzelnen Ansätze
Mersnstesssesnsssanessssneransnnenenssnensesnsonnennasnnnannsenennntanasnssennsnsessensseenn 88
3285 Festlegung einer Ergebnis-Kaskade cccccscssccscescesceeseesceesceserenseneeevecnes 89
Ergebnisse 92
2,1 Rohimatte rial ec cescecereeneassaeeeeseesnsersavensseccecerseconecseesensecesseedeessesauneasatneanacersesee 92
411 Chemische Analyse BR 92
412 Begleitflora 93
4 2 Inokulation 94
421 Anzucht von E coli 0157:H7 (ATCC 35150) zur Inokulation eeesee- 94
422 Inokulation von E coli ATCC 35150 als Positiv-Kontrolle neeeee
423 Inokulation von E coli ATCC 25922 als Negativ-Kontroile
424 Herstellung fraktioniert-inokulierter Proben
4 3 Bewertungskriterien zur Vergleichbarkeit der einzelnen Ansatze
4 4 Fraktioniert-inokulierte Proben
441 Wiederfindungsrate ccccsereeecceneneseeennennessnstenenaeentcaanenreesees
442 Sensitivität uessneeennnrnennenennesnnenssnsnrnsnsennmnnesssensrorensensnesssesensnsnn
443 Spezifität neseerseneneennennenrennsensenesenunserersn nennen
444 Auswertung von CrWerten der RT-POR nennen ernennen
Diskussion 114
5 1 Diskussion der Methodik
511 Rohmaterial es
512 Referenzverfahren
513 Probengröße
514 Auswahl der Referenzstamme
515 Kühlung vor Inokulation
516 Anlegen fraktioniert-positiver Proben
517 Inokulationsdosis und Detektionslimit
518 Vergleichbarkeit der Untersuchungen
519 Ergebnisauswertung mit PP- und ITT-Verfahren ansenseseneensnenneneeeessenatne 127
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INHALTSVERZEICHNIS
5 1 12 Kulturelle Nachweisverfahren neenenennssensensnensenserersenernnnneseeneennnnann 131
52_ Diskussion der Ergebnisse nennnnsensnesssnsnensensentensessenenseterunntone 133
521 Kontrollen eusaseeeeeennenennenennennreneesnennnnnnensnnnerersonsnsnnnnsnersonssnsrsessarsnsnersnensnnn 133
522 Kontamination des Rohmaterials usesessnenneennenerasnnnenennanensensnennessnennsennesennnane 134
523 Anreicherung
5231 Anreicherungsmedium Aekemnsesnsunsnasensnesssanessenssenssstänsesnnnnsersaran nase 136
5232 Anreicherungsdauer
5233 Anreicherungstemperatur 138
524 Sensitivitat und Spezifitat 00 0 cece teererererstentnereneir | cuveeeetees cates 139
525 Wiederfindungsrate 0 tee eeeescnceseesrneerseessesreeneeseesantnetsers 0 laeeeveaees cevase 140
526 Bedeutung eines positiven E coli 0157:H7-Nachweises see ee 142
5 3 Eingliederung und AUSDIICK 0 esesessteessececesesseceesesensateecsecsccrre cestetsetnse catess 144
531 Kriterien fr ein geeignetes Nachweisverfahren cccccsccccceecsseseesesenceceseee 144
532 Bedeutung von HiirdenkonZepten eccccccssssssssesscecesusresserececsscecsustenesecesssees 147
533 Selektive Untersuchung auf E Coli O157 wo cssceccsssscssssssesvsesecssesstscseasensecensees 148
Schlussfolgerungen 150
Zusammenfassung vee vee 1 52
Summary 154
ANNAN ss sesseserssccsssessssescsccsssusssssssnessesssssnsssesnsssstssssesersrsssstsasesstsststtansesstecesosceseoseceececees 156
911 Legende zu den Rohdaten-Tabellen (Nrr 41-43)
912 Legende zur Bewertungs- und Vergleichs-Tabelle 44
913 Zusätzliche Ergebnisse Rohmaterial cccccscssssccscsssccssssssssses
914 Zusätzliche Ergebnisse der fraktioniert inokulierten Proben
915 Legende zur Auswertung der Cı-Werte in Tabelle 46
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Literaturverzeichnis 193
Danksagung 235
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