Untersuchung zur malignen Progression und zur genetischen Stabilität von HPV 6-induzierten Buschke-Löwenstein-Tumoren:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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| Veröffentlicht: |
Aachen
[2017]
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1
EINLEITUNG
.............................................................................................................................................
1
2
EINFUEHRUNG
...........................................................................................................................................
3
2.1
DIE
HUMANEN
PAPILLOMVIREN
(HPV)
..........................................................................................
3
2.1.1
DAS
GENOM
DER
HUMANEN
PAPILLOMVIREN...................................................................................
4
2.1.2
GENETISCHE
UND
BIOLOGISCHE
HETEROGENITAET
DER
HPV
.................................................................
5
2.1.3
ERKRANKUNGEN
DURCH
KUTANEOTROPE
HPV
...................................................................................
7
2.1.4
ERKRANKUNGEN
DURCH
MUCOSOTROPE
HPV
....................................................................................
8
2.1.5
ONKOGENES
POTENTIAL
DER
HPV
....................................................................................................
9
2.2
DEFINITION,
KLINIK
UND
EPIDEMIOLOGIE
HPV
6
INDUZIERTE
TUMOREN
..........................................
10
2.2.1
CONDYLOMATA
ACUMMATA
..........................................................................................................
10
2.2.2
BUSCHKE-LOEWENSTEIN-TUMOR
...................................................................................................
11
2.2.3
KLINISCHE
MALIGNE
PROGRESSION
VON
BUSCHKE-LOEWENSTEIN-TUMOREN
......................................
12
2.3
DAS
HUMANE
GENOM
................................................................................................................
14
2.4
ONKOGENE
UND
TUMORSUPPRESSORGENE
.....................................................................................
17
2.5
GENOMISCHE
UND
GENETISCHE
INSTABILITAET
..................................................................................
19
2.5.1
CHROMOSOMALE
INSTABILITAET
........................................................................................................
19
2.5.1.1
NUMERISCHE
INSTABILITAET
.............................................................................................................
19
2.5.1.2
STRUKTURELLE
CHROMOSOMENINSTABIHTAET
.....................................................................................
20
2.5.2
NICHT-CHROMOSOMALE
GENOMISCHE
INSTABILITAET
.........................................................................
22
2.5.2.1
MISMATCHREPARATURGENE
(MMR)
UND
MIKROSATELLITENINSTABILITAET
............................................
22
2.5.2.2
NUCLEOTID-EXZISIONSREPARATUR
(NER)
......................................................................................
23
2.5.2.3
BASENEXZISIONSREPARATUR
(BER)
..............................................................................................
24
2.5.3
METHODEN
ZUM
NACHWEIS
GENOMISCHER
(GENETISCHER)
INSTABILITAET
...........................................
25
2.5.3.1
KARYOGRAMM
..............................................................................................................................
25
2.5.3.2
FLUORESZENZ-IN-SITU-HYBRIDISIERUNG
(FISH)
............................................................................
25
2.5.3.3
COMPARATIVE
GENOMIC
HYBRIDIZATION
(CGH)
.........................................................................
26
2.5.3.4
MIKROSATELLITENINSTABIHTAET
(MSI-ANALYSE)
..............................................................................
26
2.5.3.5
LOESS
OF
HETEROZYGOSITY
ANALYSIS
(LOH-ANALYSE)
..................................................................
27
2.5.3.6
SINGLE
NUCLEOTID
POLYMORPHISM-ARRAY
(SNP-ARRAY)
.............................................................
28
2.5.3.7
NEXT
GENERATION
SEQUENCMG
(NGS)
.......................................................................................
28
2.5.3.8
MULTIPLEX
LIGATION-DEPENDENT
PROBE
AMPLIFIKATION
(MLPA)
..................................................
29
2.6
MOLEKULARE
MECHANISMEN
DER
HPV-MDUZIERTEN
ONKOGENESE
..................................................
29
3
PROBLEMSTELLUNG
.................................................................................................................................
34
4
MATERIAL
UND
METHODEN
...................................................................................................................
35
4.1
PROBENGEWMNUNG
.....................................................................................................................
35
4.1.1
BIOPSIEPROBEN
..........................................................................................................................
35
4.1.2
DNA-EXTRAKTION
........................................................................................................................
38
4.1.3
POLYMERASE-KETTENREAKTION
......................................................................................................
40
4.1.4
NACHWEIS
VON
HPV
6-DNA
.....................................................................................................
42
4.1.5
MIKROSATELLITEN
.........................................................................................................................
43
4.1.6
MLPA
MULTIPLEX-PCR
.............................................................................................................
47
4.2
DARSTELLUNG
UND
ANALYSE
DER
PCR-PRODUKTE
............................................................................
53
4.2.1
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
........................................................................................................
53
4.2.2
TEMPERATURGRADIENTEN-SSCP-ANALYSE
(TG-SSCP
ANALYSE)
...................................................
53
4.2.3
SILBERFAERBUNG
............................................................................................................................
56
4.2.4
INFORMATIONSGEHALT
DER
PRIMER
.................................................................................................
57
4.2.5
AUSWERTUNG
..............................................................................................................................
57
4.2.5.1
BEWERTUNG
LOH
.......................................................................................................................
57
4.2.5.2
HOMOZYGOTE
ALLELE
..................................................................................................................
59
4.2.5.3
HETEROZYGOTE
ALLELE
.................................................................................................................
59
4.2.5.4
MIKROSATELLITENINSTABILITAET
........................................................................................................
60
4.2.6
IMMUNHISTOCHEMISCHE
FAERBUNG
DNA-MISMATCH-REPARATURPROTEINE
......................................
60
5
ERGEBNISSE
...........................................................................................................................................
62
5.1
MIKROSATELHTENANALYSE
.............................................................................................................
63
5.1.1
MIKROSATELHTENANALYSE
VON
ZWEI
BUSCHKE-LOEWENSTEIN-TUMOREN
..........................................
63
5.1.2
MIKROSATELHTENANALYSE
VON
DREI
CONDYLOMATA
ACUMINATA
........................................................
71
5.2
MLPA-ANALYSE
DER
MOLEKULAREN
PROGRESSION
EINES
KONDYLOMS
IN
EM
INVASIVES
PLATTENEPITHELKARZMOM
MIT
LYMPHKNOTENMETASTASIERUNG
......................................................
73
5.3
PROTEINEXPRESSION
DES
MISMATCH-REPARATUR-SYSTEM
...............................................................
77
6.
DISKUSSION
.............................................................................................................................................
80
6.1
METHODISCHE
ASPEKTE
DER
VERWENDETEN
TECHNIK
......................................................................
81
6.2
MOLEKULARE
PATHOGENESE
DER
MALIGNEN
PROGRESSION
VON
HPV
6-INDUZIERTEN
TUMOREN
...........
83
6.2.1
CDKN2A
.................................................................................................................................
84
6.2.2
SUBKLONALITAET
............................................................................................................................
86
6.2.3
MIKROSATELLITENMSTABILITAET
........................................................................................................
87
6.3.
MALIGNE
PROGRESSION
ALS
MEHRSTUFIGER
PROZESS
.........................................................................
88
7
ZUSAMMENFASSUNG
............................................................................................................................
91
8
LITERATURVERZEICHNIS
.........................................................................................................................
93
9
ANHANG
..............................................................................................................................................
112
|
| adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
.
1
2
EINFUEHRUNG
.
3
2.1
DIE
HUMANEN
PAPILLOMVIREN
(HPV)
.
3
2.1.1
DAS
GENOM
DER
HUMANEN
PAPILLOMVIREN.
4
2.1.2
GENETISCHE
UND
BIOLOGISCHE
HETEROGENITAET
DER
HPV
.
5
2.1.3
ERKRANKUNGEN
DURCH
KUTANEOTROPE
HPV
.
7
2.1.4
ERKRANKUNGEN
DURCH
MUCOSOTROPE
HPV
.
8
2.1.5
ONKOGENES
POTENTIAL
DER
HPV
.
9
2.2
DEFINITION,
KLINIK
UND
EPIDEMIOLOGIE
HPV
6
INDUZIERTE
TUMOREN
.
10
2.2.1
CONDYLOMATA
ACUMMATA
.
10
2.2.2
BUSCHKE-LOEWENSTEIN-TUMOR
.
11
2.2.3
KLINISCHE
MALIGNE
PROGRESSION
VON
BUSCHKE-LOEWENSTEIN-TUMOREN
.
12
2.3
DAS
HUMANE
GENOM
.
14
2.4
ONKOGENE
UND
TUMORSUPPRESSORGENE
.
17
2.5
GENOMISCHE
UND
GENETISCHE
INSTABILITAET
.
19
2.5.1
CHROMOSOMALE
INSTABILITAET
.
19
2.5.1.1
NUMERISCHE
INSTABILITAET
.
19
2.5.1.2
STRUKTURELLE
CHROMOSOMENINSTABIHTAET
.
20
2.5.2
NICHT-CHROMOSOMALE
GENOMISCHE
INSTABILITAET
.
22
2.5.2.1
MISMATCHREPARATURGENE
(MMR)
UND
MIKROSATELLITENINSTABILITAET
.
22
2.5.2.2
NUCLEOTID-EXZISIONSREPARATUR
(NER)
.
23
2.5.2.3
BASENEXZISIONSREPARATUR
(BER)
.
24
2.5.3
METHODEN
ZUM
NACHWEIS
GENOMISCHER
(GENETISCHER)
INSTABILITAET
.
25
2.5.3.1
KARYOGRAMM
.
25
2.5.3.2
FLUORESZENZ-IN-SITU-HYBRIDISIERUNG
(FISH)
.
25
2.5.3.3
COMPARATIVE
GENOMIC
HYBRIDIZATION
(CGH)
.
26
2.5.3.4
MIKROSATELLITENINSTABIHTAET
(MSI-ANALYSE)
.
26
2.5.3.5
LOESS
OF
HETEROZYGOSITY
ANALYSIS
(LOH-ANALYSE)
.
27
2.5.3.6
SINGLE
NUCLEOTID
POLYMORPHISM-ARRAY
(SNP-ARRAY)
.
28
2.5.3.7
NEXT
GENERATION
SEQUENCMG
(NGS)
.
28
2.5.3.8
MULTIPLEX
LIGATION-DEPENDENT
PROBE
AMPLIFIKATION
(MLPA)
.
29
2.6
MOLEKULARE
MECHANISMEN
DER
HPV-MDUZIERTEN
ONKOGENESE
.
29
3
PROBLEMSTELLUNG
.
34
4
MATERIAL
UND
METHODEN
.
35
4.1
PROBENGEWMNUNG
.
35
4.1.1
BIOPSIEPROBEN
.
35
4.1.2
DNA-EXTRAKTION
.
38
4.1.3
POLYMERASE-KETTENREAKTION
.
40
4.1.4
NACHWEIS
VON
HPV
6-DNA
.
42
4.1.5
MIKROSATELLITEN
.
43
4.1.6
MLPA
MULTIPLEX-PCR
.
47
4.2
DARSTELLUNG
UND
ANALYSE
DER
PCR-PRODUKTE
.
53
4.2.1
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
.
53
4.2.2
TEMPERATURGRADIENTEN-SSCP-ANALYSE
(TG-SSCP
ANALYSE)
.
53
4.2.3
SILBERFAERBUNG
.
56
4.2.4
INFORMATIONSGEHALT
DER
PRIMER
.
57
4.2.5
AUSWERTUNG
.
57
4.2.5.1
BEWERTUNG
LOH
.
57
4.2.5.2
HOMOZYGOTE
ALLELE
.
59
4.2.5.3
HETEROZYGOTE
ALLELE
.
59
4.2.5.4
MIKROSATELLITENINSTABILITAET
.
60
4.2.6
IMMUNHISTOCHEMISCHE
FAERBUNG
DNA-MISMATCH-REPARATURPROTEINE
.
60
5
ERGEBNISSE
.
62
5.1
MIKROSATELHTENANALYSE
.
63
5.1.1
MIKROSATELHTENANALYSE
VON
ZWEI
BUSCHKE-LOEWENSTEIN-TUMOREN
.
63
5.1.2
MIKROSATELHTENANALYSE
VON
DREI
CONDYLOMATA
ACUMINATA
.
71
5.2
MLPA-ANALYSE
DER
MOLEKULAREN
PROGRESSION
EINES
KONDYLOMS
IN
EM
INVASIVES
PLATTENEPITHELKARZMOM
MIT
LYMPHKNOTENMETASTASIERUNG
.
73
5.3
PROTEINEXPRESSION
DES
MISMATCH-REPARATUR-SYSTEM
.
77
6.
DISKUSSION
.
80
6.1
METHODISCHE
ASPEKTE
DER
VERWENDETEN
TECHNIK
.
81
6.2
MOLEKULARE
PATHOGENESE
DER
MALIGNEN
PROGRESSION
VON
HPV
6-INDUZIERTEN
TUMOREN
.
83
6.2.1
CDKN2A
.
84
6.2.2
SUBKLONALITAET
.
86
6.2.3
MIKROSATELLITENMSTABILITAET
.
87
6.3.
MALIGNE
PROGRESSION
ALS
MEHRSTUFIGER
PROZESS
.
88
7
ZUSAMMENFASSUNG
.
91
8
LITERATURVERZEICHNIS
.
93
9
ANHANG
.
112 |
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Inhaltsverzeichnis