"Untersuchungsansätze zur Resistenz von kleinzelligen Bronchialkarzinomen auf Chemotherapeutika anhand von etablierten Zelllinien und zirkulierenden Tumorzellen":
Gespeichert in:
1. Verfasser: | |
---|---|
Format: | Abschlussarbeit Buch |
Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
Köln
[2021]
|
Schlagworte: | |
Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis |
Beschreibung: | 100 Seiten Illustrationen, Diagramme 21 cm |
Internformat
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Datensatz im Suchindex
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---|---|
adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
7
1.
EINLEITUNG
..........................................................................................................................................
9
1.1
KREBSERKRANKUNGEN
..........................................................................................................................
9
1.1.1
TUMORGENESE
...........................................................................................................................................
9
1.2
LUNGENKREBS
........................................................................................................................................
9
1.2.1
SCLC
-
KLEINZELLIGES
BRONCHIALKARZINOM
.............................................................................................
10
1.2.1.1
REKURRENTE
GENETISCHE
VERAENDERUNGEN
IN
SCLC
TUMOREN
..........................................................
10
1.2.1.2
VARIANTER
UND
KLASSISCHER
SUBTYP
DER
SCLC
TUMOREN
................................................................
11
1.2.1.3
THERAPIE
DER
SCLC
TUMOREN
........................................................................................................
11
1.2.1.3.1
ETOPOSID
..................................................................................................................................
12
1.2.1.3.2
CISPLATIN
.................................................................................................................................
13
1.3
TUMORBIOLOGIE
UND
RESISTENZMECHANISMEN
................................................................................
13
1.3.1
DNA
SCHADENSREPARATUR
........................................................................................................................
13
1.3.1.1
DIE
ROLLE
VON
DDR
PROTEINEN
IN
DER
TUMORGENESE
UND
-THERAPIE
...............................................
14
1.3.2
BIOLOGISCHE
GRUNDEIGENSCHAFTEN
VON
TUMOREN
UND
IHRE
BEDEUTUNG
FUER
RESISTENZMECHANISMEN
UND
THERAPIE
...........................................................................................................................................................
15
1.3.2.1
AUFRECHTERHALTUNG
EINES
PROLIFERATIVEN
SIGNALS
............................................................................
16
1.3.2.2
RESISTENZ
GEGENUEBER
ZELLTOD
.........................................................................................................
16
1.3.2.3
VERMEIDEN
VON
WACHSTUMSINHIBITOREN
.........................................................................................
16
1.3.2.4
IMMORTALISIERUNG
............................................................................................................................
17
1.3.2.5
INDUKTION
VON
ANGIOGENESE
..........................................................................................................
17
1.3.2.6
METASTASIERUNG
...............................................................................................................................
18
1.4
ZIRKULIERENDE
TUMORZELLEN
(CTCS)
.............................................................................................
18
1.4.1
HETEROGENITAET
DER
CTCS
.........................................................................................................................
18
1.4.2
DETEKTION
UND
ISOLATION
VON
CTCS
......................................................................................................
19
1.4.3
CTC
EXPANSION
IN
VIVO
UND
IN
VITRO
.....................................................................................................
20
1.5
ZIEL
DER
DOKTORARBEIT
......................................................................................................................
21
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
..............................................................................................................
22
2.1
CTC
ISOLATION
...................................................................................................................................
22
2.2
PATIENTENAUFKLAERUNG
UND
ETHIKVOTUM
.........................................................................................
22
2.3
EXPERIMENTE
ZUR
OPTIMIERUNG
......................................................................................................
23
2.3.1
EFFEKT
VON
FICOLL/ZENTRIFUGATIONSKRAFT
AUF
DIE
ZENTRIFUGATION
.............................................................
23
2.3.2
EFFEKT
VON
FICOLL
AUF
DIE
ZELLVIABILITAET
..................................................................................................
23
2.3.3
FINALE
ZELLZAHL
NACH
ZENTRIFUGATIONSSCHRITTEN
.......................................................................................
23
2.3.4
DNA
ISOLATION
AUS
DEM
ZELLPELLET
UNTER
DER
FICOLLPHASE
.....................................................................
24
2.4
MAUSARBEIT
........................................................................................................................................
24
2.5
IHC
UND
HE
FAERBUNGEN
..................................................................................................................
24
2.6
STR
KONTROLLE
..................................................................................................................................
25
2.7
UEBERNAHME
DER
CDX
TUMORE
IN
DIE
ZELLKULTUR
..........................................................................
25
2.8
DIREKTE
KULTIVIERUNG
VON
CTCS
....................................................................................................
25
2.9
CHEMOTHERAPEUTIKA
.........................................................................................................................
26
2.10
ANTIKOERPER
.......................................................................................................................................
26
2.11
ZELLLINIENKULTUR
...............................................................................................................................
27
2.12
RNA
ISOLATION
UND
CDNA
ERSTELLUNG
.........................................................................................
27
2.13
DNA
ISOLATION
.................................................................................................................................
28
2.14
PRIMERSEQUENZEN
(5
NACH
3 )
......................................................................................................
28
2.15
GENOTYPISIERUNG
.............................................................................................................................
30
2.16
SANGER
SEQUENZIERUNGEN
..............................................................................................................
30
2.17
QUANTITATIVE
REALTIME
PCR
..........................................................................................................
31
2.18
GENERIERUNG
VON
ZELLLINIEN
MIT
AKQUIRIERTER
RESISTENZ
...........................................................
31
2.19
IN-VITRO
CHEMOSENSITIVITAETSANALYSEN
...........................................................................................
31
2.20
ZELLPROLIFERATIONSANALYSEN
............................................................................................................
32
2.21
IMMUNFLUORESZENZFAERBUNGEN
(IF)
.............................................................................................
32
2.21.1
SUSPENSIONSZELLLINIEN
.........................................................................................................................
33
2.21.2
STIMULATION
DER
ZELLEN
FUER
IF
FAERBUNGEN
............................................................................................
33
2.21.3
IF
FAERBUNGEN
IM
96-WELL
FORMAT
......................................................................................................
34
2.22
WESTERN
BLOTS
................................................................................................................................
34
2.22.1
ERSTELLUNG
DER
ZELLLYSATE
.....................................................................................................................
34
2.22.2
DURCHFUEHRUNG
DES
WESTERN
BLOTS
.......................................................................................................
35
3.
ERGEBNISSE
..........................................................................................................................................
36
3.1
GENERIERUNG
VON
SCLC
CDX
MODELLEN
ZUR
REZIDIVANALYSE
...................................................
36
3.1.1
ETABLIERUNG
UND
OPTIMIERUNG
DER
METHODIK
........................................................................................
36
3.1.1.1
EFFEKT
DER
FICOLLKONZENTRATION
IM
FINALEN
ZENTRIFUGATIONSSCHRITT
................................................
36
3.1.1.2
EFFEKT
DER
FICOLLKONZENTRATION
AUF
DIE
ZELLVIABILITAET
..................................................................
37
3.1.1.3
EFFEKT
DER
ZENTRIFUGATIONSKRAFT
.....................................................................................................
38
3.1.1.4
FINALE
ZELLZAHL
NACH
ZENTRIFUGATION
............................................................................................
38
3.1.1.5
NUTZUNG
DES
ZELLPELLETS
UNTER
DER
FICOLLPHASE
ZUR
ISOLATION
DER
REFERENZ
DNA
........................
39
3.1.2
GENERIERTE
CDX-MODELLE
.....................................................................................................................
40
3.1.2.1
UEBERSICHT
ZU
GESAMMELTEN
PROBEN
UND
GENERIERTEN
MODELLEN
....................................................
40
3.1.2.2
BEISPIELE
DER
CDX-TUMORE
.........................................................................................................
42
3.1.2.3
CHARAKTERISIERUNG
VON
ZELLKULTUREN
AUS
CDX
TUMOREN
.............................................................
44
3.1.3
DIREKTE
KULTIVIERUNG
VON
CTCS
...........................................................................................................
47
3.1.3.1
GROESSENUNTERSCHIED
ZWISCHEN
CTCS
UND
ETABLIERTEN
SCLC
KULTUREN
..........................................
48
3.1.3.2
NACHWEIS
DES
SCLC
CHARAKTERS
..................................................................................................
49
3.1.3.3
HOECHST
33342
UND
DIO
FAERBUNGEN
.............................................................................................
50
3.1.3.4
S02544
-
VERGLEICH
CDX-TUMOR-KULTUR
UND
CTC
KULTUR
.........................................................
51
3.1.3.5
VERSUCHE
ZUR
OPTIMIERUNG
DER
KULTIVIERUNG
DER
CTCS
................................................................
52
3.2
IN
VITRO
UNTERSUCHUNGEN
ETABLIERTER
SCLC
ZELLLINIEN
..............................................................
54
3.2.1
SCLC
ZELLLINIEN
CHEMOSENSITIVITAET
.....................................................................................................
54
3.2.2
EINFLUSS
DER
ZELLMORPHOLOGIE
AUF
DIE
CHEMOSENSITIVITAET
.....................................................................
56
3.2.2.1
KORRELATION
DER
CHEMOSENSITIVITAET
UND
DER
IN
VITRO
BEOBACHTETEN
ZELLMORPHOLOGIE
...................
56
3.2.2.2
KP1
-
EINFLUSS
DER
ZELLMORPHOLOGIE
AUF
DIE
CHEMOSENSITIVITAET
.................................................
57
3.2.3
CHEMOSENSITIVITAET
IN
RELATION
ZUM
ZEITPUNKT
DER
ZELLLINIENISOLATION
................................................
60
3.2.4
ZELLLINIEN
MIT
AKQUIRIERTER
CHEMORESISTENZ
..........................................................................................
60
3.2.5
MYC
EXPRESSION
UND
CHEMOSENSITIVITAET
..............................................................................................
63
3.2.6
TOPIIA
EXPRESSION
..............................................................................................................................
64
3.2.7
53BP1
FOCI
...........................................................................................................................................
64
3.2.7.1
MAXIMALE
53BP1
FOCI
ZAHL
.........................................................................................................
64
3.2.7.2
REPARATUR
DES
DNA
SCHADENS
UEBER
72H
.......................................................................................
67
3.2.7.3
53BP1
UNDAPB
............................................................................................................................
68
3.2.8
H2AX
EXPRESSION
..............................................................................................................................
70
4.
DISKUSSION
..........................................................................................................................................
71
4.1
DIE
NUTZUNG
VON
ZIRKULIERENDEN
TUMORZELLEN
ZUR
ANALYSE
DER
CHEMORESISTENZMECHANISMEN
IM
KLEINZELLIGEN
BRONCHIALKARZINOM
............................................
71
4.2
IN
VITRO
ANALYSEN
ETABLIERTER
SCLC
ZELLLINIEN
ZUR
UNTERSUCHUNG
VON
CHEMORESISTENZMECHANISMEN
.............................................................................................................
77
5.
ZUSAMMENFASSUNG
...........................................................................................................................
82
6.
LITERATURVERZEICHNIS
...................................
86
7.
VORABVEROEFFENTLICHUNG
....................................................................................................................
96
8.
ANHANG
................................................................................................................................................
97
8.1
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
.....................................................................................................................
97
8.2
TABELLENVERZEICHNIS
.........................................................................................................................
98
9.
LEBENSLAUF
..........................................................................................................................................
99
|
adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
7
1.
EINLEITUNG
.
9
1.1
KREBSERKRANKUNGEN
.
9
1.1.1
TUMORGENESE
.
9
1.2
LUNGENKREBS
.
9
1.2.1
SCLC
-
KLEINZELLIGES
BRONCHIALKARZINOM
.
10
1.2.1.1
REKURRENTE
GENETISCHE
VERAENDERUNGEN
IN
SCLC
TUMOREN
.
10
1.2.1.2
VARIANTER
UND
KLASSISCHER
SUBTYP
DER
SCLC
TUMOREN
.
11
1.2.1.3
THERAPIE
DER
SCLC
TUMOREN
.
11
1.2.1.3.1
ETOPOSID
.
12
1.2.1.3.2
CISPLATIN
.
13
1.3
TUMORBIOLOGIE
UND
RESISTENZMECHANISMEN
.
13
1.3.1
DNA
SCHADENSREPARATUR
.
13
1.3.1.1
DIE
ROLLE
VON
DDR
PROTEINEN
IN
DER
TUMORGENESE
UND
-THERAPIE
.
14
1.3.2
BIOLOGISCHE
GRUNDEIGENSCHAFTEN
VON
TUMOREN
UND
IHRE
BEDEUTUNG
FUER
RESISTENZMECHANISMEN
UND
THERAPIE
.
15
1.3.2.1
AUFRECHTERHALTUNG
EINES
PROLIFERATIVEN
SIGNALS
.
16
1.3.2.2
RESISTENZ
GEGENUEBER
ZELLTOD
.
16
1.3.2.3
VERMEIDEN
VON
WACHSTUMSINHIBITOREN
.
16
1.3.2.4
IMMORTALISIERUNG
.
17
1.3.2.5
INDUKTION
VON
ANGIOGENESE
.
17
1.3.2.6
METASTASIERUNG
.
18
1.4
ZIRKULIERENDE
TUMORZELLEN
(CTCS)
.
18
1.4.1
HETEROGENITAET
DER
CTCS
.
18
1.4.2
DETEKTION
UND
ISOLATION
VON
CTCS
.
19
1.4.3
CTC
EXPANSION
IN
VIVO
UND
IN
VITRO
.
20
1.5
ZIEL
DER
DOKTORARBEIT
.
21
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
22
2.1
CTC
ISOLATION
.
22
2.2
PATIENTENAUFKLAERUNG
UND
ETHIKVOTUM
.
22
2.3
EXPERIMENTE
ZUR
OPTIMIERUNG
.
23
2.3.1
EFFEKT
VON
FICOLL/ZENTRIFUGATIONSKRAFT
AUF
DIE
ZENTRIFUGATION
.
23
2.3.2
EFFEKT
VON
FICOLL
AUF
DIE
ZELLVIABILITAET
.
23
2.3.3
FINALE
ZELLZAHL
NACH
ZENTRIFUGATIONSSCHRITTEN
.
23
2.3.4
DNA
ISOLATION
AUS
DEM
ZELLPELLET
UNTER
DER
FICOLLPHASE
.
24
2.4
MAUSARBEIT
.
24
2.5
IHC
UND
HE
FAERBUNGEN
.
24
2.6
STR
KONTROLLE
.
25
2.7
UEBERNAHME
DER
CDX
TUMORE
IN
DIE
ZELLKULTUR
.
25
2.8
DIREKTE
KULTIVIERUNG
VON
CTCS
.
25
2.9
CHEMOTHERAPEUTIKA
.
26
2.10
ANTIKOERPER
.
26
2.11
ZELLLINIENKULTUR
.
27
2.12
RNA
ISOLATION
UND
CDNA
ERSTELLUNG
.
27
2.13
DNA
ISOLATION
.
28
2.14
PRIMERSEQUENZEN
(5'
NACH
3')
.
28
2.15
GENOTYPISIERUNG
.
30
2.16
SANGER
SEQUENZIERUNGEN
.
30
2.17
QUANTITATIVE
REALTIME
PCR
.
31
2.18
GENERIERUNG
VON
ZELLLINIEN
MIT
AKQUIRIERTER
RESISTENZ
.
31
2.19
IN-VITRO
CHEMOSENSITIVITAETSANALYSEN
.
31
2.20
ZELLPROLIFERATIONSANALYSEN
.
32
2.21
IMMUNFLUORESZENZFAERBUNGEN
(IF)
.
32
2.21.1
SUSPENSIONSZELLLINIEN
.
33
2.21.2
STIMULATION
DER
ZELLEN
FUER
IF
FAERBUNGEN
.
33
2.21.3
IF
FAERBUNGEN
IM
96-WELL
FORMAT
.
34
2.22
WESTERN
BLOTS
.
34
2.22.1
ERSTELLUNG
DER
ZELLLYSATE
.
34
2.22.2
DURCHFUEHRUNG
DES
WESTERN
BLOTS
.
35
3.
ERGEBNISSE
.
36
3.1
GENERIERUNG
VON
SCLC
CDX
MODELLEN
ZUR
REZIDIVANALYSE
.
36
3.1.1
ETABLIERUNG
UND
OPTIMIERUNG
DER
METHODIK
.
36
3.1.1.1
EFFEKT
DER
FICOLLKONZENTRATION
IM
FINALEN
ZENTRIFUGATIONSSCHRITT
.
36
3.1.1.2
EFFEKT
DER
FICOLLKONZENTRATION
AUF
DIE
ZELLVIABILITAET
.
37
3.1.1.3
EFFEKT
DER
ZENTRIFUGATIONSKRAFT
.
38
3.1.1.4
FINALE
ZELLZAHL
NACH
ZENTRIFUGATION
.
38
3.1.1.5
NUTZUNG
DES
ZELLPELLETS
UNTER
DER
FICOLLPHASE
ZUR
ISOLATION
DER
REFERENZ
DNA
.
39
3.1.2
GENERIERTE
CDX-MODELLE
.
40
3.1.2.1
UEBERSICHT
ZU
GESAMMELTEN
PROBEN
UND
GENERIERTEN
MODELLEN
.
40
3.1.2.2
BEISPIELE
DER
CDX-TUMORE
.
42
3.1.2.3
CHARAKTERISIERUNG
VON
ZELLKULTUREN
AUS
CDX
TUMOREN
.
44
3.1.3
DIREKTE
KULTIVIERUNG
VON
CTCS
.
47
3.1.3.1
GROESSENUNTERSCHIED
ZWISCHEN
CTCS
UND
ETABLIERTEN
SCLC
KULTUREN
.
48
3.1.3.2
NACHWEIS
DES
SCLC
CHARAKTERS
.
49
3.1.3.3
HOECHST
33342
UND
DIO
FAERBUNGEN
.
50
3.1.3.4
S02544
-
VERGLEICH
CDX-TUMOR-KULTUR
UND
CTC
KULTUR
.
51
3.1.3.5
VERSUCHE
ZUR
OPTIMIERUNG
DER
KULTIVIERUNG
DER
CTCS
.
52
3.2
IN
VITRO
UNTERSUCHUNGEN
ETABLIERTER
SCLC
ZELLLINIEN
.
54
3.2.1
SCLC
ZELLLINIEN
CHEMOSENSITIVITAET
.
54
3.2.2
EINFLUSS
DER
ZELLMORPHOLOGIE
AUF
DIE
CHEMOSENSITIVITAET
.
56
3.2.2.1
KORRELATION
DER
CHEMOSENSITIVITAET
UND
DER
IN
VITRO
BEOBACHTETEN
ZELLMORPHOLOGIE
.
56
3.2.2.2
KP1
-
EINFLUSS
DER
ZELLMORPHOLOGIE
AUF
DIE
CHEMOSENSITIVITAET
.
57
3.2.3
CHEMOSENSITIVITAET
IN
RELATION
ZUM
ZEITPUNKT
DER
ZELLLINIENISOLATION
.
60
3.2.4
ZELLLINIEN
MIT
AKQUIRIERTER
CHEMORESISTENZ
.
60
3.2.5
MYC
EXPRESSION
UND
CHEMOSENSITIVITAET
.
63
3.2.6
TOPIIA
EXPRESSION
.
64
3.2.7
53BP1
FOCI
.
64
3.2.7.1
MAXIMALE
53BP1
FOCI
ZAHL
.
64
3.2.7.2
REPARATUR
DES
DNA
SCHADENS
UEBER
72H
.
67
3.2.7.3
53BP1
UNDAPB
.
68
3.2.8
\H2AX
EXPRESSION
.
70
4.
DISKUSSION
.
71
4.1
DIE
NUTZUNG
VON
ZIRKULIERENDEN
TUMORZELLEN
ZUR
ANALYSE
DER
CHEMORESISTENZMECHANISMEN
IM
KLEINZELLIGEN
BRONCHIALKARZINOM
.
71
4.2
IN
VITRO
ANALYSEN
ETABLIERTER
SCLC
ZELLLINIEN
ZUR
UNTERSUCHUNG
VON
CHEMORESISTENZMECHANISMEN
.
77
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
82
6.
LITERATURVERZEICHNIS
.
86
7.
VORABVEROEFFENTLICHUNG
.
96
8.
ANHANG
.
97
8.1
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
.
97
8.2
TABELLENVERZEICHNIS
.
98
9.
LEBENSLAUF
.
99 |
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