Analyse und Validierung der renalen (myo-)fibroblasten-spezifischen Kandidatengene Caveolin-3, Fibulin-2, Thrombospondin-4, Tissue factor pathway inhibitor 2 und β3-Tubulin:
Gespeichert in:
1. Verfasser: | |
---|---|
Format: | Abschlussarbeit Buch |
Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
Marburg
[2021]
|
Schlagworte: | |
Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis |
Beschreibung: | VI, 85 Blätter Illustrationen, Diagramme 21 cm |
Internformat
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245 | 1 | 0 | |a Analyse und Validierung der renalen (myo-)fibroblasten-spezifischen Kandidatengene Caveolin-3, Fibulin-2, Thrombospondin-4, Tissue factor pathway inhibitor 2 und β3-Tubulin |c vorgelegt von Lisa Görg-Reifenberg |
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Datensatz im Suchindex
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---|---|
adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
TABELLENVERZEICHNIS...........................................................................................
I
ABBILDUNGSVERZEICHNIS....................................................................................
II
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS..................................................................................
IV
1
EINLEITUNG
....................................................................................................
1
1.1
ANATOMIE
DER
NIERE
....................................................................................................
1
1.2
PHYSIOLOGISCHE
BEDEUTUNG
DER
NIERE
...................................................................
1
1.3
FIBROTISCHE
ERKRANKUNG
DER
NIERE
........................................................................2
1.3.1
PATHOMECHANISMUS
DER
NIERENFIBROSE
..............................................................2
1.3.2
MOLEKULARE
MECHANISMEN
...................................................................................
4
1.3.2.1
TGF-SS-SIGNALWEGE
...................................................................................................4
1.4
MYOFIBROBLASTEN
.........................................................................................................5
1.4.1
HERKUNFT
DER
MYOFIBROBLASTEN
............................................................................5
1.4.1.1
AKTIVIERUNG
UND
PROLIFERATION
RESIDENTER
INTERSTITIELLER
FIBROBLASTEN
....................6
1.4.1.2
PERIZYTEN
(PERIADVENTIELLE
ZELLEN)
...........................................................................7
1.4.1.3
EPITHELIALE-MESENCHYMALE
TRANSITION
(EMT)
........................................................7
1.4.1.4
ENDOTHELIAL-MESENCHYMALE
TRANSITION
(ENDMT)
..................................................
8
1.4.1.5
MESENCHYMALE
VORLAEUFERZELLEN
AUS
DEM
KNOCHENMARK
.....................................
8
1.5
ROLLE
DER
MYOFIBROBLASTEN
BEI
DER
FIBROGENESE
................................................8
1.6
DIFFERENTIELL
REGULIERTE
GENE
IN
MYOFIBROBLASTEN
...............................................9
1.7
FRAGESTELLUNG
UND
ZIELSETZUNG
............................................................................
11
2
MATERIAL
UND
METHODEN............................................................................
13
2.1
MATERIAL
.......................................................................................................................13
2.1.1
GERAETE
..................................................................................................................13
2.1.2
CHEMIKALIEN
........................................................................................................
14
2.1.3
ANTIKOERPER
...........................................................................................................
16
2.1.4
STANDARDS
...........................................................................................................
17
2.1.5
STANDARDISIERTE-SYSTEME
..................................................................................18
2.1.6
NAEHRMEDIEN
........................................................................................................18
2.1.7
ZELLLINIEN
..............................................................................................................18
2.1.7.1
NRK49-F
................................................................................................................
18
2.1.7.2
NIH3T3
...................................................................................................................
18
2.1.8
ALLGEMEINE
PUFFER
UND
LOESUNGEN
....................................................................19
2.2
METHODEN
...................................................................................................................
20
2.2.1
ZELLKULTUR
..............................................................................................................
20
2.2.1.1
KULTIVIERUNG
...............................................................................................................
20
2.2.1.2
ZELLZAHLBESTIMMUNG
................................................................................................
20
2.2.1.3
BEHANDLUNG
MIT
TGF-SS
................................................................................................
21
2.2.2
MURINES
TIERMODELL
...................................................................................................21
2.2.2.1
HALTUNG
UND
ZUCHT
....................................................................................................
21
2.2.2.2
UNILATERALE
URETER
OBSTRUKTION
(UUO)
.........................................................................
21
2.2.3
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
..............................................................................22
2.2.3.1
RNA-ISOLATION..............................................................................................................
22
2.2.3.1.1
AUS
ZELLEN
..........................................................................................................
22
2.2.3.1.2
AUS
MURINEM
GEWEBE
......................................................................................
22
2.2.3.2
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
NUKLEINSAEUREN.........................................................
23
2.2.3.3
REVERSE
TRANSKRIPTION
FUER
CDNA-SYNTHESE
...................................................................
23
2.2.3.4
REAL
TIME
QUANTITATIVE
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(RT-QPCR)
...................................
24
2.2.3.5
AGAROSEGELELEKTROPHORESE..........................................................................................
27
2.2.4
PROTEINBIOCHEMISCHE
METHODEN
..............................................................................28
2.2.4.1
ZELLERNTE
....................................................................................................................
28
2.2.4.2
PRAEPARATION
VON
GESAMTPROTEINEXTRAKTEN
...................................................................
28
2.2.4.2.1
AUS
ZELLEN
..........................................................................................................
28
2.2.4.2.2
AUS
MURINEM
GEWEBE
.......................................................................................
28
2.2.4.3
BESTIMMUNG
DER
PROTEINKONZENTRATION
.......................................................................
28
2.2
4.4
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
....................................................
29
2.2.4.5
WESTERN
BLOT
...............................................................................................................
30
2.2.5
IMMUNFLUORESZENZ
.....................................................................................................31
2.2.5.1
VORBEREITUNG
DER
ZELLEN
.............................................................................................
31
2.2.5.2
IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG
UND
-MIKROSKOPIE
..............................................................
31
2.2.6
IMMUNHISTOCHEMIE
....................................................................................................32
2.2.6.1
VORBEREITUNG
DES
GEWEBES........................................................................................
32
2.2.6.2
IMMUNHISTOCHEMISCHE
FAERBUNG
UND
MIKROSKOPIE
......................................................
33
2.2.7
STATISTISCHE
ANALYSE
...................................................................................................34
3
ERGEBNISSE
..........................................................................................................................
35
3.1
AUSWAHL
DER
KANDIDATENGENE
..........................................................................................35
3.2
EXPRESSION
IN
VITRO
..............................................................................................................36
3.2.1
NIH3T3
ZELLEN
............................................................................................................
36
3.2.1.1
STIMULATION
MIT
TGF-SS
.................................................................................................
36
3.2.1.2
KANDIDATENGENE..........................................................................................................
39
3.2.2
NRK
49-F-ZELLEN
........................................................................................................
41
3.2.2.1
STIMULATION
MIT
TGF-SS
................................................................................................
41
3.2.2.2
KANDIDATENGENE........................................................................................................
43
3.3
EXPRESSION
IN
VIVO
...................................................................................................
45
3.3.1
INDUKTION
DER
FIBROSE
MITTELS
UUO
............................................................................
46
3.3.2
KANDIDATENGENE
..........................................................................................................
49
4
DISKUSSION............................................................................................................................
54
4.1
DISKUSSION
VON
MATERIAL,
METHODEN
UND
STIMULATION
..................................................
54
4.1.1
IN-V/TRO-EXPERIMENTE
..................................................................................................54
4.1.2
/N-VIVO-EXPERIMENTE
..................................................................................................57
4.2
DISKUSSION
DER
ERGEBNISSE
................................................................................................
58
4.2.1
CAVEOLIN-3
....................................................................................................................58
4.2.2
FIBULIN-2
.......................................................................................................................
60
4.2.3
THROMBOSPONDIN-4
....................................................................................................61
4.2.4
TISSUE
FACTOR
PATHWAY
INHIBITOR
2
............................................................................
62
4.2.5
SS3-TUBULIN
..................................................................................................................
64
4.3
ZUSAMMENFASSUNG
UND
AUSBLICK
......................................................................................
65
5
ZUSAMMENFASSUNG
............................................................................................................
66
6
LITERATURVERZEICHNIS
..........................................................................................................
70
7
VERZEICHNIS
AKADEMISCHER
LEHRER
..................................................................................
84
8
DANKSAGUNG
........................................................................................................................
85
|
adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
TABELLENVERZEICHNIS.
I
ABBILDUNGSVERZEICHNIS.
II
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS.
IV
1
EINLEITUNG
.
1
1.1
ANATOMIE
DER
NIERE
.
1
1.2
PHYSIOLOGISCHE
BEDEUTUNG
DER
NIERE
.
1
1.3
FIBROTISCHE
ERKRANKUNG
DER
NIERE
.2
1.3.1
PATHOMECHANISMUS
DER
NIERENFIBROSE
.2
1.3.2
MOLEKULARE
MECHANISMEN
.
4
1.3.2.1
TGF-SS-SIGNALWEGE
.4
1.4
MYOFIBROBLASTEN
.5
1.4.1
HERKUNFT
DER
MYOFIBROBLASTEN
.5
1.4.1.1
AKTIVIERUNG
UND
PROLIFERATION
RESIDENTER
INTERSTITIELLER
FIBROBLASTEN
.6
1.4.1.2
PERIZYTEN
(PERIADVENTIELLE
ZELLEN)
.7
1.4.1.3
EPITHELIALE-MESENCHYMALE
TRANSITION
(EMT)
.7
1.4.1.4
ENDOTHELIAL-MESENCHYMALE
TRANSITION
(ENDMT)
.
8
1.4.1.5
MESENCHYMALE
VORLAEUFERZELLEN
AUS
DEM
KNOCHENMARK
.
8
1.5
ROLLE
DER
MYOFIBROBLASTEN
BEI
DER
FIBROGENESE
.8
1.6
DIFFERENTIELL
REGULIERTE
GENE
IN
MYOFIBROBLASTEN
.9
1.7
FRAGESTELLUNG
UND
ZIELSETZUNG
.
11
2
MATERIAL
UND
METHODEN.
13
2.1
MATERIAL
.13
2.1.1
GERAETE
.13
2.1.2
CHEMIKALIEN
.
14
2.1.3
ANTIKOERPER
.
16
2.1.4
STANDARDS
.
17
2.1.5
STANDARDISIERTE-SYSTEME
.18
2.1.6
NAEHRMEDIEN
.18
2.1.7
ZELLLINIEN
.18
2.1.7.1
NRK49-F
.
18
2.1.7.2
NIH3T3
.
18
2.1.8
ALLGEMEINE
PUFFER
UND
LOESUNGEN
.19
2.2
METHODEN
.
20
2.2.1
ZELLKULTUR
.
20
2.2.1.1
KULTIVIERUNG
.
20
2.2.1.2
ZELLZAHLBESTIMMUNG
.
20
2.2.1.3
BEHANDLUNG
MIT
TGF-SS
.
21
2.2.2
MURINES
TIERMODELL
.21
2.2.2.1
HALTUNG
UND
ZUCHT
.
21
2.2.2.2
UNILATERALE
URETER
OBSTRUKTION
(UUO)
.
21
2.2.3
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.22
2.2.3.1
RNA-ISOLATION.
22
2.2.3.1.1
AUS
ZELLEN
.
22
2.2.3.1.2
AUS
MURINEM
GEWEBE
.
22
2.2.3.2
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
NUKLEINSAEUREN.
23
2.2.3.3
REVERSE
TRANSKRIPTION
FUER
CDNA-SYNTHESE
.
23
2.2.3.4
REAL
TIME
QUANTITATIVE
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(RT-QPCR)
.
24
2.2.3.5
AGAROSEGELELEKTROPHORESE.
27
2.2.4
PROTEINBIOCHEMISCHE
METHODEN
.28
2.2.4.1
ZELLERNTE
.
28
2.2.4.2
PRAEPARATION
VON
GESAMTPROTEINEXTRAKTEN
.
28
2.2.4.2.1
AUS
ZELLEN
.
28
2.2.4.2.2
AUS
MURINEM
GEWEBE
.
28
2.2.4.3
BESTIMMUNG
DER
PROTEINKONZENTRATION
.
28
2.2
4.4
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
.
29
2.2.4.5
WESTERN
BLOT
.
30
2.2.5
IMMUNFLUORESZENZ
.31
2.2.5.1
VORBEREITUNG
DER
ZELLEN
.
31
2.2.5.2
IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG
UND
-MIKROSKOPIE
.
31
2.2.6
IMMUNHISTOCHEMIE
.32
2.2.6.1
VORBEREITUNG
DES
GEWEBES.
32
2.2.6.2
IMMUNHISTOCHEMISCHE
FAERBUNG
UND
MIKROSKOPIE
.
33
2.2.7
STATISTISCHE
ANALYSE
.34
3
ERGEBNISSE
.
35
3.1
AUSWAHL
DER
KANDIDATENGENE
.35
3.2
EXPRESSION
IN
VITRO
.36
3.2.1
NIH3T3
ZELLEN
.
36
3.2.1.1
STIMULATION
MIT
TGF-SS
.
36
3.2.1.2
KANDIDATENGENE.
39
3.2.2
NRK
49-F-ZELLEN
.
41
3.2.2.1
STIMULATION
MIT
TGF-SS
.
41
3.2.2.2
KANDIDATENGENE.
43
3.3
EXPRESSION
IN
VIVO
.
45
3.3.1
INDUKTION
DER
FIBROSE
MITTELS
UUO
.
46
3.3.2
KANDIDATENGENE
.
49
4
DISKUSSION.
54
4.1
DISKUSSION
VON
MATERIAL,
METHODEN
UND
STIMULATION
.
54
4.1.1
IN-V/TRO-EXPERIMENTE
.54
4.1.2
/N-VIVO-EXPERIMENTE
.57
4.2
DISKUSSION
DER
ERGEBNISSE
.
58
4.2.1
CAVEOLIN-3
.58
4.2.2
FIBULIN-2
.
60
4.2.3
THROMBOSPONDIN-4
.61
4.2.4
TISSUE
FACTOR
PATHWAY
INHIBITOR
2
.
62
4.2.5
SS3-TUBULIN
.
64
4.3
ZUSAMMENFASSUNG
UND
AUSBLICK
.
65
5
ZUSAMMENFASSUNG
.
66
6
LITERATURVERZEICHNIS
.
70
7
VERZEICHNIS
AKADEMISCHER
LEHRER
.
84
8
DANKSAGUNG
.
85 |
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