Einfluss der Aktivität des Hippo-Signalweg Proteins LATS2 auf die Proteine der Ajuba-Familie im Podozyten:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Münster
2021
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| Beschreibung: | VII, 62 Blätter Illustrationen 30 cm |
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Datensatz im Suchindex
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS......................................................................................
I
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
....................................................................................................................
IV
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
............................................................................
YY.
.....................................
V
TABELLENVERZEICHNIS
......................................................................................................................
VII
1.
EINLEITUNG..............................................................................................
1
1.1
DIE
NIERE
...................................................................................................................................
1
1.1.1
DAS
NEPHRON
UND
SEINE
FUNKTION
....................................................................................
2
1.1.2
DIE
GLOMERULAERE
FILTERBARRIERE
..........................................................................................
3
1.2
HIPPO-SIGNALWEG
IN
DROSOPHILA
UND
SAEUGERN
..................................................................
4
1.2.1
LATS2
SEINE
FUNKTION
UND
REGULATION
..........................................................................
5
1.2.2
HIPPO-SIGNALWEG
IM
PODOZYTEN
.......................................................................................
7
1.2.3
AJUBA-PROTEIN-FAMILIE
.......................................................................................................
9
1.3
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
..........................................................................................................
10
2.
MATERIALIEN
.........................................................................................
11
2.1
GERAETE
.....................................................................................................................................
11
2.2
LABORBEDARF
...........................................................................................................................
12
2.3
CHEMIKALIEN
..........................................................................................................................
13
2.4
PUFFER
UND
LOESUNGEN
..........................................................................................................
14
2.5
ENZYME
...................................................................................................................................
16
2.6
ANTIKOERPER
..............................................................................................................................
16
2.6.1
PRIMAERE
ANTIKOERPER
................................................................................................................
16
2.6.2
SEKUNDAERE
ANTIKOERPER
...........................................................................................................
17
2.7
PRIMER
.....................................................................................................................................
18
2.8
PLASMIDE
UND
VEKTOREN
.......................................................................................................
18
2.9
KOMMERZIELLE
KITS
................................................................................................................
19
2.10
ORGANSIMEN
...........................................................................................................................
19
2.10.1
BAKTERIEN
..............................................................................................................................
19
2.10.2
EUKARYOTISCHE
ZELLEN
..........................................................................................................
19
2.11
SOFTWARE,
DATENBANKEN
UND
SUCHMASCHINEN
................................................................
20
3.
METHODEN
.............................................................................................
22
3.1
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.......................................................................................
22
3.1.1
RESTRIKTIONSVERDAU
VON
DNA
..........................................................................................
22
3.1.2
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
...........................................................................................22
3.1.3
DNA-AUFREINIGUNG
MITTELS
ZYMOCLEAN
...........................................................................
22
3.1.4
LIGATION
............................................................................................................................
23
3.1.5
TRANSFORMATION
VON
E.
COLI
DH
10B
...............................................................................
23
3.1.6
AUFREINIGUNG
VON
PLASMID-DNA
AUS
E.COLI
...................................................................
23
3.1.7
DNA-KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
MITTELS
PHOTOMETRIE
................................................24
3.1.8
SEQUENZIERUNG
VON
PLASMID-DNA
.................................................................................24
3.2
ZELLBIOLOGISCHE
METHODEN
..................................................................................................24
3.2.1
KULTIVIERUNG
VON
EUKARYOTISCHEN
ZELLLINIEN
...................................................................
24
3.2.2
AUFTAUEN
UND
EINFRIEREN
DER
ZELLEN
...............................................................................
25
3.2.3
TRANSIENTE
TRANSFEKTION
VON
AB
8
ZELLEN
MITTELS
LIPOFECTAMINE
2000
.......................
26
3.2.4
TRANSIENTE
TRANSFEKTION
VON
HEK293T
ZELLEN
MITTELS
CALCIUMPHOSPHAT
...................26
3.2.5
PLNDUCER21-PURO-SYSTEM
...........................................................................................27
3.2.6
STABILE
ZELLLINIEN
VIA
LENTIVIRALER
TRANSDUKTION
..............................................................
27
3.2.7
HERSTELLUNG
VON
ZELLLYSATEN
............................................................................................
28
3.2.8
FIXIERUNG
VON
ZELLEN
AUF
DECKGLAESCHEN
........................................................................28
3.2.9
IMMUNOFLUORESZENZFAERBUNG
VON
FIXIERTEN
ZELLEN
..........................................................29
3.3
PROTEINBIOCHEMISCHE
METHODEN
........................................................................................
29
3.3.1
SDS-PAGE
......................................................................................................................29
3.3.2
WESTERN
BLOT
....................................................................................................................
30
3.3.3
IMMUNDETEKTION
MIT
SPEZIFISCHEN
ANTIKOERPERN
.............................................................
31
3.4
QUANTITATIVE
UND
STATISTISCHE
METHODEN
..........................................................................
31
4.
ERGEBNISSE
..........................................................................................
32
4.1
GENERIERUNG
STABILER
PODOZYTENZELLLINIEN
MIT
INDUZIERBARER
EXPRESSION
EGFP
MARKIERTER
AJUBA-PROTEINE
.............................................................................................................
32
4.1.1
LOKALISATION
DER
AJUBA-PROTEINE
IN
AB
8
ZELLEN
............................................................
33
4.1.2
UMLAGERUNG
DER
AJUBA-PROTEINE
DURCH
UEBEREXPRESSION
VON
LATS2
..........................
35
4.1.3
DOPPELT
INDUZIERBARE
AB
8
ZELLLINIE
MIT
EGFP-WTIP
UND
LATS2
WT
........................
38
4.2
EXPRESSIONSLEVEL
DER
AJUBA-PROTEINE
NACH
LATS2
UEBEREXPRESSION
..........................
42
4.2.1
UEBEREXPRESSION
VON
LATS2
WT
FUEHRT
ZU
VERMINDERTER
EXPRESSION
DER
AJUBA-PROTEINE
43
4.2.2
VERMINDERTE
EXPRESSION
DER
AJUBA-PROTEINE
BEI
UEBEREXPRESSION
DER
DAUERAKTIVEN
UND
DAUERINAKTIVEN
LATS2
VARIANTEN
...........................................................................................43
4.3
EINFLUSS
DES
TRANSLATIONSHEMMERS
CHX
AUF
DIE
AJUBA-PROTEINE
UND
LATS2
..........
45
4.4
UNTERSUCHUNG
DES
PROTEASOMALEN
ABBAUS
.....................................................................46
5.
DISKUSSION
...........................................................................................
49
5.1
ZUSAMMENFASSUNG
UND
AUSBLICK
......................................................................................
55
6.
LITERATURVERZEICHNIS
.....................................................................
57
7.
LEBENSLAUF
........................................................................................
61
8.
DANKSAGUNG
......................................................................................
62
|
| adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS.
I
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
.
IV
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
YY.
.
V
TABELLENVERZEICHNIS
.
VII
1.
EINLEITUNG.
1
1.1
DIE
NIERE
.
1
1.1.1
DAS
NEPHRON
UND
SEINE
FUNKTION
.
2
1.1.2
DIE
GLOMERULAERE
FILTERBARRIERE
.
3
1.2
HIPPO-SIGNALWEG
IN
DROSOPHILA
UND
SAEUGERN
.
4
1.2.1
LATS2
SEINE
FUNKTION
UND
REGULATION
.
5
1.2.2
HIPPO-SIGNALWEG
IM
PODOZYTEN
.
7
1.2.3
AJUBA-PROTEIN-FAMILIE
.
9
1.3
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
.
10
2.
MATERIALIEN
.
11
2.1
GERAETE
.
11
2.2
LABORBEDARF
.
12
2.3
CHEMIKALIEN
.
13
2.4
PUFFER
UND
LOESUNGEN
.
14
2.5
ENZYME
.
16
2.6
ANTIKOERPER
.
16
2.6.1
PRIMAERE
ANTIKOERPER
.
16
2.6.2
SEKUNDAERE
ANTIKOERPER
.
17
2.7
PRIMER
.
18
2.8
PLASMIDE
UND
VEKTOREN
.
18
2.9
KOMMERZIELLE
KITS
.
19
2.10
ORGANSIMEN
.
19
2.10.1
BAKTERIEN
.
19
2.10.2
EUKARYOTISCHE
ZELLEN
.
19
2.11
SOFTWARE,
DATENBANKEN
UND
SUCHMASCHINEN
.
20
3.
METHODEN
.
22
3.1
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
22
3.1.1
RESTRIKTIONSVERDAU
VON
DNA
.
22
3.1.2
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
.22
3.1.3
DNA-AUFREINIGUNG
MITTELS
ZYMOCLEAN
.
22
3.1.4
LIGATION
.
23
3.1.5
TRANSFORMATION
VON
E.
COLI
DH
10B
.
23
3.1.6
AUFREINIGUNG
VON
PLASMID-DNA
AUS
E.COLI
.
23
3.1.7
DNA-KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
MITTELS
PHOTOMETRIE
.24
3.1.8
SEQUENZIERUNG
VON
PLASMID-DNA
.24
3.2
ZELLBIOLOGISCHE
METHODEN
.24
3.2.1
KULTIVIERUNG
VON
EUKARYOTISCHEN
ZELLLINIEN
.
24
3.2.2
AUFTAUEN
UND
EINFRIEREN
DER
ZELLEN
.
25
3.2.3
TRANSIENTE
TRANSFEKTION
VON
AB
8
ZELLEN
MITTELS
LIPOFECTAMINE
2000
.
26
3.2.4
TRANSIENTE
TRANSFEKTION
VON
HEK293T
ZELLEN
MITTELS
CALCIUMPHOSPHAT
.26
3.2.5
PLNDUCER21-PURO-SYSTEM
.27
3.2.6
STABILE
ZELLLINIEN
VIA
LENTIVIRALER
TRANSDUKTION
.
27
3.2.7
HERSTELLUNG
VON
ZELLLYSATEN
.
28
3.2.8
FIXIERUNG
VON
ZELLEN
AUF
DECKGLAESCHEN
.28
3.2.9
IMMUNOFLUORESZENZFAERBUNG
VON
FIXIERTEN
ZELLEN
.29
3.3
PROTEINBIOCHEMISCHE
METHODEN
.
29
3.3.1
SDS-PAGE
.29
3.3.2
WESTERN
BLOT
.
30
3.3.3
IMMUNDETEKTION
MIT
SPEZIFISCHEN
ANTIKOERPERN
.
31
3.4
QUANTITATIVE
UND
STATISTISCHE
METHODEN
.
31
4.
ERGEBNISSE
.
32
4.1
GENERIERUNG
STABILER
PODOZYTENZELLLINIEN
MIT
INDUZIERBARER
EXPRESSION
EGFP
MARKIERTER
AJUBA-PROTEINE
.
32
4.1.1
LOKALISATION
DER
AJUBA-PROTEINE
IN
AB
8
ZELLEN
.
33
4.1.2
UMLAGERUNG
DER
AJUBA-PROTEINE
DURCH
UEBEREXPRESSION
VON
LATS2
.
35
4.1.3
DOPPELT
INDUZIERBARE
AB
8
ZELLLINIE
MIT
EGFP-WTIP
UND
LATS2
WT
.
38
4.2
EXPRESSIONSLEVEL
DER
AJUBA-PROTEINE
NACH
LATS2
UEBEREXPRESSION
.
42
4.2.1
UEBEREXPRESSION
VON
LATS2
WT
FUEHRT
ZU
VERMINDERTER
EXPRESSION
DER
AJUBA-PROTEINE
43
4.2.2
VERMINDERTE
EXPRESSION
DER
AJUBA-PROTEINE
BEI
UEBEREXPRESSION
DER
DAUERAKTIVEN
UND
DAUERINAKTIVEN
LATS2
VARIANTEN
.43
4.3
EINFLUSS
DES
TRANSLATIONSHEMMERS
CHX
AUF
DIE
AJUBA-PROTEINE
UND
LATS2
.
45
4.4
UNTERSUCHUNG
DES
PROTEASOMALEN
ABBAUS
.46
5.
DISKUSSION
.
49
5.1
ZUSAMMENFASSUNG
UND
AUSBLICK
.
55
6.
LITERATURVERZEICHNIS
.
57
7.
LEBENSLAUF
.
61
8.
DANKSAGUNG
.
62 |
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Inhaltsverzeichnis