Verfügbarkeit: Einfluss der Deletion des Actin- und Myosinbindeproteins Caldesmon auf die biomechanischen Eigenschaften der fötalen murinen Harnblase

Einfluss der Deletion des Actin- und Myosinbindeproteins Caldesmon auf die biomechanischen Eigenschaften der fötalen murinen Harnblase:

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Bibliographische Detailangaben
1. Verfasser:	Barthel, Lisa Sophie 1988- (VerfasserIn)
Format:	Abschlussarbeit Buch
Sprache:	German
Veröffentlicht:	Köln [2021]
Schlagworte:	Tiermodell Phosphorylierung Biomechanik Hochschulschrift
Online-Zugang:	Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis
Beschreibung:	126 Seiten Illustrationen, Diagramme 21 cm

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adam_text	INHALTSVERZEICHNIS DANKSAGUNG .............................................................................................................. 4 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS ...................................................................................... 10 BEZUGSQUELLENVERZEICHNIS ................................................................................. 12 ABBILDUNGSVERZEICHNIS ....................................................................................... 15 I. EINLEITUNG .......................................................................................................... 19 1.0 EINFUEHRUNG IN DIE THEMATIK ......................................................................... 19 1.1 ENTSTEHUNG DER HARNBLASE ............................................................................ 19 1.2 ERREGUNGS KONTRAKTIONSKOPPLUNG AM BEISPIEL DER HARNBLASE ................ 20 2.0 DIE KONTRAKTILE EINHEIT IM GLATTEN MUSKEL ................................................. 21 2.1 ACTIN ............................................................................................................. 23 2.2 MYOSIN .......................................................................................................... 23 2.3 ERREGUNGS-KONTRAKTIONS-KOPPLUNG ............................................................ 24 2.4 CALCIUMABHAENGIGE PHOSPHORYLIERUNG DER MLCZO ...................................... 25 2.5 AKTIVIERUNGEN DES QUERBRUECKENZYKLUS ...................................................... 26 3.0 CALDESMON .................................................................................................... 27 3.1 CAD ISOFORMEN UND DOMAENENSTRUKTUR ...................................................... 27 3.2 UNTERSUCHUNGEN DER FUNTIONELLEN CAD-EIGENSCHAFTEN IN VITRO .................. 29 3.3. UNTERSUCHUNGEN DER FUNKTIONELLEN EIGENSCHAFTEN IN DEMEMBRANIERTEN PRAEPARATEN .................................................................................................... 33 3.4 UNTERSUCHUNGEN DER ROLLE VON CALDESMON FUER DIE GLATTE MUSKULATUR IN VIVO .............................................................................................................. 34 4.0 ZIELSETZUNG .................................................................................................... 35 II. MATERIAL UND METHODEN .................................................................................. 36 1. 0 HALTUNGSBEDINGUNGEN UND ZUCHT DER VERSUCHSTIERE ................................. 36 1.1 EUTHANISIERUNG DER MAEUSE DER LINIE B6-CALD 1 KO ................................... 37 1.2 GEWICHTSERMITTLUNG DER FOETEN UND HARNBLASEN PRAEPARATE ........................ 37 1.3 BERECHNUNG DES BLASEN-ZU-KOERPERGEWICHT-VERHAELTNISSES ....................... 37 2.0 HERSTELLUNG DER PRAEPARATE FUER MECHANISCHE MESSUNGEN ............................ 38 2.0.1 PRAEPARATION DER MURINEN HARNBLASE .................................................. 38 2.0.2 TRITONPERMEABILISIERUNG DER MURINEN HARNBLASE ............................ 39 2.0.3 VORBEREITUNG DER PRAEPARATE VOR DER MESSUNG .................................. 40 3.0 MECHANISCHE EXPERIMENTE ........................................................................... 41 3.0.1. AUFBAU DER MESSAPPARATUR ABB.5A,B ............................................ 41 3.1 EXPERIMENTELLE PROTOKOLLE MIT MEMBRANFREIEN PRAEPARATEN .................... 42 3.1.1 MESSLOESUNGEN MEMBRANFREIER PRAEPARATE .......................................... 42 3.1.2 DEHNUNG DER MEMBRANFREIEN PRAEPARATE ............................................ 43 6 3.1.3 KRAFT-PCA -KURVEN ............................................................................ 44 3.1.4 UNTERSUCHUNG DER RELAXATION ........................................................... 45 3.1.5 EXPERIMENTELLE PROTOKOLLE MIT ZWEI UNTERSCHIEDLICHEN CAM INHIBITOREN ........................................................................................ 45 3.1.6 EXPERIMENTELLE PROTOKOLLE MIT ML7-EINEM MLCK INHIBITOR ....... 47 3.2 EXPERIMENTELLE PROTOKOLLE MIT INTAKTEN PRAEPARATEN ................................ 48 3.2.1. VORBEREITUNG DER INTAKTEN HAMBLASENPRAEPARATE ............................. 48 3.2.2 AKTIVE UND PASSIVE LAENGEN-SPANNUNGS DIAGRAMME ....................... 48 3.2.3 KONZENTRATIONS-WIRKUNGSKURVE MIT CARBACHOL ............................... 48 3.2.4 EFS (ELEKTRISCHE FELDSTIMULATION) .................................................. 49 3.2.5 EXPERIMENTELLE PROTOKOLLE MIT INTAKTEN PRAEPARATEN ......................... 50 4.0 ELEKTROPHORETISCHE UNTERSUCHUNGEN ............................................................ 52 4.1 PROBENGEWINNUNG FUER DIE 2D GELELEKTROPHORESE ....................................... 52 4.2 ANFERTIGUNG DER GELE .................................................................................... 52 4.2.1 ISOELEKTRISCHE FOKUSSIERUNG / IEF (1. DIMENSION) ......................... 52 4.2.2 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (2. DIMENSION) ................. 54 4.2.3 FAERBEMETHODEN ................................................................................... 56 4.2.4 AUSWERTUNG DER SILBERGEFARBTEN GELE .............................................. 57 4.2.5 PHOSTAG-SDS-PAGE UND WESTEMBLOTTING NACH DEM PROTOKOLL VON M.WALSH ET AL. [113] ................................................................ 58 4.2.6 DURCHFUEHRUNG DES ELEKTRISCHEN PROTEINTRANSFERS MITTELS WESTERN BLOTTING ............................................................................................ 60 5.0. TRANSMISSIONSELEKTRONENMIKROSKOPIE (TEM) ........................................... 62 5.0.1. HERSTELLUNG DER PRAEPARATE ................................................................. 62 5.0.2 ERSTELLUNG DER EM-BILDER .................................................................. 63 6.0 STATISTISCHE AUSWERTUNG ............................................................................... 63 6.0.1 DARSTELLUNGEN DER SIGNIFIKANZEN ...................................................... 63 6.0.2 BERECHNUNG DER SENSITIVITAET ............................................................... 64 6.0.3 BERECHNUNG DER SPEZIFITAET ................................................................. 64 6.0.4 BERECHNUNG DES POSITIV PRAEDIKTIVEN VORHERSAGEWERTES .................. 64 6.0.5 BERECHNUNG DES PROZENTUALEN ANTEILS AN MLCZO-SPEZIES ............... 65 III. ERGEBNISSE ..................................................................................................... 66 1.0 WURFCHARAKTERISTIKA ...................................................................................... 66 1.0.1 GESCHLECHTERVERTEILUNG ...................................................................... 66 2.0 VERMINDERTE FERTILITAET DER HETXHET-VERPAARUNGEN ................................ 67 3..0 MAKROSKOPISCHER PHAENOTYP DER CALDESMON-DEFIZIENTEN FOETEN ................ 68 3.0.1 TRIAS OMPHALOZELE, GESPALTENES XYPHOID UND HELLE LEBERAREALE IN KO FOETEN ....................................................................... 68 7 3.0.2 STATISTISCHE GUETE DER KO TRIAS ALS TESTKRITERIUM ZU VORHERSAGE DES GENOTYPS KO ........................................................................... 69 4.0 GEWICHTE DER HARNBLASEN ............................................................................ 70 5.0 KONTRAKTIONSEIGENSCHAFTEN CHEMISCH DEMEMBRANIERTER STREIFENPRAEPARATE FOETALER WT UND KNOCK-OUT MAEUSEHARNBLASEN AN E18,5 ............................................................................................................ 71 5.0.1 RUHE-DEHNUNGSKURVE ........................................................................ 71 6.0 VERGLEICH DER CALCIUMABHAENGIGEN UND -UNABHAENGIGEN MAXIMALKRAEFTE... 74 7.0 MLC20-PHOSPHORYLIERUNG ............................................................................ 76 8.0 VERLANGSAMTE RELAXATION CALDESMONDEFIZIENTER PRAEPARATE ....................... 79 9.0 EINFLUSS VON CAM-ANTAGONISTEN UND EINES MLCK -INHIBITORS AUF DIE CA 2+ -AKTIVIERTE KONTRAKTION DEMEMBRANIERTER FETALER WT-HAMBLASEN...8O 10.0 KONTRAKTIONSEIGENSCHAFTEN INTAKTER HAMBLASEN-PRAEPARATE VON CALDESMONDEFIZIENTEN MAEUSEN ............................................................ 83 10.1 TRANSMURALE ELEKTRISCHE FELDSTIMULATION (EFS) INTAKTER PRAEPARATE AN E18,5 ........................................................................................................... 83 10.2 RUHE-DEHNUNGSKURVE UND KURVE DER NOMINELLEN ISOMETRISCHEN MAXIMA ........................................................................................................ 84 10.3 REPRODUZIERBARKEIT DER DURCH 80MM KCL-INDUZIERTEN KONTRAKTION IN ABHAENGIGKEIT DER VORDEHNUNG ................................................................... 85 10.4 EINFLUSS MUSKARINERGER STIMULATION ......................................................... 86 10.4.1 KONZENTRATIONS-WIRKUNGSBEZIEHUNG MIT CARBACHOL ..................... 86 10.4.4. HEMMUNG DER CARBACHOL-INDUZIERTEN KRAFT DURCH ATROPIN ...... 89 10.5 INKUBATION MIT PROTEINKINASE C-AKTIVATOR PHORBOLESTHER ...................... 90 IV. DISKUSSION ..................................................................................................... 91 1.0 ZENTRALE ERKENNTNISSE .................................................................................. 91 2.0 CHARAKTERISIERUNG DES VERWENDETEN GLATTMUSKULAEREN PRAEPARATES ............... 92 2.1 PERMEABILISIERTE PRAEPARATE ........................................................................... 92 2.1.1 VORTEILE DER VERWENDETEN PRAEPARATE ................................................. 92 2.1.2 NACHTEILE DER VERWENDETEN TRITON-PERMEABILISIERTEN PRAEPARATE .... 93 2.2 CHARAKTERISIERUNG DER KONTRAKTION VON MEMBRANFREIEN WT-PRAEPARATEN.93 2.3.1 DIE CA 2+ -SENSITIVITAET IST IN KNOCK-OUT PRAEPARATEN ERHOEHT ............ 94 2.3.2 KRAFTVERLUST IN PERMEABILISIERTEN CAD-KNOCKOUT PRAEPARATEN ................ 96 2.3.3 ZYTOPLASMATISCHE ORDNUNG DES MYOZYTEN DER VESICA URINARIA ...... 97 2.3.4 PHOSPHORYLIERUNG DER REGULATORISCHEN LEICHTEN KETTE DES MYOSINS (MLCZO) ........................................................................ 98 2.3.5 EINFLUSS VON CALDESMON AUF DIE RELAXATIONSKINETIK .................... 100 3.0 EINFLUSS DER CALDESMONDEFIZIENZ AUF MEMBRANINTAKTE FOETALE PRAEPARATE 101 8 3.1 HAMBLASENGEWICHTE UND VERHAELTNIS DES HAMBLASENGEWICHTS ZUM KOERPERGEWICHT ............................................................................................ 101 3.2 LAENGEN -SPANNUNGS DIAGRAMM UND KURVE DER NOMINELLEN MAXIMA.... 101 3.3 CARBACHOLINDUZIERTE KONTRAKTION .............................................................. 102 4.0 EINFLUSS VON CAD AUF DIE FERTILITAET ............................................................ 103 5.0 ABDOMINELLE SCHLUSSDEFEKTE ...................................................................... 104 5.1 BAUCHWANDDEFEKTE PROJEZIERBARKEIT AUF DEN MENSCHEN ..................... 106 6.0 ZUSAMMENFASSUNG ...................................................................................... 108 V EIGENE PUBLIKATIONEN ...................................................................................... 110 VI LITERATURVERZEICHNIS ...................................................................................... 111 VIII LEBENSLAUF .................................................................................................... 125 9
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AUFBAU DER MESSAPPARATUR ABB.5A,B . 41 3.1 EXPERIMENTELLE PROTOKOLLE MIT MEMBRANFREIEN PRAEPARATEN . 42 3.1.1 MESSLOESUNGEN MEMBRANFREIER PRAEPARATE . 42 3.1.2 DEHNUNG DER MEMBRANFREIEN PRAEPARATE . 43 6 3.1.3 KRAFT-PCA -KURVEN . 44 3.1.4 UNTERSUCHUNG DER RELAXATION . 45 3.1.5 EXPERIMENTELLE PROTOKOLLE MIT ZWEI UNTERSCHIEDLICHEN CAM INHIBITOREN . 45 3.1.6 EXPERIMENTELLE PROTOKOLLE MIT ML7-EINEM MLCK INHIBITOR . 47 3.2 EXPERIMENTELLE PROTOKOLLE MIT INTAKTEN PRAEPARATEN . 48 3.2.1. VORBEREITUNG DER INTAKTEN HAMBLASENPRAEPARATE . 48 3.2.2 AKTIVE UND PASSIVE LAENGEN-SPANNUNGS DIAGRAMME . 48 3.2.3 KONZENTRATIONS-WIRKUNGSKURVE MIT CARBACHOL . 48 3.2.4 EFS (ELEKTRISCHE FELDSTIMULATION) . 49 3.2.5 EXPERIMENTELLE PROTOKOLLE MIT INTAKTEN PRAEPARATEN . 50 4.0 ELEKTROPHORETISCHE UNTERSUCHUNGEN . 52 4.1 PROBENGEWINNUNG FUER DIE 2D GELELEKTROPHORESE . 52 4.2 ANFERTIGUNG DER GELE . 52 4.2.1 ISOELEKTRISCHE FOKUSSIERUNG / IEF (1. DIMENSION) . 52 4.2.2 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (2. 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ERGEBNISSE . 66 1.0 WURFCHARAKTERISTIKA . 66 1.0.1 GESCHLECHTERVERTEILUNG . 66 2.0 VERMINDERTE FERTILITAET DER HETXHET-VERPAARUNGEN . 67 3.0 MAKROSKOPISCHER PHAENOTYP DER CALDESMON-DEFIZIENTEN FOETEN . 68 3.0.1 TRIAS OMPHALOZELE, GESPALTENES XYPHOID UND HELLE LEBERAREALE IN KO FOETEN . 68 7 3.0.2 STATISTISCHE GUETE DER KO TRIAS ALS TESTKRITERIUM ZU VORHERSAGE DES GENOTYPS KO . 69 4.0 GEWICHTE DER HARNBLASEN . 70 5.0 KONTRAKTIONSEIGENSCHAFTEN CHEMISCH DEMEMBRANIERTER STREIFENPRAEPARATE FOETALER WT UND KNOCK-OUT MAEUSEHARNBLASEN AN E18,5 . 71 5.0.1 RUHE-DEHNUNGSKURVE . 71 6.0 VERGLEICH DER CALCIUMABHAENGIGEN UND -UNABHAENGIGEN MAXIMALKRAEFTE. 74 7.0 MLC20-PHOSPHORYLIERUNG . 76 8.0 VERLANGSAMTE RELAXATION CALDESMONDEFIZIENTER PRAEPARATE . 79 9.0 EINFLUSS VON CAM-ANTAGONISTEN UND EINES MLCK -INHIBITORS AUF DIE CA 2+ -AKTIVIERTE KONTRAKTION DEMEMBRANIERTER FETALER WT-HAMBLASEN.8O 10.0 KONTRAKTIONSEIGENSCHAFTEN INTAKTER HAMBLASEN-PRAEPARATE VON CALDESMONDEFIZIENTEN MAEUSEN . 83 10.1 TRANSMURALE ELEKTRISCHE FELDSTIMULATION (EFS) INTAKTER PRAEPARATE AN E18,5 . 83 10.2 RUHE-DEHNUNGSKURVE UND KURVE DER NOMINELLEN ISOMETRISCHEN MAXIMA . 84 10.3 REPRODUZIERBARKEIT DER DURCH 80MM KCL-INDUZIERTEN KONTRAKTION IN ABHAENGIGKEIT DER VORDEHNUNG . 85 10.4 EINFLUSS MUSKARINERGER STIMULATION . 86 10.4.1 KONZENTRATIONS-WIRKUNGSBEZIEHUNG MIT CARBACHOL . 86 10.4.4. 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