Der Par/aPKC-Komplex ist essentiell für die Integrität der Schlitzmembran sowie für die Funktion von Drosophila melanogaster Nephrozyten:
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
.
4
1.1
DIE
MENSCHLICHE
NIERE
.
4
1.1.1
DIE
FILTRATIONSBARRIERE
.
4
1.2
DAS
EXKRETORISCHE
SYSTEM
VON
DROSOPHILA
MELANOGASTER
.6
1.3
NEPHROZYTEN
ALS
MODELL
FUER
NIERENERKRANKUNGEN
.9
1.4
DAS
GENETISCHE
TOOLKIT
VON
DROSOPHILA
MELANOGASTER
.
11
1.4.1
DAS
GAL4/UAS-SYSTEM
.
11
1.4.2
RNA-INTERFERENZ
.
12
1.4.3
CRISPR-CAS9
SYSTEM
.
13
1.5
ZELLPOLARITAET
.
14
1.5.1
BAZOOKA/PAR3
.
17
1.5.2
PAR6
.
18
1.5.3
APKC
.
19
1.5.4
ETABLIERUNG
UND
AUFRECHTERHALTUNG
VON
POLARITAET
.
22
1.6
POLARITAET
IN
PODOZYTEN
.
24
1.7
ZIEL
DER
ARBEIT
.
27
2
MATERIALIEN
.
28
2.1
GERAETE
UND
MATERIALIEN
FUER
DIE
ARBEIT
MIT
DROSOPHILA
UND
ALLGEMEINE
LABORARBEIT
.
28
2.2
CHEMIKALIEN
UND
REAGENZIEN
.
29
2.3
MEDIEN
UND
LOESUNGEN
.
31
2.4
ANTIKOERPER
.
32
2.5
PRIMER,
PLASMIDE,
BAKTERIEN
.
33
2.6
MIKROSKOPE
UND
ZUBEHOER
.
34
2.7
SOFTWARE
.
34
2.8
FLIEGENSTAEMME
.
34
1
3
METHODEN
.
36
3.1
HALTUNG
VON
DROSOPHILA
MELANOGASTER
.
36
3.2
KREUZEN
DER
FLIEGENLINIEN
FUER
KNOCKDOWN-EXPERIMENTE
.
36
3.3
GENERIERUNG
VON
GU/DE-RNA-EXPRIMIERENDEN
FLIEGENLINIEN
FUER
KNOCKOUT
EXPERIMENTE
.
38
3.3.1
CRISPR
CAS
SGRNA
PLASMID
KLONIERUNG
.
38
3.3.2
TRANSFORMATION
CHEMISCH
KOMPETENTER
BAKTERIEN
.
39
3.3.3
ISOLATION
DER
PLASMID-DNA
.
39
3.3.4
KONTROLLE
DER
PLASMIDE
.
40
3.3.5
ISOLATION
VON
DNA
ZUR
INJEKTION
.
40
3.3.6
INJEKTION
DER
PLASMIDE
IN
DROSOPHILA
EMBRYONEN
.
41
3.3.7
KREUZUNG
UND
SCREENING
DER
NACHKOMMEN
.
41
3.4
KNOCKOUT-KREUZUNGEN
.
43
3.5
RETTUNGS-KREUZUNGEN
.
45
3.6
PRAEPARATION
VON
DROSOPHILA
MELANOGASTER
GIRLANDEN-NEPHROZYTEN
.
46
3.7
HITZEFIXIERUNG
UND
IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG
VON
GIRLANDEN
NEPHROZYTEN
.
46
3.8
FUNKTIONSANALYSE:
ANP-GFP-GFP-UPTAKE-ASSAY
.
47
3.9
QUANTIFIZIERUNG
UND
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
.
48
3.10
EINBETTUNG
VON
GIRLANDEN-NEPHROZYTEN
FUER
TRANSMISSIONSELEKTRONENMIKROSKOPISCHE
UNTERSUCHUNGEN
.
49
3.11
TRANSMISSIONSELEKTRONENMIKROSKOPIE:
QUANTIFIZIERUNG
UND
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
.
50
4
ERGEBNISSE
.
51
4.1
EXPRESSION
UND
LOKALISATION
DES
PAR/APKC-KOMPLEXES
IN
DROSOPHILA
NEPHROZYTEN.
51
4.2
KNOCKDOWN-EXPERIMENTE
.
52
4.2.1
KNOCKDOWN
VON
BAZOOKA
STOERT
DIE
LOKALISATION
VON
SNS,
PAR6
UND
APKC
.
53
4.2.2
KNOCKDOWN
VON
PAR6
STOERT
DIE
LOKALISATION
VON
SNS,
BAZOOKA
UND
APKC
.
54
4.2.3
KNOCKDOWN
VON
APKC
STOERT
HAUPTSAECHLICH
DIE
LOKALISATION
VON
SNS
.
55
4.3
PARLAPKC-KOMPIEX-KNOCKDOWN
BEEINTRAECHTIGT
DIE
FUNKTION
VON
DROSOPHILA
NEPHROZYTEN
.
57
2
4.4
UNTERSUCHUNG
DER
NEPHROZYTENMORPHOLOGIE
MITTELS
TRANSMISSIONS-ELEKTRONEN
MIKROSKOPIE
.
58
4.4.1
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
WILDTYP
.
59
4.4.2
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
BAZOOKA-KNOCKDOWN
.
60
4.4.3
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
PAR6-KNOCKDOWN
.
62
4.4.4
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
APKC-KNOCKDOWN
.
64
4.5
KNOCKOUT-EXPERIMENTE
.
65
4.5.1
KNOCKOUT
VON
BAZOOKA
NICHT
ERFOLGREICH
.
66
4.5.2
KNOCKOUT
VON
PAR6
STOERT
DIE
LOKALISATION
VON
SNS,
BAZ
UND
APKC
.
67
4.5.3
KNOCKOUT
VON
APKC
STOERT
DIE
LOKALISATION
VON
SNS
.
68
4.6
RETTUNG
DES
BAZOOKA-KNOCKC/OWN-PHAENOTYPS
.
69
5
DISKUSSION
.
72
5.1
IMMUNFLUORESZENZFAERBUNGEN
ALS
ERSTE
CHARAKTERISIERUNG
DER
EXPRESSION
DES
PAR/APKC-KOMPLEXES
IN
DROSOPHILA
NEPHROZYTEN
.
73
5.2
ANALYSE
DER
NEPHROZYTEN-FUNKTION
MITTELS
ANP-GFP-GFP-UPTAKE-ASSAY
.
75
5.3
UNTERSUCHUNG
DER
MORPHOLOGIE
AUF
ELEKTRONENMIKROSKOPISCHER
EBENE
.
77
5.4
VERIFIZIERUNG
DER
ERGEBNISSE
DURCH
CRISPR-CAS9
VERMITTELTEN
KNOCKOUT
.
79
5.5
RETTUNG
DES
BAZOOKA-KNOCKCFOIVN-PHAENOTYPS
.
81
5.6
FAZIT
UND
AUSBLICK
.
82
LITERATURVERZEICHNIS
.
83
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
.
95
TABELLENVERZEICHNIS
.
96
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
97
LEBENSLAUF
.
101
3 |
| adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
.
4
1.1
DIE
MENSCHLICHE
NIERE
.
4
1.1.1
DIE
FILTRATIONSBARRIERE
.
4
1.2
DAS
EXKRETORISCHE
SYSTEM
VON
DROSOPHILA
MELANOGASTER
.6
1.3
NEPHROZYTEN
ALS
MODELL
FUER
NIERENERKRANKUNGEN
.9
1.4
DAS
GENETISCHE
TOOLKIT
VON
DROSOPHILA
MELANOGASTER
.
11
1.4.1
DAS
GAL4/UAS-SYSTEM
.
11
1.4.2
RNA-INTERFERENZ
.
12
1.4.3
CRISPR-CAS9
SYSTEM
.
13
1.5
ZELLPOLARITAET
.
14
1.5.1
BAZOOKA/PAR3
.
17
1.5.2
PAR6
.
18
1.5.3
APKC
.
19
1.5.4
ETABLIERUNG
UND
AUFRECHTERHALTUNG
VON
POLARITAET
.
22
1.6
POLARITAET
IN
PODOZYTEN
.
24
1.7
ZIEL
DER
ARBEIT
.
27
2
MATERIALIEN
.
28
2.1
GERAETE
UND
MATERIALIEN
FUER
DIE
ARBEIT
MIT
DROSOPHILA
UND
ALLGEMEINE
LABORARBEIT
.
28
2.2
CHEMIKALIEN
UND
REAGENZIEN
.
29
2.3
MEDIEN
UND
LOESUNGEN
.
31
2.4
ANTIKOERPER
.
32
2.5
PRIMER,
PLASMIDE,
BAKTERIEN
.
33
2.6
MIKROSKOPE
UND
ZUBEHOER
.
34
2.7
SOFTWARE
.
34
2.8
FLIEGENSTAEMME
.
34
1
3
METHODEN
.
36
3.1
HALTUNG
VON
DROSOPHILA
MELANOGASTER
.
36
3.2
KREUZEN
DER
FLIEGENLINIEN
FUER
KNOCKDOWN-EXPERIMENTE
.
36
3.3
GENERIERUNG
VON
GU/DE-RNA-EXPRIMIERENDEN
FLIEGENLINIEN
FUER
KNOCKOUT
EXPERIMENTE
.
38
3.3.1
CRISPR
CAS
SGRNA
PLASMID
KLONIERUNG
.
38
3.3.2
TRANSFORMATION
CHEMISCH
KOMPETENTER
BAKTERIEN
.
39
3.3.3
ISOLATION
DER
PLASMID-DNA
.
39
3.3.4
KONTROLLE
DER
PLASMIDE
.
40
3.3.5
ISOLATION
VON
DNA
ZUR
INJEKTION
.
40
3.3.6
INJEKTION
DER
PLASMIDE
IN
DROSOPHILA
EMBRYONEN
.
41
3.3.7
KREUZUNG
UND
SCREENING
DER
NACHKOMMEN
.
41
3.4
KNOCKOUT-KREUZUNGEN
.
43
3.5
RETTUNGS-KREUZUNGEN
.
45
3.6
PRAEPARATION
VON
DROSOPHILA
MELANOGASTER
GIRLANDEN-NEPHROZYTEN
.
46
3.7
HITZEFIXIERUNG
UND
IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG
VON
GIRLANDEN
NEPHROZYTEN
.
46
3.8
FUNKTIONSANALYSE:
ANP-GFP-GFP-UPTAKE-ASSAY
.
47
3.9
QUANTIFIZIERUNG
UND
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
.
48
3.10
EINBETTUNG
VON
GIRLANDEN-NEPHROZYTEN
FUER
TRANSMISSIONSELEKTRONENMIKROSKOPISCHE
UNTERSUCHUNGEN
.
49
3.11
TRANSMISSIONSELEKTRONENMIKROSKOPIE:
QUANTIFIZIERUNG
UND
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
.
50
4
ERGEBNISSE
.
51
4.1
EXPRESSION
UND
LOKALISATION
DES
PAR/APKC-KOMPLEXES
IN
DROSOPHILA
NEPHROZYTEN.
51
4.2
KNOCKDOWN-EXPERIMENTE
.
52
4.2.1
KNOCKDOWN
VON
BAZOOKA
STOERT
DIE
LOKALISATION
VON
SNS,
PAR6
UND
APKC
.
53
4.2.2
KNOCKDOWN
VON
PAR6
STOERT
DIE
LOKALISATION
VON
SNS,
BAZOOKA
UND
APKC
.
54
4.2.3
KNOCKDOWN
VON
APKC
STOERT
HAUPTSAECHLICH
DIE
LOKALISATION
VON
SNS
.
55
4.3
PARLAPKC-KOMPIEX-KNOCKDOWN
BEEINTRAECHTIGT
DIE
FUNKTION
VON
DROSOPHILA
NEPHROZYTEN
.
57
2
4.4
UNTERSUCHUNG
DER
NEPHROZYTENMORPHOLOGIE
MITTELS
TRANSMISSIONS-ELEKTRONEN
MIKROSKOPIE
.
58
4.4.1
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
WILDTYP
.
59
4.4.2
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
BAZOOKA-KNOCKDOWN
.
60
4.4.3
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
PAR6-KNOCKDOWN
.
62
4.4.4
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
APKC-KNOCKDOWN
.
64
4.5
KNOCKOUT-EXPERIMENTE
.
65
4.5.1
KNOCKOUT
VON
BAZOOKA
NICHT
ERFOLGREICH
.
66
4.5.2
KNOCKOUT
VON
PAR6
STOERT
DIE
LOKALISATION
VON
SNS,
BAZ
UND
APKC
.
67
4.5.3
KNOCKOUT
VON
APKC
STOERT
DIE
LOKALISATION
VON
SNS
.
68
4.6
RETTUNG
DES
BAZOOKA-KNOCKC/OWN-PHAENOTYPS
.
69
5
DISKUSSION
.
72
5.1
IMMUNFLUORESZENZFAERBUNGEN
ALS
ERSTE
CHARAKTERISIERUNG
DER
EXPRESSION
DES
PAR/APKC-KOMPLEXES
IN
DROSOPHILA
NEPHROZYTEN
.
73
5.2
ANALYSE
DER
NEPHROZYTEN-FUNKTION
MITTELS
ANP-GFP-GFP-UPTAKE-ASSAY
.
75
5.3
UNTERSUCHUNG
DER
MORPHOLOGIE
AUF
ELEKTRONENMIKROSKOPISCHER
EBENE
.
77
5.4
VERIFIZIERUNG
DER
ERGEBNISSE
DURCH
CRISPR-CAS9
VERMITTELTEN
KNOCKOUT
.
79
5.5
RETTUNG
DES
BAZOOKA-KNOCKCFOIVN-PHAENOTYPS
.
81
5.6
FAZIT
UND
AUSBLICK
.
82
LITERATURVERZEICHNIS
.
83
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
.
95
TABELLENVERZEICHNIS
.
96
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
97
LEBENSLAUF
.
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| spelling | Lotz, Marie-Luise Leni Daria 1995- Verfasser (DE-588)1253521301 aut Der Par/aPKC-Komplex ist essentiell für die Integrität der Schlitzmembran sowie für die Funktion von Drosophila melanogaster Nephrozyten vorgelegt von Lotz, Marie-Luise Leni Daria aus Frankfurt am Main Münster 2021 103 Seiten Illustrationen txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Dissertation Westfälische Wilhelms-Universität Münster 2021 Beschränkt für den Austausch (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Westfälische Wilhelms-Universität Münster (DE-588)36175-6 dgg Münster (Westf) (DE-588)4040608-8 gnd uvp B:DE-101 application/pdf https://d-nb.info/1251524516/04 Inhaltsverzeichnis DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=033626624&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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