Analyse der Rolle inflammatorischer Signalwege auf zelluläre Reprogrammierung somatischer Zellen zu induzierten pluripotenten Stammzellen:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Bonn
[2021]
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | 107 Seiten Illustrationen, Diagramme 21 cm |
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Datensatz im Suchindex
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
7
1.
EINLEITUNG
13
1.1
PLURIPOTENTE
STAMMZELLEN
UND
ZELLULAERE
REPROGRAMMIERUNG
13
1.1.1
MODELLE
DER
ZELLULAEREN
REPROGRAMMIERUNG
15
1.1.2
QUANTIFIZIERUNG
DER
REPROGRAMMIERUNGSEFFIZIENZ
17
1.1.3
EINFLUSSFAKTOREN
AUF
DIE
REPROGRAMMIERUNGSEFFIZIENZ
18
1.1.4
DIREKTE
KONVERTIERUNG
20
1.1.5
REPROGRAMMIERUNG
ZELLULAERER
IDENTITAET
IN
VIVO
GEWEBEREGENERATION
UND
MALIGNE
TRANSFORMATION
20
1.2
INNATE
IMMUNITAET
21
1.2.1
INTERFERONE
21
1.2.2
DAS
PROTEASOM
UND
DAS
IMMUNPROTEASOM
24
1.2.3
INNATE
IMMUNITAET
UND
ZELLULAERE
REPROGRAMMIERUNG
26
1.2.3.1
DAS
UBIQUITIN-PROTEASOM-SYSTEM
UND
ZELLULAERE
REPROGRAMMIERUNG
27
1.2.3.2
REGULATION
VON
GEWEBEREGENERATION
UND
MALIGNER
TRANSFORMATION
DURCH
DAS
IMMUNSYSTEM
28
1.3
FRAGESTELLUNG
30
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
31
2.1
MATERIAL
31
2.1.1
ARBEITSGERAETE
31
2.1.2
ENZYME
UND
KITS
32
2.1.3
ANTIKOERPER
33
2.1.4PUFFER,
CHEMIKALIEN,
DNA-LEITERN,
ZELLKULTURREAGENZIEN
UND
KULTURMEDIEN
34
2.1.5
BAKTERIEN
UND
ZELLLINIEN
38
2.1.5.1
E.COLI,
STAMM
DH5A
38
2.1.5.2HEK
293T
ZELLEN
38
2.1.5.3
MURINE
EMBRYONALE
FIBROBLASTEN
38
2.1.5.4
PRIMAERE
MURINE
NEURALE
RADIALGLIA-STAMMZELLEN
39
2.1.5.5
MURINE
EMBRYONALE
STAMMZELLEN
40
4
2.1.6
PLASMIDE
40
2.1.7
OLIGONUKLEOTIDE
41
2.2
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
42
2.2.1
CHEMISCHE
TRANSFORMATION
VON
E.COLI
42
2.2.2
PRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
43
2.2.3
RESTRIKTIONSVERDAU
VON
PLASMID-DNA
43
2.2.4
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
43
2.2.5
BESTIMMUNG
DER
KONZENTRATION
UND
BEURTEILUNG
DER
REINHEIT
VON
DNA
UND
RNA
43
2.2.6
ISOLIERUNG
UND
REINIGUNG
VON
ZELLULAERER
RNA
43
2.2.7
REVERSE
TRANSKRIPTION
VON
RNA
44
2.2.8
QUANTIFIZIERUNG
VON
CDNA
MITTELS
QRT-PCR
44
2.2.9
GLOBALE
GENEXPRESSIONSANALYSE
MITTELS
MICROARRAY
45
2.3
ZELLBIOLOGISCHE
METHODEN
45
2.3.1
ZELLZAHLBESTIMMUNG
45
2.3.2
KRYOKONSERVIERUNG
UND
AUFTAUEN
VON
ZELLEN
46
2.3.3
ISOLATION
VON
PRIMAEREN
MURINEN
EMBRYONALEN
FIBROBLASTEN
46
2.3.4
KULTIVIERUNG
MURINER
EMBRYONALER
FIBROBLASTEN
47
2.3.5
KULTIVIERUNG
VON
HEK293T
ZELLEN
47
2.3.6
KULTIVIERUNG
MURINER
NEURALER
RADIALGLIA-STAMMZELLEN
48
2.3.7
GENERIERUNG
VON
ASTROGLIALEN
ZELLEN
MIT
OCT4-GFP
REPORTER
AUS
RG-NSCS
48
2.3.8
KULTIVIERUNG
MURINER
EMBRYONALER
STAMMZELLEN
49
2.3.9
AUSWAHL
DER
REPROGRAMMIERUNGSMETHODE
49
2.3.10
HERSTELLUNG
LENTIVIRALER
PARTIKEL
51
2.3.11
KALKULATION
DER
TRANSDUKTIONSSEFFIZIENZ
51
2.3.12
TRANSDUKTION
UND
ZELLULAERE
REPROGRAMMIERUNG
VON
MEFS
UND
ASTROGLIALEN
ZELLEN
52
2.3.12.1
TRANSDUKTION
VON
MEFS
MIT DEM
REPROGRAMMIERUNGSVEKTOR
UND
DEM
TRANSAKTIVATORVEKTOR
52
2.3.12.2
ZELLULAERE
REPROGRAMMIERUNG
VON
MEFS
53
5
2.3.12.3
TRANSDUKTION
VON
ASTROGLIALEN
ZELLEN
MIT
DEM
REPROGRAMMIERUNGSVEKTOR
UND
DEM
TRANSAKTIVATORVEKTOR
54
2.3.12.4
ZELLULAERE
REPROGRAMMIERUNG
VON
ASTROGLIALEN
ZELLEN
54
2.3.13
QUANTIFIZIERUNG
DER
REPROGRAMMIERUNGSEFFIZIENZ
54
2.3.13.1
QUANTIFIZIERUNG
VON
GFP-POSITIVEN
KOLONIEN
54
2.3.13.2
QUANTIFIZIERUNG
VON
SSEA1/PECAM-1
DOPPELPOSITIVEN
ZELLEN
MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
54
2.3.14
BESTIMMUNG
DER
IFN-Y
KONZENTRATION
IN
ZELLKULTURUEBERSTAENDEN
55
2.3.15IMMUNFLUORESZENZ
55
2.4
STATISTISCHE
ANALYSE
56
2.5
SOFTWARE
56
3.
ERGEBNISSE
57
3.1
IDENTIFIZIERUNG
VON
ZYTOKINEN
MIT
EINFLUSS
AUF
DIE
ZELLULAERE
REPROGRAMMIERUNG
57
3.1.1
WIRKUNG
VON
IFN-SS1,
IFN-Y,
IL-1
SS,
IL-6
UND
TNF-A
AUF
DIE
ZELLULAERE
REPROGRAMMIERUNG
57
3.1.2
WIRKUNG
VON
IFN-Y
AUF
DIE
ZELLULAERE
REPROGRAMMIERUNG
VON
ASTROGLIALEN
ZELLEN
60
3.1.2.1
GENERIERUNG
VON
ASTROGLIALEN
ZELLEN
MIT
OCT4-GFP
REPORTER
AUS
RG-NSCS
62
3.1.3
WIRKUNG
VON
IFN-Y
AUF
DIE
ZELLULAERE
REPROGRAMMIERUNG
VON
ASTROGLIALEN
ZELLEN
62
3.1.4
ANALYSE
VON
ZELLKULTURUEBERSTAND
AUF
IFN-Y
63
3.2
ZELLULAERE
REPROGRAMMIERUNG
VON
INTERFERONREZEPTOR
DOPPEL-
KNOCKOUT
MEFS
65
3.3
UNTERSUCHUNG
AUF
MOEGLICHE
MOLEKULARE
MEDIATOREN
DES
DURCH
IFN-Y
INDUZIERTEN
EFFEKTS
MITTELS
GLOBALER
GENEXPRESSIONSANALYSE
68
3.4
ANALYSE
DER
EXPRESSION
VON
PROTEASOM-
UND
IMMUNPROTEASOM-SPEZIFISCHEN
UNTEREINHEITEN
WAEHREND
DER
ZELLULAEREN
REPROGRAMMIERUNG
72
6
3.5
ZELLULAERE
REPROGRAMMIERUNG
VON
IMMUNPROTEASOM
EINZEL-
KNOCKOUT
MEFS
UND
TRIPEL-KNOCKOUT
MEFS
74
4.
DISKUSSION
76
4.1
WIRKUNG
VON
IFN-Y
AUF
DIE
ZELLULAERE
REPROGRAMMIERUNG
76
4.2
ANWENDBARKEIT
UND
TRANSLATION
DER
ERGEBNISSE
80
5.
ZUSAMMENFASSUNG
83
6.
ABBILDUNGSZEICHNIS
85
7.
TABELLENVERZEICHNIS
88
8.
LITERATURVERZEICHNIS
89
9.
DANKSAGUNG
107
|
| adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
7
1.
EINLEITUNG
13
1.1
PLURIPOTENTE
STAMMZELLEN
UND
ZELLULAERE
REPROGRAMMIERUNG
13
1.1.1
MODELLE
DER
ZELLULAEREN
REPROGRAMMIERUNG
15
1.1.2
QUANTIFIZIERUNG
DER
REPROGRAMMIERUNGSEFFIZIENZ
17
1.1.3
EINFLUSSFAKTOREN
AUF
DIE
REPROGRAMMIERUNGSEFFIZIENZ
18
1.1.4
DIREKTE
KONVERTIERUNG
20
1.1.5
REPROGRAMMIERUNG
ZELLULAERER
IDENTITAET
IN
VIVO\
GEWEBEREGENERATION
UND
MALIGNE
TRANSFORMATION
20
1.2
INNATE
IMMUNITAET
21
1.2.1
INTERFERONE
21
1.2.2
DAS
PROTEASOM
UND
DAS
IMMUNPROTEASOM
24
1.2.3
INNATE
IMMUNITAET
UND
ZELLULAERE
REPROGRAMMIERUNG
26
1.2.3.1
DAS
UBIQUITIN-PROTEASOM-SYSTEM
UND
ZELLULAERE
REPROGRAMMIERUNG
27
1.2.3.2
REGULATION
VON
GEWEBEREGENERATION
UND
MALIGNER
TRANSFORMATION
DURCH
DAS
IMMUNSYSTEM
28
1.3
FRAGESTELLUNG
30
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
31
2.1
MATERIAL
31
2.1.1
ARBEITSGERAETE
31
2.1.2
ENZYME
UND
KITS
32
2.1.3
ANTIKOERPER
33
2.1.4PUFFER,
CHEMIKALIEN,
DNA-LEITERN,
ZELLKULTURREAGENZIEN
UND
KULTURMEDIEN
34
2.1.5
BAKTERIEN
UND
ZELLLINIEN
38
2.1.5.1
E.COLI,
STAMM
DH5A
38
2.1.5.2HEK
293T
ZELLEN
38
2.1.5.3
MURINE
EMBRYONALE
FIBROBLASTEN
38
2.1.5.4
PRIMAERE
MURINE
NEURALE
RADIALGLIA-STAMMZELLEN
39
2.1.5.5
MURINE
EMBRYONALE
STAMMZELLEN
40
4
2.1.6
PLASMIDE
40
2.1.7
OLIGONUKLEOTIDE
41
2.2
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
42
2.2.1
CHEMISCHE
TRANSFORMATION
VON
E.COLI
42
2.2.2
PRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
43
2.2.3
RESTRIKTIONSVERDAU
VON
PLASMID-DNA
43
2.2.4
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
43
2.2.5
BESTIMMUNG
DER
KONZENTRATION
UND
BEURTEILUNG
DER
REINHEIT
VON
DNA
UND
RNA
43
2.2.6
ISOLIERUNG
UND
REINIGUNG
VON
ZELLULAERER
RNA
43
2.2.7
REVERSE
TRANSKRIPTION
VON
RNA
44
2.2.8
QUANTIFIZIERUNG
VON
CDNA
MITTELS
QRT-PCR
44
2.2.9
GLOBALE
GENEXPRESSIONSANALYSE
MITTELS
MICROARRAY
45
2.3
ZELLBIOLOGISCHE
METHODEN
45
2.3.1
ZELLZAHLBESTIMMUNG
45
2.3.2
KRYOKONSERVIERUNG
UND
AUFTAUEN
VON
ZELLEN
46
2.3.3
ISOLATION
VON
PRIMAEREN
MURINEN
EMBRYONALEN
FIBROBLASTEN
46
2.3.4
KULTIVIERUNG
MURINER
EMBRYONALER
FIBROBLASTEN
47
2.3.5
KULTIVIERUNG
VON
HEK293T
ZELLEN
47
2.3.6
KULTIVIERUNG
MURINER
NEURALER
RADIALGLIA-STAMMZELLEN
48
2.3.7
GENERIERUNG
VON
ASTROGLIALEN
ZELLEN
MIT
OCT4-GFP
REPORTER
AUS
RG-NSCS
48
2.3.8
KULTIVIERUNG
MURINER
EMBRYONALER
STAMMZELLEN
49
2.3.9
AUSWAHL
DER
REPROGRAMMIERUNGSMETHODE
49
2.3.10
HERSTELLUNG
LENTIVIRALER
PARTIKEL
51
2.3.11
KALKULATION
DER
TRANSDUKTIONSSEFFIZIENZ
51
2.3.12
TRANSDUKTION
UND
ZELLULAERE
REPROGRAMMIERUNG
VON
MEFS
UND
ASTROGLIALEN
ZELLEN
52
2.3.12.1
TRANSDUKTION
VON
MEFS
MIT DEM
REPROGRAMMIERUNGSVEKTOR
UND
DEM
TRANSAKTIVATORVEKTOR
52
2.3.12.2
ZELLULAERE
REPROGRAMMIERUNG
VON
MEFS
53
5
2.3.12.3
TRANSDUKTION
VON
ASTROGLIALEN
ZELLEN
MIT
DEM
REPROGRAMMIERUNGSVEKTOR
UND
DEM
TRANSAKTIVATORVEKTOR
54
2.3.12.4
ZELLULAERE
REPROGRAMMIERUNG
VON
ASTROGLIALEN
ZELLEN
54
2.3.13
QUANTIFIZIERUNG
DER
REPROGRAMMIERUNGSEFFIZIENZ
54
2.3.13.1
QUANTIFIZIERUNG
VON
GFP-POSITIVEN
KOLONIEN
54
2.3.13.2
QUANTIFIZIERUNG
VON
SSEA1/PECAM-1
DOPPELPOSITIVEN
ZELLEN
MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
54
2.3.14
BESTIMMUNG
DER
IFN-Y
KONZENTRATION
IN
ZELLKULTURUEBERSTAENDEN
55
2.3.15IMMUNFLUORESZENZ
55
2.4
STATISTISCHE
ANALYSE
56
2.5
SOFTWARE
56
3.
ERGEBNISSE
57
3.1
IDENTIFIZIERUNG
VON
ZYTOKINEN
MIT
EINFLUSS
AUF
DIE
ZELLULAERE
REPROGRAMMIERUNG
57
3.1.1
WIRKUNG
VON
IFN-SS1,
IFN-Y,
IL-1
SS,
IL-6
UND
TNF-A
AUF
DIE
ZELLULAERE
REPROGRAMMIERUNG
57
3.1.2
WIRKUNG
VON
IFN-Y
AUF
DIE
ZELLULAERE
REPROGRAMMIERUNG
VON
ASTROGLIALEN
ZELLEN
60
3.1.2.1
GENERIERUNG
VON
ASTROGLIALEN
ZELLEN
MIT
OCT4-GFP
REPORTER
AUS
RG-NSCS
62
3.1.3
WIRKUNG
VON
IFN-Y
AUF
DIE
ZELLULAERE
REPROGRAMMIERUNG
VON
ASTROGLIALEN
ZELLEN
62
3.1.4
ANALYSE
VON
ZELLKULTURUEBERSTAND
AUF
IFN-Y
63
3.2
ZELLULAERE
REPROGRAMMIERUNG
VON
INTERFERONREZEPTOR
DOPPEL-
KNOCKOUT
MEFS
65
3.3
UNTERSUCHUNG
AUF
MOEGLICHE
MOLEKULARE
MEDIATOREN
DES
DURCH
IFN-Y
INDUZIERTEN
EFFEKTS
MITTELS
GLOBALER
GENEXPRESSIONSANALYSE
68
3.4
ANALYSE
DER
EXPRESSION
VON
PROTEASOM-
UND
IMMUNPROTEASOM-SPEZIFISCHEN
UNTEREINHEITEN
WAEHREND
DER
ZELLULAEREN
REPROGRAMMIERUNG
72
6
3.5
ZELLULAERE
REPROGRAMMIERUNG
VON
IMMUNPROTEASOM
EINZEL-
KNOCKOUT
MEFS
UND
TRIPEL-KNOCKOUT
MEFS
74
4.
DISKUSSION
76
4.1
WIRKUNG
VON
IFN-Y
AUF
DIE
ZELLULAERE
REPROGRAMMIERUNG
76
4.2
ANWENDBARKEIT
UND
TRANSLATION
DER
ERGEBNISSE
80
5.
ZUSAMMENFASSUNG
83
6.
ABBILDUNGSZEICHNIS
85
7.
TABELLENVERZEICHNIS
88
8.
LITERATURVERZEICHNIS
89
9.
DANKSAGUNG
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