Biologische Wirkweise von Cuprizon und seinen Derivaten:
Gespeichert in:
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| Veröffentlicht: |
Aachen
[2020]
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PUBLIKATION
/
VORVEROEFFENTLICHUNG
............................................................................................
III
INHALTSVERZEICHNIS
....................................................................................................................
V
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.........................................................................................................
VII
1.
EINLEITUNG
.................................................................................................................
1
1.1.
MULTIPLE
SKLEROSE
.......................................................................................................
1
1.1.1.
OXIDATIVER
STRESS
UND
DAS
NRF2-SYSTEM
..................................................................
3
1.1.2.
DEMYELINISIERUNG
.....................................................................................................
7
1.1.3.
OLIGODENDROZYTEN
.....................................................................................................
8
1.1.4.
NEUROPATHOLOGIE
DER
MS
........................................................................................
11
1.2.
CUPRIZON
..................................................................................................................
13
1.3.
GESCHICHTE
DES
CUPRIZONS
......................................................................................
14
1.4.
CUPRIZON-MAUS-MODELL
............................................................................................
15
1.4.1.
UNTERSCHIEDE
UND
GEMEINSAMKEITEN
VON
MS
UND
DEM
CUPRIZON-MAUS-MODELL
17
1.5.
WIRKMECHANISMUS
VON
CUPRIZON
...........................................................................
20
1.5.1.
INHIBITION
KUPFERABHAENGIGER
SYSTEME
....................................................................
20
1.5.2.
INHIBITION
ANTIOXIDATIVER
ENZYME
............................................................................
22
1.5.3.
ZUSAMMENFASSUNG
.................................................................................................
24
2.
ZIELSETZUNG
...........................................................................................................
25
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
........................................................................................
26
3.1.
SUPEROXIDDISMUTASE
AKTIVITAETSASSAY
......................................................................
26
3.1.1.
REKONSTITUTION
DER
BOVINEN
SOD
...........................................................................
26
3.1.2. PRINZIP
DES
SOD-ASSAYS
........................................................................................
27
3.1.3.
DURCHFUEHRUNG
DES
ASSAYS
.......................................................................................
28
3.2.
DIREKTE
HEMMUNG
ISOLIERTER
BOVINER
SOD
DURCH
CUPRIZON
.................................
31
3.3.
ZELLKULTUR
..................................................................................................................
33
3.3.1.
ZELLEN
......................................................................................................................
33
3.3.2.
TRANSFEKTION
DER
OLINEU-ZELLEN
.............................................................................
34
3.3.3. LAGERUNG
UND
AUFTAUEN
DER
ZELLEN
.......................................................................
35
3.3.4.
KULTIVIEREN
UND
PASSAGIEREN
DER
ZELLEN
................................................................
35
3.3.5.
ZELLZAHLBESTIMMUNG
...............................................................................................
36
3.4.
GENEXPRESSIONSANALYSE
NACH
CUPRIZONBEHANDLUNG
.............................................
37
3.4.1.
BEHANDLUNG
DER
ZELLEN
...........................................................................................
37
3.4.2.
RNA-ISOLATION
..........................................................................................................
37
3.4.3.
SPEKTRALPHOTOMETRISCHE
RNA-KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
UND
VERDUENNUNG
....
38
3.4.4.
REVERSE
TRANSKRIPTION
............................................................................................
38
3.4.5.
POLYMERASEKETTENREAKTION
UND
GELELEKTROPHORESE
..............................................
39
3.4.6.
QUANTITATIVE
REAL
TIME
PCR
.................................................................................
40
3.5.
AUSWIRKUNGEN
VON
CUPRIZON
AUF
DIE
SOD-AKTIVITAET
VON
OLINEU-ZELLEN
...............
42
3.6.
SOD-AKTIVITAETSASSAY
AUS
DEM
CUPRIZON-MAUS-MODELL
........................................
43
3.7.
DIREKTE
HEMMUNG
ISOLIERTER,
BOVINER
SOD
DURCH
BIMPI
......................................
44
3.8.
TOXIZITAETSTEST
MIT
BIMPI
..........................................................................................45
3.8.1.
FUNKTIONSWEISE
DES
CELLTITER-BLUE
CELL
VIABILITY
ASSAYS
.....................................45
3.8.2.
DURCHFUEHRUNG
DES
CELLTITER-BLUE
CELL
VIABILITY
ASSAYS
.......................................46
3.9.
BESTIMMUNG
DES
GESAMTPROTEINGEHALTES
.............................................................
47
3.10.
DARSTELLUNG
UND
AUSWERTUNG
DER
DATEN
.................................................................
48
4.
ERGEBNISSE
.............................................................................................................49
4.1.
SOD-AKTIVITAET
BOVINER
SOD
NACH
BEHANDLUNG
MIT
CUPRIZON
................................
49
4.2.
SOD-AKTIVITAET
VON
ZELLEN
NACH
BEHANDLUNG
MIT
CUPRIZON
....................................
51
4.3.
QUANTITATIVE
GENEXPRESSIONSANALYSE
...................................................................
53
4.4.
CUPRIZONWIRKUNG
AUF
DIE
SOD
IN
VIVO
...................................................................
55
4.5.
SOD-AKTIVITAET
BOVINER
SOD
NACH
BEHANDLUNG
MIT
BIMPI
.....................................
56
4.6.
CTB-ASSAY
NACH
EXPOSITION
DURCH
BIMPI
.............................................................
58
5.
DISKUSSION
.............................................................................................................
60
5.1.
CUPRIZON
ALS
KUPFERCHELATOR
....................................................................................
60
5.2.
ENZYMHEMMUNG
DURCH
CUPRIZON
-
DIE
SOD-HEMMUNG
.....................................
64
5.3.
CUPRIZON
UND
OXIDATIVER
STRESS
..............................................................................
66
5.4.
CUPRIZON
UND
DIE
UNFOLDED
PROTEIN
RESPONSE
(UPR)
............................................
67
5.5.
CUPRIZON
IN
DER
ZELLKULTUR
.......................................................................................
68
5.6.
BIMPI
-
DAS
*BESSERE
*
CUPRIZON
............................................................................
70
5.7.
SCHLUSSFOLGERUNG
....................................................................................................
73
5.8.
AUSBLICK
....................................................................................................................
74
6.
ZUSAMMENFASSUNG
...............................................................................................
75
7.
LITERATURVERZEICHNIS
..............................................................................................
77
8.
ANHANG
....................................................................................................................
88
8.1.
VERBRAUCHSMATERIAL
..................................................................................................
88
8.2.
SOFTWARE
...................................................................................................................
89
8.3.
GERAETE
......................................................................................................................
89
8.4.
CHEMIKALIEN
............................................................................................................
91
8.5.
ZELLKULTURMEDIEN
......................................................................................................
94
8.6.
PUFFER
........................................................................................................................
95
8.7.
LOESUNGEN
.................................................................................................................
97
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
...........................................................................................................
99
TABELLENVERZEICHNIS
..............................................................................................................
100
DANKSAGUNG
.........................................................................................................................
101
ERKLAERUNG
§
5
ABS.
1
ZUR
DATENAUFBEWAHRUNG
....................................................................
103
EIDESSTATTLICHE
ERKLAERUNG
GEMAESS
§
5
ABS.
(1)
UND
§
11
ABS.
(3)
.......................................
105
LEBENSLAUF
............................................................................................................................
104
VI
|
| adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
PUBLIKATION
/
VORVEROEFFENTLICHUNG
.
III
INHALTSVERZEICHNIS
.
V
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
VII
1.
EINLEITUNG
.
1
1.1.
MULTIPLE
SKLEROSE
.
1
1.1.1.
OXIDATIVER
STRESS
UND
DAS
NRF2-SYSTEM
.
3
1.1.2.
DEMYELINISIERUNG
.
7
1.1.3.
OLIGODENDROZYTEN
.
8
1.1.4.
NEUROPATHOLOGIE
DER
MS
.
11
1.2.
CUPRIZON
.
13
1.3.
GESCHICHTE
DES
CUPRIZONS
.
14
1.4.
CUPRIZON-MAUS-MODELL
.
15
1.4.1.
UNTERSCHIEDE
UND
GEMEINSAMKEITEN
VON
MS
UND
DEM
CUPRIZON-MAUS-MODELL
17
1.5.
WIRKMECHANISMUS
VON
CUPRIZON
.
20
1.5.1.
INHIBITION
KUPFERABHAENGIGER
SYSTEME
.
20
1.5.2.
INHIBITION
ANTIOXIDATIVER
ENZYME
.
22
1.5.3.
ZUSAMMENFASSUNG
.
24
2.
ZIELSETZUNG
.
25
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
26
3.1.
SUPEROXIDDISMUTASE
AKTIVITAETSASSAY
.
26
3.1.1.
REKONSTITUTION
DER
BOVINEN
SOD
.
26
3.1.2. PRINZIP
DES
SOD-ASSAYS
.
27
3.1.3.
DURCHFUEHRUNG
DES
ASSAYS
.
28
3.2.
DIREKTE
HEMMUNG
ISOLIERTER
BOVINER
SOD
DURCH
CUPRIZON
.
31
3.3.
ZELLKULTUR
.
33
3.3.1.
ZELLEN
.
33
3.3.2.
TRANSFEKTION
DER
OLINEU-ZELLEN
.
34
3.3.3. LAGERUNG
UND
AUFTAUEN
DER
ZELLEN
.
35
3.3.4.
KULTIVIEREN
UND
PASSAGIEREN
DER
ZELLEN
.
35
3.3.5.
ZELLZAHLBESTIMMUNG
.
36
3.4.
GENEXPRESSIONSANALYSE
NACH
CUPRIZONBEHANDLUNG
.
37
3.4.1.
BEHANDLUNG
DER
ZELLEN
.
37
3.4.2.
RNA-ISOLATION
.
37
3.4.3.
SPEKTRALPHOTOMETRISCHE
RNA-KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
UND
VERDUENNUNG
.
38
3.4.4.
REVERSE
TRANSKRIPTION
.
38
3.4.5.
POLYMERASEKETTENREAKTION
UND
GELELEKTROPHORESE
.
39
3.4.6.
QUANTITATIVE
REAL
TIME
PCR
.
40
3.5.
AUSWIRKUNGEN
VON
CUPRIZON
AUF
DIE
SOD-AKTIVITAET
VON
OLINEU-ZELLEN
.
42
3.6.
SOD-AKTIVITAETSASSAY
AUS
DEM
CUPRIZON-MAUS-MODELL
.
43
3.7.
DIREKTE
HEMMUNG
ISOLIERTER,
BOVINER
SOD
DURCH
BIMPI
.
44
3.8.
TOXIZITAETSTEST
MIT
BIMPI
.45
3.8.1.
FUNKTIONSWEISE
DES
CELLTITER-BLUE
CELL
VIABILITY
ASSAYS
.45
3.8.2.
DURCHFUEHRUNG
DES
CELLTITER-BLUE
CELL
VIABILITY
ASSAYS
.46
3.9.
BESTIMMUNG
DES
GESAMTPROTEINGEHALTES
.
47
3.10.
DARSTELLUNG
UND
AUSWERTUNG
DER
DATEN
.
48
4.
ERGEBNISSE
.49
4.1.
SOD-AKTIVITAET
BOVINER
SOD
NACH
BEHANDLUNG
MIT
CUPRIZON
.
49
4.2.
SOD-AKTIVITAET
VON
ZELLEN
NACH
BEHANDLUNG
MIT
CUPRIZON
.
51
4.3.
QUANTITATIVE
GENEXPRESSIONSANALYSE
.
53
4.4.
CUPRIZONWIRKUNG
AUF
DIE
SOD
IN
VIVO
.
55
4.5.
SOD-AKTIVITAET
BOVINER
SOD
NACH
BEHANDLUNG
MIT
BIMPI
.
56
4.6.
CTB-ASSAY
NACH
EXPOSITION
DURCH
BIMPI
.
58
5.
DISKUSSION
.
60
5.1.
CUPRIZON
ALS
KUPFERCHELATOR
.
60
5.2.
ENZYMHEMMUNG
DURCH
CUPRIZON
-
DIE
SOD-HEMMUNG
.
64
5.3.
CUPRIZON
UND
OXIDATIVER
STRESS
.
66
5.4.
CUPRIZON
UND
DIE
UNFOLDED
PROTEIN
RESPONSE
(UPR)
.
67
5.5.
CUPRIZON
IN
DER
ZELLKULTUR
.
68
5.6.
BIMPI
-
DAS
*BESSERE
*
CUPRIZON
.
70
5.7.
SCHLUSSFOLGERUNG
.
73
5.8.
AUSBLICK
.
74
6.
ZUSAMMENFASSUNG
.
75
7.
LITERATURVERZEICHNIS
.
77
8.
ANHANG
.
88
8.1.
VERBRAUCHSMATERIAL
.
88
8.2.
SOFTWARE
.
89
8.3.
GERAETE
.
89
8.4.
CHEMIKALIEN
.
91
8.5.
ZELLKULTURMEDIEN
.
94
8.6.
PUFFER
.
95
8.7.
LOESUNGEN
.
97
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
.
99
TABELLENVERZEICHNIS
.
100
DANKSAGUNG
.
101
ERKLAERUNG
§
5
ABS.
1
ZUR
DATENAUFBEWAHRUNG
.
103
EIDESSTATTLICHE
ERKLAERUNG
GEMAESS
§
5
ABS.
(1)
UND
§
11
ABS.
(3)
.
105
LEBENSLAUF
.
104
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