"Die Rolle von Myosin Regulatory Light Chain 3 (MRLC3) und Apoptosis Antagonizing Transcription Factor (AATF) in der Niere":
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Köln
[2021]
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| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | 71 Blätter Illustrationen, Diagramme 21 cm |
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
...............................................................................................................
9
1
EINLEITUNG
................................................................................................................................
10
1.1
DIE
GLOMERULAERE
FILTRATIONSBARRIERE
.................................................................................
10
1.2
PODOZYTEN
.........................................................................................................................
12
1.3
PHOSPHO-PEPTIDE-BINDING
SCREEN
....................................................................................
16
1.4
APOPTOSIS
ANTAGONIZING
TRANSKRIPTIONS
FACTOR
AATF
.................................................
18
1.5
MYOSIN
REGULATORY
LIGHT
CHAIN
3,
MRLC3
......................................................................
21
1.6
ZIELE
DER
ARBEIT
...............................................................................................................
24
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.......................................................................................................
25
2.1
MATERIAL
............................................................................................................................
25
2.1.1
ZELLKULTUR
...................................................................................................................
25
2.1.1.1
VERWENDETE
ZELLLINIEN
.......................................................................................
25
2.1.2
TRANSFEKTION
..............................................................................................................
25
2.1.2.1
TRANSFEKTION
MIT
CALCIUMPHOSPHAT
..................................................................
25
2.1.3
KLONIERUNG
................................................................................................................
26
2.1.3.1
PCR
(POLYMERASE-KETTEN-REAKTION)
................................................................
26
2.1.3.2
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
...............................................................................
26
2.1.3.3
ENZYMATISCHER
VERDAU
.....................................................................................
26
2.1.3.4
LIGATION
..............................................................................................................
26
2.1.3.5
TRANSFORMATION
...................................................................................................
26
2.1.3.6
BAKTERIENKULTUR
...................................................................................................
26
2.1.3.7
MINI-STET
DNA
PRAEPARATION
...........................................................................
27
2.1.3.8
MIDI
UND
MEGA
DNA
PRAEPARATION
.....................................................................
27
2.1.3.9
VERWENDETE
VEKTOREN
........................................................................................
27
2.1.4
IMMUNPRAEZIPITATIONEN
(IP)
.......................................................................................
27
2.1.5
SDS-PAGE
(SODIUMDODECYLSULFAT-POLYACRYLAMID
-
GELELEKTROPHORESE)
UND
IMMUNOBLOT
(WESTERN
BLOT)
.................................................................................................
27
2.1.6
PRAEPARATION
DER
MAEUSEGLOMERULI
.............................................................................
28
2.1.7
IMMUNFLUORESZENZSTAINING
VON
MAEUSEGLOMERULI
..................................................
29
2.1.8
IN-SITU-HYBRIDISIERUNG:
PARAFFIN-SCHNITTE,
EMBRYONALE
NIERENKULTUR
...................
29
2.1.9
CAENORHABDITIS
ELEGANS
...........................................................................................
30
2.2
METHODEN
.........................................................................................................................
31
2.2.1
KLONIERUNG
................................................................................................................
31
2.2.1.1
POLYMERASEKETTENREAKTION
(PCR)
....................................................................
31
2.2.1.2
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
................................................................................
32
2.2.1.3
ENZYMATISCHER
VERDAU
.....................................................................................
32
2.2.1.4
LIGATION
VON
DNA-ABSCHNITTEN
IN
ZIELVEKTOREN
............................................
32
2.2.1.5
TRANSFORMATION
CHEMOKOMPETENTER
E.COLI
BAKTERIEN
(DH10)
........................
33
2.2.1.6
DNA
PRAEPARATIONEN
..........................................................................................
33
2.2.2
IN-SITU-HYBRIDISIERUNG:
SCHNITTE,
EMBRYONALE
NIERENKULTUR
..............................
34
2.2.3
BALLISTISCHE
TRANSFORMATION
VON
C.
ELEGANS
MIT
AATF
UND
MLC-4
.....................
35
2.2.3.1
PRAEPARATION
DER
WUERMER
VOR
DEM
BESCHUSS
....................................................
36
2.2.3.2
BELADUNG
DER
GOLDPARTIKEL
MIT
DNA
...............................................................
36
2.2.4
ZELLBIOLOGISCHE
METHODEN
........................................................................................
37
2.2.4.1
KULTIVIERUNG
UND
PASSAGIERUNG
VON
SAEUGERZELLEN
...........................................
37
2.2.4.2
TRANSFEKTION
NACH
DER
CALCIUM-PHOSPHAT-METHODE
........................................
37
2.2.5
CO-IMMUNPRAEZIPITATION
............................................................................................
38
2.2.5.1
ZELLEMTE
UND
ZELLLYSE
........................................................................................
38
2.2.5.2
CO-IMMUNPRAEZIPITATION
....................................................................................
38
2.2.6
SDS-PAGE
...............................................................................................................
38
2.2.7
WESTERN
BLOT
.............................................................................................................
39
2.2.7.1
IMMUNDETEKTION
.................................................................................................
39
2.2.8
PRAEPARATION
UND
STAINING
VON
GLOMERULI
AUS
MAEUSENIEREN
...................................
40
2.2.8.1
PRAEPARATION
DER
GLOMERULI
DER
MAUS
...............................................................
40
2.2.8.2
STAINING
DER
GLOMERULI
DER
MAUS
.....................................................................
41
3
ERGEBNISSE
..............................................................................................................................
42
3.1
AATF
UND
MRLC3-MRNA
EXPRESSION
IN
EMBRYONALEN
MAEUSENIEREN
......................
42
3.2
KLONIERUNG
DER
REPORTERKONSTRUKTE
AUS
GENOMISCHER
DNA
VON
C.
ELEGANS
..............
43
3.2.1
KOLOKALISATION
VON
C.
ELEGANS
MRLC3
UND
AATF
IN
VIVO
..................................
44
3.3
INTERAKTION
VON
AATF/MRLC3
MIT
SCHLITZMEMBRANPROTEINEN
...................................
45
3.3.1
INTERAKTION
VON
AATF
MIT
FULL-LENGTH
KONSTRUKTEN
VON
NEPH
1-3
.......................
46
7
3.3.2
AATF
KO-IMMUNPRAEZIPITIERT
MIT
DEN
ZYTOSOLISCHEN
TEILEN
DER
SCHLITZMEMBRANPROTEINE
NACH
UEBEREXPRESSION
IN
HEK
293-T-ZELLEN
.............................
47
3.3.3
MRLC3
IMMUNPRAEZIPITIERT
MIT
DEN
ZYTOSOLISCHEN
TEILEN
VON
SCHLITZMEMBRANPROTEINEN
NACH
UEBEREXPRESSION
IN
293
T
ZELLEN
.....................................
48
3.4
PHOSPHORYLIERUNGSSTATUS
VON
MRLC3
WIRD
DURCH
KO-EXPRESSION
VON
AATF
BEEINFLUSST
.................................................................................................................................
50
3.5
DIE
BEHANDLUNG
MIT
DEM
RHO
KINASE
INHIBITOR
Y-27632
FUHRT
ZU
EINER
VERAENDERTEN
LOKALISATION
VON
NEPHRIN
IM
GLOMERULUM
DER
MAUS
...........................................................
51
4
DISKUSSION
..............................................................................................................................
55
5
ZUSAMMENFASSUNG
.................................................................................................................
62
6
LITERATURVERZEICHNIS
..............................................................................................................
63
7
LEBENSLAUF
..............................................................................................................................
70
8
|
| adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
9
1
EINLEITUNG
.
10
1.1
DIE
GLOMERULAERE
FILTRATIONSBARRIERE
.
10
1.2
PODOZYTEN
.
12
1.3
PHOSPHO-PEPTIDE-BINDING
SCREEN
.
16
1.4
APOPTOSIS
ANTAGONIZING
TRANSKRIPTIONS
FACTOR
AATF
.
18
1.5
MYOSIN
REGULATORY
LIGHT
CHAIN
3,
MRLC3
.
21
1.6
ZIELE
DER
ARBEIT
.
24
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.
25
2.1
MATERIAL
.
25
2.1.1
ZELLKULTUR
.
25
2.1.1.1
VERWENDETE
ZELLLINIEN
.
25
2.1.2
TRANSFEKTION
.
25
2.1.2.1
TRANSFEKTION
MIT
CALCIUMPHOSPHAT
.
25
2.1.3
KLONIERUNG
.
26
2.1.3.1
PCR
(POLYMERASE-KETTEN-REAKTION)
.
26
2.1.3.2
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
.
26
2.1.3.3
ENZYMATISCHER
VERDAU
.
26
2.1.3.4
LIGATION
.
26
2.1.3.5
TRANSFORMATION
.
26
2.1.3.6
BAKTERIENKULTUR
.
26
2.1.3.7
MINI-STET
DNA
PRAEPARATION
.
27
2.1.3.8
MIDI
UND
MEGA
DNA
PRAEPARATION
.
27
2.1.3.9
VERWENDETE
VEKTOREN
.
27
2.1.4
IMMUNPRAEZIPITATIONEN
(IP)
.
27
2.1.5
SDS-PAGE
(SODIUMDODECYLSULFAT-POLYACRYLAMID
-
GELELEKTROPHORESE)
UND
IMMUNOBLOT
(WESTERN
BLOT)
.
27
2.1.6
PRAEPARATION
DER
MAEUSEGLOMERULI
.
28
2.1.7
IMMUNFLUORESZENZSTAINING
VON
MAEUSEGLOMERULI
.
29
2.1.8
IN-SITU-HYBRIDISIERUNG:
PARAFFIN-SCHNITTE,
EMBRYONALE
NIERENKULTUR
.
29
2.1.9
CAENORHABDITIS
ELEGANS
.
30
2.2
METHODEN
.
31
2.2.1
KLONIERUNG
.
31
2.2.1.1
POLYMERASEKETTENREAKTION
(PCR)
.
31
2.2.1.2
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
.
32
2.2.1.3
ENZYMATISCHER
VERDAU
.
32
2.2.1.4
LIGATION
VON
DNA-ABSCHNITTEN
IN
ZIELVEKTOREN
.
32
2.2.1.5
TRANSFORMATION
CHEMOKOMPETENTER
E.COLI
BAKTERIEN
(DH10)
.
33
2.2.1.6
DNA
PRAEPARATIONEN
.
33
2.2.2
IN-SITU-HYBRIDISIERUNG:
SCHNITTE,
EMBRYONALE
NIERENKULTUR
.
34
2.2.3
BALLISTISCHE
TRANSFORMATION
VON
C.
ELEGANS
MIT
AATF
UND
MLC-4
.
35
2.2.3.1
PRAEPARATION
DER
WUERMER
VOR
DEM
BESCHUSS
.
36
2.2.3.2
BELADUNG
DER
GOLDPARTIKEL
MIT
DNA
.
36
2.2.4
ZELLBIOLOGISCHE
METHODEN
.
37
2.2.4.1
KULTIVIERUNG
UND
PASSAGIERUNG
VON
SAEUGERZELLEN
.
37
2.2.4.2
TRANSFEKTION
NACH
DER
CALCIUM-PHOSPHAT-METHODE
.
37
2.2.5
CO-IMMUNPRAEZIPITATION
.
38
2.2.5.1
ZELLEMTE
UND
ZELLLYSE
.
38
2.2.5.2
CO-IMMUNPRAEZIPITATION
.
38
2.2.6
SDS-PAGE
.
38
2.2.7
WESTERN
BLOT
.
39
2.2.7.1
IMMUNDETEKTION
.
39
2.2.8
PRAEPARATION
UND
STAINING
VON
GLOMERULI
AUS
MAEUSENIEREN
.
40
2.2.8.1
PRAEPARATION
DER
GLOMERULI
DER
MAUS
.
40
2.2.8.2
STAINING
DER
GLOMERULI
DER
MAUS
.
41
3
ERGEBNISSE
.
42
3.1
AATF
UND
MRLC3-MRNA
EXPRESSION
IN
EMBRYONALEN
MAEUSENIEREN
.
42
3.2
KLONIERUNG
DER
REPORTERKONSTRUKTE
AUS
GENOMISCHER
DNA
VON
C.
ELEGANS
.
43
3.2.1
KOLOKALISATION
VON
C.
ELEGANS
MRLC3
UND
AATF
IN
VIVO
.
44
3.3
INTERAKTION
VON
AATF/MRLC3
MIT
SCHLITZMEMBRANPROTEINEN
.
45
3.3.1
INTERAKTION
VON
AATF
MIT
FULL-LENGTH
KONSTRUKTEN
VON
NEPH
1-3
.
46
7
3.3.2
AATF
KO-IMMUNPRAEZIPITIERT
MIT
DEN
ZYTOSOLISCHEN
TEILEN
DER
SCHLITZMEMBRANPROTEINE
NACH
UEBEREXPRESSION
IN
HEK
293-T-ZELLEN
.
47
3.3.3
MRLC3
IMMUNPRAEZIPITIERT
MIT
DEN
ZYTOSOLISCHEN
TEILEN
VON
SCHLITZMEMBRANPROTEINEN
NACH
UEBEREXPRESSION
IN
293
T
ZELLEN
.
48
3.4
PHOSPHORYLIERUNGSSTATUS
VON
MRLC3
WIRD
DURCH
KO-EXPRESSION
VON
AATF
BEEINFLUSST
.
50
3.5
DIE
BEHANDLUNG
MIT
DEM
RHO
KINASE
INHIBITOR
Y-27632
FUHRT
ZU
EINER
VERAENDERTEN
LOKALISATION
VON
NEPHRIN
IM
GLOMERULUM
DER
MAUS
.
51
4
DISKUSSION
.
55
5
ZUSAMMENFASSUNG
.
62
6
LITERATURVERZEICHNIS
.
63
7
LEBENSLAUF
.
70
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