Verfügbarkeit: Bedeutung des Aktin- und Myosinbindeproteins Caldesmon für die pränatale Entwicklung der Maus

Bedeutung des Aktin- und Myosinbindeproteins Caldesmon für die pränatale Entwicklung der Maus:

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Bibliographische Detailangaben
1. Verfasser:	Frohn, Marina 1990- (VerfasserIn)
Format:	Abschlussarbeit Buch
Sprache:	German
Veröffentlicht:	Köln [2021]
Schlagworte:	Harnblase Pränatale Entwicklung Bindeproteine Wurfgröße Actin Hochschulschrift
Online-Zugang:	Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis
Beschreibung:	135 Seiten Illustrationen, Diagramme 21 cm

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adam_text	INHALTSVERZEICHNIS 1 EINLEITUNG .......................................................................................................................................... 7 1.1 CALDESMON ................................................................................................................................. 7 1.1.1 STRUKTURELLE BESCHREIBUNG DES CALDESMONS .......................................................................... 7 1.1.2 DIE FUNKTION VON CALDESMON ................................................................................................. 9 1.1.3 CALDESMON WAEHREND DER SCHWANGERSCHAFT .......................................................................... 13 1.1.4 GENERIERUNG GENMODIFIZIERTER MAUSLINIEN ZUR ANALYSE DER IN VIVO FUNKTION VON CALDESMON 14 1.1.5 YYCALDESMON-MODELLE ANDERER ARBEITSGRUPPEN ................................................................. 16 1.2 DIE MAUS (MUS MUSCULUS) ..................................................................................................... 17 1.2.1 DIE FORTPFLANZUNG ................................................................................................................. 17 1.2.2 WICHTIGE ENTWICKLUNGSSTADIEN IN DER EMBRYONALENTWICKLUNG DER MAUS ............................. 18 1.3 PHYSIOLOGISCHE UND PATHOLOGISCHE BAUCHWANDHERNIEN ................................................. 21 1.3.1 DIE PHYSIOLOGISCHE NABELHERNIE .......................................................................................... 21 1.3.2 PATHOLOGIE DER BAUCHWANDDEFEKTE ...................................................................................... 21 1.4 DIE MURINE LUNGE ................................................................................................................... 22 1.4.1 DIE ENTWICKLUNG DER MURINEN LUNGE .................................................................................... 22 1.4.2 ANATOMIE DER MURINEN LUNGE .............................................................................................. 23 1.5 DIE MURINE HARNBLASE ............................................................................................................ 24 1.5.1 DIE ENTWICKLUNG DER MURINEN HARNBLASE ............................................................................. 24 1.5.2 ANATOMIE DER HARNBLASE ..................................................................................................... 24 1.6 ZIELE ........................................................................................................................................... 26 2 MATERIAL UND METHODEN ........................................................................................................... 27 2.1 MATERIAL .................................................................................................................................... 27 2.1.1 MOLEKULARGEWICHTS- UND BASENPAARMARKER ........................................................................ 27 2.1.2 PRIMAERANTIKOERPER .................................................................................................................. 27 2.1.3 SEKUNDAERANTIKOERPER ............................................................................................................. 28 2.1.4 OLIGONUKLEOTIDE FUER PCRS ZUR GENOTYPISIERUNG ................................................................... 28 2.1.5 OLIGONUKLEOTIDE FUER REALTIME PCRS ...................................................................................... 28 2.1.6 KITS UND ASSAYS ..................................................................................................................... 29 2.1.7 GERAETE .................................................................................................................................. 29 2.1.8 CHEMIKALIEN ......................................................................................................................... 30 2.1.9 EINWEGMATERIALIEN ............................................................................................................... 32 6 2.2 METHODEN ................................................................................................................................ 32 2.2.1 GEWEBEPRAEPARATION UND HISTOLOGIE ..................................................................................... 32 2.2.1.1 VERSUCHSTIERE ................................................................................................................... 32 2.2.1.2 GETIMTE VERPAARUNG ........................................................................................................ 33 2.2.1.3 TIERPRAEPARATION ................................................................................................................ 33 2.2.1.4 PARAFFINEINBETTUNG UND HISTOLOGISCHE FAERBUNGEN ........................................................... 34 2.2.1.5 ASSERVIERUNG VON GEWEBEN ............................................................................................ 40 2.2.2 BIOCHEMISCHE METHODEN ZUR PROTEINCHARAKTERISIERUNG ...................................................... 41 2.2.2.1 HOMOGENISIERUNG VON GEWEBEN ..................................................................................... 41 2.2.2.2 BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION NACH BRADFORD (BRADFORD, 1976) ....................... 41 2.2.2.3 SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE) .......................................................... 42 2.2.2.4 WESTERN-BLOT-ANALYSE ...................................................................................................... 44 2.2.2.5 ERSTELLUNG EINER CALDESMON-VERDUENNUNGSREIHE ALS INTERNER STANDARD ........................... 45 2.2.3 GENETISCHE METHODEN .......................................................................................................... 45 2.2.3.1 ISOLIERUNG VON GENOMISCHER DNA AUS MAEUSESCHWAENZEN ................................................ 45 2.2.3.2 DNA-AMPLIFIZIERUNG DURCH POLYMERASE-KETTENREAKTION (PCR) ....................................... 46 2.2.3.3 AGAROSE-GELELEKTROPHORESE ............................................................................................ 47 2.2.3.4 RNA-ISOLIERUNG ................................................................................................................. 48 2.2.3.5 PRUEFUNG VON QUALITAET UND QUANTITAET DER ISOLIERTEN RNA ................................................ 49 2.2.3.6 CDNA-ERSTSTRANGSYNTHESE (RT-PCR) ................................................................................. 50 2.2.3.7 REAL-TIME-PCR ................................................................................................................. 50 2.2.4 GROESSENBESTIMMUNG ANHAND VON PARAFFIN-SCHNITTEN ........................................................... 52 2.2.4.1 SCHEITEL-STEISS-LAENGE UND THORAX-DURCHMESSER .............................................................. 52 2.2.4.2 VERMESSUNG DER HARNBLASE ............................................................................................. 52 2.2.5 STATISTISCHE ANALYSE .............................................................................................................. 53 3 ERGEBNISSE ...................................................................................................................................... 54 3.1 DER CA/DL-KNOCKOUT ................................................................................................................ 54 3.1.1 ERSTCHARAKTERISIERUNG - EIN GROBER MAKROSKOPISCHER UEBERBLICK ....................................... 54 3.1.2 HISTOLOGISCHE UEBERSICHT GESAMTER EMBRYO .......................................................................... 56 3.1.3 ECKDATEN DER FL GENERATION AUS HETEROZYGOTEN-VERPAARUNGEN ........................................ 62 3.1.3.1 WURFGROESSE ....................................................................................................................... 63 3.1.3.2 GENOTYPVERTEILUNG .......................................................................................................... 64 3.1.3.3 GESCHLECHTSVERTEILUNG ..................................................................................................... 66 3.1.3.4 GEWICHTSENTWICKLUNG WAEHREND DER EMBRYONAL- UND FETALPERIODE ............................... 69 3.1.3.5 SCHEITEL-STEISS-LAENGE UND THORAXDURCHMESSER DER CA/DL-FETEN ..................................... 71 3.1.3.6 PATHOLOGISCHE OMPHALOZELE AN DEN TAGEN 17.5 BIS 19.5 DPC ......................................... 72 3.1.3.7 INTRAUTERINE VERTEILUNG DER FETEN ................................................................................... 75 3.1.4 LUNGE 75 7 3.1.4.1 HISTOLOGISCHE SCHNITTE - ALVEOLARSTRUKTUR DER CA/DL-LUNGE AN SCHWANGERSCHAFTSTAG 18.5 DPC ........................................................................................................................... 75 3.1.4.2 AUSWERTUNG DER ALVEOLARSTRUKTUR .................................................................................... 77 3.1.4.3 REAL-TIME PCR VON FETALEN LUNGEN 18.5 DPC .................................................................. 78 3.1.5 HARNBLASE (VESICA URINARIA) .................................................................................................. 80 3.1.5.1 HISTOLOGIE ......................................................................................................................... 80 3.1.5.2 GEWICHTSVERHAELTNIS DER HARNBLASE................................................................................... 85 3.1.5.3 SEMIQUANTITATIVE BESTIMMUNG DER CALDESMON-EXPRESSION IN DER HARNBLASE ............... 86 3.1.5.3.1 FETALE HARNBLASE AN 18.5 DPC ................................................................................. 86 3.1.5.3.2 HARNBLASE ADULT (6-8 WOCHEN) .............................................................................. 87 3.1.5.3.3 VERGLEICH DER CALDESMON-EXPRESSION ZWISCHEN FETALER UND ADULTER HARNBLASE .... 87 3.1.5.4 REGULATORISCHE PROTEINE DER FETALEN HARNBLASENKONTRAKTION AN SCHWANGERSCHAFTSTAG 18.5 DPC ...................................................................................................................... 88 3.1.6 WEITERE HISTOLOGISCHE AUFFAELLIGKEITEN .................................................................................. 89 3.2 DELETION DER N-TERMINALEN MYOSINBINDESTELLE IN DER MAUS (DEXZCAD) ...................... 90 3.2.1 POSTNATALE BEOBACHTUNGEN ZU DEN DEX2CAD-MAUSLINIEN ................................................... 90 3.2.2 DEX2CAD-LIN E 356 POSTNATAL ............................................................................................... 91 3.2.2.1 WURFGROESSE ..................................................................................................................... 91 3.2.2.2 GENOTYP UND GESCHLECHTSVERTEILUNG ............................................................................ 93 3.2.3 DEX2CAD-L N E 603 POSTNATAL ............................................................................................... 94 3.2.3.1 WURFGROESSE ..................................................................................................................... 95 3.2.3.2 GENOTYP UND GESCHLECHTSVERTEILUNG ............................................................................ 96 4 DISKUSSION ...................................................................................................................................... 98 4.1 PHAENOTYPISCHE CHARAKTERISTIKA DER CO/DL-NACHKOMMEN .............................................. 98 4.1.1 CALDESMON IST ESSENZIELL ZUR ETABLIERUNG UND ZUM ERHALT DER SCHWANGERSCHAFT .................. 98 4.1.2 ERFOLGREICHER NACHWEIS DER CALDL ^ -FETEN .......................................................................... 99 4.1.3 WACHSTUMSRETARDIERUNG DER CO/DL A -FETEN ...................................................................... 101 4.1.4 PATHOLOGISCHE UMBILIKALHERNIE ALS DEUTLICHES PHAENOTYPISCHES MERKMAL DER CALDL / -FETEN 102 4.1.5 LUNGENHYPOPLASIE .............................................................................................................. 104 4.1.5.1 KEINE GEGENREGULATION IN DER EXPRESSION DER UNTERSUCHTEN GENE ............................... 105 4.1.6 HARNBLASE........................................................................................................................... 106 4.1.6.1 CAWL-ABLATION BEDINGT KEINE GRAVIERENDEN HISTOLOGISCHEN VERAENDERUNGEN BEI DER HARNBLASE 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......................................................................................................................................... 133 8.1 ABBILDUNGSVERZEICHNIS ......................................................................................................... 133 8.2 TABELLENVERZEICHNIS ............................................................................................................. 134 9 LEBENSLAUF. ................................................................................................................................... 135
adam_txt	INHALTSVERZEICHNIS 1 EINLEITUNG . 7 1.1 CALDESMON . 7 1.1.1 STRUKTURELLE BESCHREIBUNG DES CALDESMONS . 7 1.1.2 DIE FUNKTION VON CALDESMON . 9 1.1.3 CALDESMON WAEHREND DER SCHWANGERSCHAFT . 13 1.1.4 GENERIERUNG GENMODIFIZIERTER MAUSLINIEN ZUR ANALYSE DER IN VIVO FUNKTION VON CALDESMON 14 1.1.5 YYCALDESMON-MODELLE" ANDERER ARBEITSGRUPPEN . 16 1.2 DIE MAUS (MUS MUSCULUS) . 17 1.2.1 DIE FORTPFLANZUNG . 17 1.2.2 WICHTIGE ENTWICKLUNGSSTADIEN IN DER EMBRYONALENTWICKLUNG DER MAUS . 18 1.3 PHYSIOLOGISCHE UND PATHOLOGISCHE BAUCHWANDHERNIEN . 21 1.3.1 DIE PHYSIOLOGISCHE NABELHERNIE . 21 1.3.2 PATHOLOGIE DER BAUCHWANDDEFEKTE . 21 1.4 DIE MURINE LUNGE . 22 1.4.1 DIE ENTWICKLUNG DER MURINEN LUNGE . 22 1.4.2 ANATOMIE DER MURINEN LUNGE . 23 1.5 DIE MURINE HARNBLASE . 24 1.5.1 DIE ENTWICKLUNG DER MURINEN HARNBLASE . 24 1.5.2 ANATOMIE DER HARNBLASE . 24 1.6 ZIELE . 26 2 MATERIAL UND METHODEN . 27 2.1 MATERIAL . 27 2.1.1 MOLEKULARGEWICHTS- UND BASENPAARMARKER . 27 2.1.2 PRIMAERANTIKOERPER . 27 2.1.3 SEKUNDAERANTIKOERPER . 28 2.1.4 OLIGONUKLEOTIDE FUER PCRS ZUR GENOTYPISIERUNG . 28 2.1.5 OLIGONUKLEOTIDE FUER REALTIME PCRS . 28 2.1.6 KITS UND ASSAYS . 29 2.1.7 GERAETE . 29 2.1.8 CHEMIKALIEN . 30 2.1.9 EINWEGMATERIALIEN . 32 6 2.2 METHODEN . 32 2.2.1 GEWEBEPRAEPARATION UND HISTOLOGIE . 32 2.2.1.1 VERSUCHSTIERE . 32 2.2.1.2 GETIMTE VERPAARUNG . 33 2.2.1.3 TIERPRAEPARATION . 33 2.2.1.4 PARAFFINEINBETTUNG UND HISTOLOGISCHE FAERBUNGEN . 34 2.2.1.5 ASSERVIERUNG VON GEWEBEN . 40 2.2.2 BIOCHEMISCHE METHODEN ZUR PROTEINCHARAKTERISIERUNG . 41 2.2.2.1 HOMOGENISIERUNG VON GEWEBEN . 41 2.2.2.2 BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION NACH BRADFORD (BRADFORD, 1976) . 41 2.2.2.3 SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE) . 42 2.2.2.4 WESTERN-BLOT-ANALYSE . 44 2.2.2.5 ERSTELLUNG EINER CALDESMON-VERDUENNUNGSREIHE ALS INTERNER STANDARD . 45 2.2.3 GENETISCHE METHODEN . 45 2.2.3.1 ISOLIERUNG VON GENOMISCHER DNA AUS MAEUSESCHWAENZEN . 45 2.2.3.2 DNA-AMPLIFIZIERUNG DURCH POLYMERASE-KETTENREAKTION (PCR) . 46 2.2.3.3 AGAROSE-GELELEKTROPHORESE . 47 2.2.3.4 RNA-ISOLIERUNG . 48 2.2.3.5 PRUEFUNG VON QUALITAET UND QUANTITAET DER ISOLIERTEN RNA . 49 2.2.3.6 CDNA-ERSTSTRANGSYNTHESE (RT-PCR) . 50 2.2.3.7 REAL-TIME-PCR . 50 2.2.4 GROESSENBESTIMMUNG ANHAND VON PARAFFIN-SCHNITTEN . 52 2.2.4.1 SCHEITEL-STEISS-LAENGE UND THORAX-DURCHMESSER . 52 2.2.4.2 VERMESSUNG DER HARNBLASE . 52 2.2.5 STATISTISCHE ANALYSE . 53 3 ERGEBNISSE . 54 3.1 DER CA/DL-KNOCKOUT . 54 3.1.1 ERSTCHARAKTERISIERUNG - 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