Freisetzung von GAPDH-, FABP3- und TNNI3-mRNA bei Patienten mit Eingriffen am offenen Herzen im frühen postoperativen Verlauf:
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ABBILDUNGSVERZEICHNIS
6
TABELLENVERZEICHNIS
7
FORMELVERZEICHNIS
7
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
8
1
EINLEITUNG
11
1.1
KORONARE
HERZKRANKHEIT
11
1.1.1
KARDIALE
BIOMARKER
13
1.1.2
KARDIALES
TROPONIN
I
UND
TROPONIN
T
1
4
1.1.3
FATTY-ACID-BINDING
PROTEIN
3
(FABP3)
16
1.2
GLYCERINALDEHYD-3-PHOSPHAT-DEHYDROGENASE
(GAPDH)
16
1.3
RNA
18
1.3.1
DEFINITION
VON
RNA
&
MRNA
18
1.3.2
SCHUTZMECHANISMEN
DER
MRNA
19
1.3.3
ABBAU
DER
MRNA
20
1.4
EXTRAZELLULAERE
VESIKEL
23
1.5
STAND
DER
FORSCHUNG
25
1.6
ZIEL
DER
ARBEIT
26
2
MATERIAL
UND
METHODEN
27
2.1
GERAETE
UND
VERBRAUCHSMATERIALIEN
27
2.1.1
GERAETE
27
2.1.2
KOMMERZIELLE
KITS
28
2.1.3
CHEMIKALIEN
28
2.1.4
VERBRAUCHSMATERIAL
29
2.1.5
PROGRAMME
30
2.2
PROBENGEWINNUNG
31
2.2.1
RNA
STABILITAETSVERSUCH
32
2.3
ISOLIERUNG
ZIRKULIERENDER
NUKLEINSAEUREN
AUS
PLASMA
32
2.3.1
MACHEREY-NAGEL
-
RNA
IL-KIT
32
2.3.2
EXIQON
-
MIRCURY
RNA
ISOLATION
KIT
-
BIOFLUIDS
33
2.3.3
PHENOLEXTRAKTION
34
2.4
ISOLATION
EXTRAZELLULAERER
VESIKEL
AUS
PLASMA
34
2.4.1
PRAEPARATION
VON
EXOSOMALER
RNA
35
3
2.5
PROBENQUANTIFIZIERUNG
35
2.5.1
NANODROPLOOO-MESSUNG
35
2.5.2
QUANTUSYY
FLUOROMETER-MESSUNG
(PROMEGA)
36
2.6
CDNA
SYNTHESE
37
2.7
MULTIPLEX
TAQMAN
PCR
38
2.7.1
PRIMERDESIGN
38
2.7.2
PLATTENBELEGUNG
UND
PROGRAMMIERUNG
DES
BIORAD
IQ5
39
2.8
NACHWEIS
VON
FABP3
MITTELS
ELISA
40
2.9
AUFBAU
EINER
STANDARDKURVE
ZUR
ABSOLUTEN
QUANTIFIKATION
40
2.9.1
BERECHNUNG
DER
FRAGMENTGROESSEN
UND
KOPIENZAHL
DER
ZIELGENE
41
2.9.2
GELELEKTROPHORESE
UND
AUFREINIGUNG
DER
NESTED
FRAGMENTE
MITTELS
QIAEX-GEL
EXTRACTION
KIT
II
43
2.9.3
AUFBAU
DER
VERDUENNUNGSREIHE
UND
EINSATZ
IN
DIE
PCR
45
2.9.4
BERECHNUNG
DER
REGRESSIONSGERADEN
UND
DES
KORRELATIONSKOEFFIZIENTEN
45
2.10
BERECHNUNG
DER
HALBWERTSZEIT
47
2.11
ETHIKVOTUM
48
3
ERGEBNISSE
49
3.1
STANDARDKURVEN
UND
GELELEKTROPHORESE
DER
AMPLIFIZIERTEN
FRAGMENTE
49
3.2
RNA
STABILITAETSVERSUCH
51
3.3
VORVERSUCHE
ZUR
ISOLIERUNG
ZIRKULIERENDER
NUKLEINSAEUREN
52
3.4
ERGEBNISSE
DER
EINZELNEN
PATIENTEN
53
3.4.1
PATIENT
3
56
3.4.2
PATIENT
4
57
3.4.3
PATIENT
8
58
3.4.4
PATIENT
9
59
3.4.5
PATIENT
15
60
3.4.6
PATIENT
16
61
3.4.7
PATIENT
20
62
3.5
BERECHNETE
HALBWERTSZEITEN
62
4
4
DISKUSSION
65
4.1
METHODISCHE
HERAUSFORDERUNG
66
4.1.1
PROBENGEWINNUNG
66
4.1.2
ISOLIERUNG
DER
EXTRAZELLULAEREN
VESIKEL
67
4.1.3
MRNA
NACHWEIS
69
4.1.3.1
TNNI3
70
4.1.3.2
FABP3
72
4.1.3.3
GAPDH
72
4.2 DISKUSSION
DER
ERGEBNISSE
73
4.2.1
ERGEBNISSE
DER
EINZELNEN
PATIENTEN
73
4.2.2
HALBWERTSZEIT
79
4.3
KLINISCHE
BEDEUTUNG
80
5
ZUSAMMENFASSUNG
83
6
LITERATURVERZEICHNIS
85
7
ANHANG
97
7.1
NICHT
VERWENDETE
PATIENTENGRAFIKEN
97
7.1.1
PATIENT
12
97
7.1.2
PATIENT
13
97
7.1.3
PATIENT
14
98
7.1.4
PATIENT
17
98
7.1.5
PATIENT
18
98
7.1.6
PATIENT
19
99
7.2
VERZEICHNIS
DER
AKADEMISCHEN
LEHRER
100
7.3
DANKSAGUNGEN
101
5
|
| adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
6
TABELLENVERZEICHNIS
7
FORMELVERZEICHNIS
7
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
8
1
EINLEITUNG
11
1.1
KORONARE
HERZKRANKHEIT
11
1.1.1
KARDIALE
BIOMARKER
13
1.1.2
KARDIALES
TROPONIN
I
UND
TROPONIN
T
1
4
1.1.3
FATTY-ACID-BINDING
PROTEIN
3
(FABP3)
16
1.2
GLYCERINALDEHYD-3-PHOSPHAT-DEHYDROGENASE
(GAPDH)
16
1.3
RNA
18
1.3.1
DEFINITION
VON
RNA
&
MRNA
18
1.3.2
SCHUTZMECHANISMEN
DER
MRNA
19
1.3.3
ABBAU
DER
MRNA
20
1.4
EXTRAZELLULAERE
VESIKEL
23
1.5
STAND
DER
FORSCHUNG
25
1.6
ZIEL
DER
ARBEIT
26
2
MATERIAL
UND
METHODEN
27
2.1
GERAETE
UND
VERBRAUCHSMATERIALIEN
27
2.1.1
GERAETE
27
2.1.2
KOMMERZIELLE
KITS
28
2.1.3
CHEMIKALIEN
28
2.1.4
VERBRAUCHSMATERIAL
29
2.1.5
PROGRAMME
30
2.2
PROBENGEWINNUNG
31
2.2.1
RNA
STABILITAETSVERSUCH
32
2.3
ISOLIERUNG
ZIRKULIERENDER
NUKLEINSAEUREN
AUS
PLASMA
32
2.3.1
MACHEREY-NAGEL
-
RNA
IL-KIT
32
2.3.2
EXIQON
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MIRCURY
RNA
ISOLATION
KIT
-
BIOFLUIDS
33
2.3.3
PHENOLEXTRAKTION
34
2.4
ISOLATION
EXTRAZELLULAERER
VESIKEL
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PLASMA
34
2.4.1
PRAEPARATION
VON
EXOSOMALER
RNA
35
3
2.5
PROBENQUANTIFIZIERUNG
35
2.5.1
NANODROPLOOO-MESSUNG
35
2.5.2
QUANTUSYY
FLUOROMETER-MESSUNG
(PROMEGA)
36
2.6
CDNA
SYNTHESE
37
2.7
MULTIPLEX
TAQMAN
PCR
38
2.7.1
PRIMERDESIGN
38
2.7.2
PLATTENBELEGUNG
UND
PROGRAMMIERUNG
DES
BIORAD
IQ5
39
2.8
NACHWEIS
VON
FABP3
MITTELS
ELISA
40
2.9
AUFBAU
EINER
STANDARDKURVE
ZUR
ABSOLUTEN
QUANTIFIKATION
40
2.9.1
BERECHNUNG
DER
FRAGMENTGROESSEN
UND
KOPIENZAHL
DER
ZIELGENE
41
2.9.2
GELELEKTROPHORESE
UND
AUFREINIGUNG
DER
NESTED
FRAGMENTE
MITTELS
QIAEX-GEL
EXTRACTION
KIT
II
43
2.9.3
AUFBAU
DER
VERDUENNUNGSREIHE
UND
EINSATZ
IN
DIE
PCR
45
2.9.4
BERECHNUNG
DER
REGRESSIONSGERADEN
UND
DES
KORRELATIONSKOEFFIZIENTEN
45
2.10
BERECHNUNG
DER
HALBWERTSZEIT
47
2.11
ETHIKVOTUM
48
3
ERGEBNISSE
49
3.1
STANDARDKURVEN
UND
GELELEKTROPHORESE
DER
AMPLIFIZIERTEN
FRAGMENTE
49
3.2
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STABILITAETSVERSUCH
51
3.3
VORVERSUCHE
ZUR
ISOLIERUNG
ZIRKULIERENDER
NUKLEINSAEUREN
52
3.4
ERGEBNISSE
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EINZELNEN
PATIENTEN
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PATIENT
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57
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PATIENT
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3.4.6
PATIENT
16
61
3.4.7
PATIENT
20
62
3.5
BERECHNETE
HALBWERTSZEITEN
62
4
4
DISKUSSION
65
4.1
METHODISCHE
HERAUSFORDERUNG
66
4.1.1
PROBENGEWINNUNG
66
4.1.2
ISOLIERUNG
DER
EXTRAZELLULAEREN
VESIKEL
67
4.1.3
MRNA
NACHWEIS
69
4.1.3.1
TNNI3
70
4.1.3.2
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72
4.1.3.3
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72
4.2 DISKUSSION
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ERGEBNISSE
73
4.2.1
ERGEBNISSE
DER
EINZELNEN
PATIENTEN
73
4.2.2
HALBWERTSZEIT
79
4.3
KLINISCHE
BEDEUTUNG
80
5
ZUSAMMENFASSUNG
83
6
LITERATURVERZEICHNIS
85
7
ANHANG
97
7.1
NICHT
VERWENDETE
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97
7.1.1
PATIENT
12
97
7.1.2
PATIENT
13
97
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PATIENT
14
98
7.1.4
PATIENT
17
98
7.1.5
PATIENT
18
98
7.1.6
PATIENT
19
99
7.2
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