Organisation von Pma1 und verschiedenen Hitzeschockproteinen unter Säureeinfluss in der Plasmamembran von Saccharomyces cerevisiae:
Gespeichert in:
1. Verfasser: | |
---|---|
Format: | Abschlussarbeit Buch |
Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
Münster
2021
|
Schlagworte: | |
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---|---|
adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
....................................................................................................................................
1
1.1
SACCHAROMYCES
CEREVISIAE
..................................................................................................
1
1.1.1
VERWENDUNG
...............................................................................................................
1
1.1.2
VERMEHRUNG
...............................................................................................................
1
1.1.3
PLASMAMEMBRAN
........................................................................................................
2
1.1.4
PLASMA
MEMBRAN
H
+
-ATPASE
(PMAL)
........................................................................
2
1.1.5
HITZESCHOCKPROTEINE
YROL,
YRO2
UND
MRHL
..............................................................
3
1.2
INTERNE
TOTALREFLEKTIONSFLUORESZENZMIKROSKOPIE
(TIRF)
...................................................
3
1.3
NETZWERKFAKTOREN
..............................................................................................................
5
1.4
ZIEL
DER
ARBEIT
......................................................................................................................
5
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.............................................................................................................
6
2.1
GERAETE
.................................................................................................................................
6
2.2
VERBRAUCHSMATERIALIEN
.......................................................................................................
7
2.3
PUFFER
...................................................................................................................................
9
2.4
NAEHRMEDIEN
......................................................................................................................
10
2.5
PLASMIDE
UND
PRIMER
........................................................................................................
11
2.5.1
PLASMIDE
....................................................................................................................
11
2.5.2
PRIMER
........................................................................................................................
11
2.6
HEFESTAEMME
......................................................................................................................
12
2.7
METHODEN
..........................................................................................................................
14
2.7.1
HERSTELLUNG
DER
STAEMME
MIT
PROTEINMARKIERUNG
...................................................
14
2.7.2
UEBERPRUEFUNG
DER
GENMANIPULIERTEN
HEFESTAEMME
.................................................
16
2.7.3
WACHSTUMSTEST
........................................................................................................
19
2.7.4
ERMITTLUNG
DER
NETZWERKFAKTOREN
...........................................................................
20
2.7.5
ERMITTLUNG
DER
PLASMAMEMBRANINTENSITAET
............................................................
21
2.7.6
ERMITTLUNG
DER
PROTEINEXPRESSION
..........................................................................
21
2.7.7
AUSWERTUNG
UND
STATISTIK
........................................................................................24
3
ERGEBNISSE
................................................................................................................................
25
3.1
UEBERPRUEFUNG
DER
GENMANIPULIERTEN
STAEMME
.................................................................
25
3.1.1
MNG-MARKIERTE
STAEMME
.........................................................................................
25
3.1.2
GFP-MARKIERTE
STAEMME
...........................................................................................
26
3.1.3
KNOCKOUT-STAEMME
....................................................................................................26
3.2
WACHSTUMSTESTS
...............................................................................................................
28
3.2.1
WACHSTUMSTEST
DER
WILDTYPEN
...............................................................................
28
3.2.2
WACHTSUMSTEST
MIT
ESSIGSAEURE
...............................................................................
28
3.2.3
WACHSTUMSTEST
MIT
HITZESCHOCK
.............................................................................30
3.2.4
WACHSTUMSTEST
MIT
AMEISENSAEURE
UND
ZITRONENSAEURE
ALS
ORGANISCHEN
SAEUREN
31
3.2.5
WACHSTUMSTEST
MIT
SALZSAEURE
ALS
ANORGANISCHE
SAEURE
.........................................
33
3.2.6
WACHSTUMSTEST
MIT
ETHANOL
....................................................................................
34
3.2.7
WACHSTUMSTEST
DER
GFP-STAEMME
...........................................................................
34
3.3
NETZWERKFAKTOREN
............................................................................................................
37
3.3.1
VERGLEICH
ZWISCHEN
STATIONAERER
UND
EXPONENTIELLER
WACHSTUMSPHASE
...............
37
3.3.2
VERGLEICH
DER
VERSCHIEDENEN
MARKERPROTEINE
.......................................................
38
3.3.3
VERGLEICH
VON
PMA1
UND
HITZESCHOCKPROTEINEN
...................................................
39
3.3.4
NETZWERKFAKTOREN
DER
KNOCKOUT-STAEMME
..........................
40
3.3.5
NETZWERKFAKTOREN
DER
ZELLEN
UNTER
STRESS
.............................................................41
3.4
PLASMAMEMBRANINTENSITAET
..............................................................................................
44
3.5
PROTEINEXPRESSION
............................................................................................................
46
4
DISKUSSION
.................................................................................................................................50
4.1
UEBERPRUEFUNG
GENMANIPULIERTER
STAEMME
.......................................................................50
4.2
WACHSTUMSTESTS
...............................................................................................................
51
4.2.1
WACHSTUMSTESTS
UNTER
SAEURESTRESS
........................................................................
51
4.2.2
WACHSTUMSTESTS
UNTER
ETHANOLSTRESS
....................................................................
53
4.2.3
WACHSTUMSTESTS
DER
GFP
MARKIERTEN
STAEMME
......................................................
53
4.3
NETZWERKFAKTOREN
............................................................................................................
53
4.3.1
VERGLEICH
ZWISCHEN
STATIONAERER
UND
EXPONENTIELLER
WACHSTUMSPHASE
53
4.3.2
VERGLEICH
DER
VERSCHIEDENEN
MARKERPROTEINE
54
4.3.3
VERGLEICH
VON
PMAL
UND
HITZESCHOCKPROTEINEN
54
4.3.4
NETZWERKFAKTOREN
DER
KNOCKOUT-STAEMME
55
4.3.5
NETZWERKFAKTOREN
DER
ZELLEN
UNTER
STRESS
55
4.4
PLASMAMEMBRANINTENSITAET
57
4.5
PROTEINEXPRESSION
57
5
LITERATUR
59
6
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
64
7
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
65
8
TABELLENVERZEICHNIS
67
9
LEBENSLAUF
68
10
DANKSAGUNG
69
11
ANHANG
I
11.1
ZU
UEBERPRUEFUNG
DER
GENMANIPULIERTEN
STAEMME
I
11.1.1
GFP-MARKIERTE
STAEMME
I
11.1.2
KNOCKOUT-STAEMME
II
11.2
ZU
WACHSTUMSTESTS
...........................................................................................................
III
11.2.1
WACHSTUMSTEST
MIT
HITZE
III
11.2.2
WACHSTUMSTEST
MIT
AMEISENSAEURE
IV
11.2.3
WACHSTUMSTEST
MIT
ZITRONENSAEURE
VI
11.2.4
WACHSTUMSTEST
MIT
SALZSAEURE
VII
11.2.5
WACHSTUMSTEST
MIT
ETHANOL
VIII
11.3
ZU
PROTEINEXPRESSION
IX
11.3.1
ZWEITER
VERSUCH
IX
|
adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
.
1
1.1
SACCHAROMYCES
CEREVISIAE
.
1
1.1.1
VERWENDUNG
.
1
1.1.2
VERMEHRUNG
.
1
1.1.3
PLASMAMEMBRAN
.
2
1.1.4
PLASMA
MEMBRAN
H
+
-ATPASE
(PMAL)
.
2
1.1.5
HITZESCHOCKPROTEINE
YROL,
YRO2
UND
MRHL
.
3
1.2
INTERNE
TOTALREFLEKTIONSFLUORESZENZMIKROSKOPIE
(TIRF)
.
3
1.3
NETZWERKFAKTOREN
.
5
1.4
ZIEL
DER
ARBEIT
.
5
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.
6
2.1
GERAETE
.
6
2.2
VERBRAUCHSMATERIALIEN
.
7
2.3
PUFFER
.
9
2.4
NAEHRMEDIEN
.
10
2.5
PLASMIDE
UND
PRIMER
.
11
2.5.1
PLASMIDE
.
11
2.5.2
PRIMER
.
11
2.6
HEFESTAEMME
.
12
2.7
METHODEN
.
14
2.7.1
HERSTELLUNG
DER
STAEMME
MIT
PROTEINMARKIERUNG
.
14
2.7.2
UEBERPRUEFUNG
DER
GENMANIPULIERTEN
HEFESTAEMME
.
16
2.7.3
WACHSTUMSTEST
.
19
2.7.4
ERMITTLUNG
DER
NETZWERKFAKTOREN
.
20
2.7.5
ERMITTLUNG
DER
PLASMAMEMBRANINTENSITAET
.
21
2.7.6
ERMITTLUNG
DER
PROTEINEXPRESSION
.
21
2.7.7
AUSWERTUNG
UND
STATISTIK
.24
3
ERGEBNISSE
.
25
3.1
UEBERPRUEFUNG
DER
GENMANIPULIERTEN
STAEMME
.
25
3.1.1
MNG-MARKIERTE
STAEMME
.
25
3.1.2
GFP-MARKIERTE
STAEMME
.
26
3.1.3
KNOCKOUT-STAEMME
.26
3.2
WACHSTUMSTESTS
.
28
3.2.1
WACHSTUMSTEST
DER
WILDTYPEN
.
28
3.2.2
WACHTSUMSTEST
MIT
ESSIGSAEURE
.
28
3.2.3
WACHSTUMSTEST
MIT
HITZESCHOCK
.30
3.2.4
WACHSTUMSTEST
MIT
AMEISENSAEURE
UND
ZITRONENSAEURE
ALS
ORGANISCHEN
SAEUREN
31
3.2.5
WACHSTUMSTEST
MIT
SALZSAEURE
ALS
ANORGANISCHE
SAEURE
.
33
3.2.6
WACHSTUMSTEST
MIT
ETHANOL
.
34
3.2.7
WACHSTUMSTEST
DER
GFP-STAEMME
.
34
3.3
NETZWERKFAKTOREN
.
37
3.3.1
VERGLEICH
ZWISCHEN
STATIONAERER
UND
EXPONENTIELLER
WACHSTUMSPHASE
.
37
3.3.2
VERGLEICH
DER
VERSCHIEDENEN
MARKERPROTEINE
.
38
3.3.3
VERGLEICH
VON
PMA1
UND
HITZESCHOCKPROTEINEN
.
39
3.3.4
NETZWERKFAKTOREN
DER
KNOCKOUT-STAEMME
.
40
3.3.5
NETZWERKFAKTOREN
DER
ZELLEN
UNTER
STRESS
.41
3.4
PLASMAMEMBRANINTENSITAET
.
44
3.5
PROTEINEXPRESSION
.
46
4
DISKUSSION
.50
4.1
UEBERPRUEFUNG
GENMANIPULIERTER
STAEMME
.50
4.2
WACHSTUMSTESTS
.
51
4.2.1
WACHSTUMSTESTS
UNTER
SAEURESTRESS
.
51
4.2.2
WACHSTUMSTESTS
UNTER
ETHANOLSTRESS
.
53
4.2.3
WACHSTUMSTESTS
DER
GFP
MARKIERTEN
STAEMME
.
53
4.3
NETZWERKFAKTOREN
.
53
4.3.1
VERGLEICH
ZWISCHEN
STATIONAERER
UND
EXPONENTIELLER
WACHSTUMSPHASE
53
4.3.2
VERGLEICH
DER
VERSCHIEDENEN
MARKERPROTEINE
54
4.3.3
VERGLEICH
VON
PMAL
UND
HITZESCHOCKPROTEINEN
54
4.3.4
NETZWERKFAKTOREN
DER
KNOCKOUT-STAEMME
55
4.3.5
NETZWERKFAKTOREN
DER
ZELLEN
UNTER
STRESS
55
4.4
PLASMAMEMBRANINTENSITAET
57
4.5
PROTEINEXPRESSION
57
5
LITERATUR
59
6
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
64
7
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
65
8
TABELLENVERZEICHNIS
67
9
LEBENSLAUF
68
10
DANKSAGUNG
69
11
ANHANG
I
11.1
ZU
UEBERPRUEFUNG
DER
GENMANIPULIERTEN
STAEMME
I
11.1.1
GFP-MARKIERTE
STAEMME
I
11.1.2
KNOCKOUT-STAEMME
II
11.2
ZU
WACHSTUMSTESTS
.
III
11.2.1
WACHSTUMSTEST
MIT
HITZE
III
11.2.2
WACHSTUMSTEST
MIT
AMEISENSAEURE
IV
11.2.3
WACHSTUMSTEST
MIT
ZITRONENSAEURE
VI
11.2.4
WACHSTUMSTEST
MIT
SALZSAEURE
VII
11.2.5
WACHSTUMSTEST
MIT
ETHANOL
VIII
11.3
ZU
PROTEINEXPRESSION
IX
11.3.1
ZWEITER
VERSUCH
IX |
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