Einsatz bispezifischer Antikörper bei hämatologischen Erkrankungen: Effektorvermittlung über NK-Zellen im murinen Myelommodell
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Münster
2021
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| Beschreibung: | 98, XIV Blätter Illustrationen 30 cm |
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
.........................................................................................................
1
1.1
IMMUNSYSTEM
................................................................................................
1
1.2
ENTWICKLUNG
DER
NK-ZELLEN
............................................................................
2
1.3
FUNKTION
DER
NK-ZELLEN
.................................................................................
5
1.3.1
TUMORLYSE
...........................................................................................
6
1.3.2
INFEKTKONTROLLE
......................................................................................
6
1.3.3
SCHWANGERSCHAFT.................................................................................
6
1.4
NK1
.1
-REZEPTOR
UND
SIGNALUEBERTRAGUNG
.......................................................
7
1.5
STAMMZELLTRANSPLANTATION
..............................................................................
9
1.6
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
...............................................................................
10
1.7
BISPEZIFISCHE
ANTIKOERPER
..............................................................................
11
2.
ZIEL
DER
ARBEIT
................................................................................................
14
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
..................................................................................
15
3.1
MATERIAL
........................................................................................................
15
3.1.1
TECHNISCHE
GERAETE
............................................................................
15
3.1.2
VERBRAUCHSMATERIAL
...........................................................................
16
3.1.3
CHEMIKALIEN
......................................................................................
16
3.1.4
ANTIKOERPER
..........................................................................................
17
3.1.5
KITS
....................................................................................................
17
3.1.6
PROTEINMARKER
FUER
SDS-PAGE
...........................................................
18
3.1.7
ZELLLINIEN
UND
MAEUSE
.........................................................................
18
3.1.8
KULTURMEDIEN
.....................................................................................
19
3.1.9
COMPUTERPROGRAMME
........................................................................
20
3.2
METHODEN
....................................................................................................
20
3.2.1
ZELLKULTUREN
........................................................................................
20
3.2.2
BESTIMMUNG
DER
ZELLZAHL
...................................................................
20
3.2.3
KRYOKONSERVIERUNG
VON
ZELLEN
...........................................................
21
3.2.4
NK-ZELLISOLATION
.................................................................................
22
3.2.5
T-ZELLISOLATION
....................................................................................
23
3.2.6
PRODUKTION
DER
MONOKLONALEN
ANTIKOERPER
..........................................
24
3.2.7
SDS-PAGE........................................................................................
24
3.2.8
CHEMISCHE
VERBINDUNG
CD19XNK1
.1
...............................................
25
3.2.9
HOCHLEISTUNGSFLUESSIGKEITSCHROMATOGRAPHIE.......................................
27
3.2.9.1
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
...........................................................
27
3.2.9.2
GROESSENAUSSCHLUSS-CHROMATOGRAPHIE.........................................
28
3.2.10
TRANSFEKTION
DER
5TGM1-ZELLEN
......................................................
29
3.2.11
DURCHFLUSSZYTOMETER
.......................................................................
31
3.2.11.1
KONTROLLE
DER
NK
UND
T-ZELLISOLATION
........................................
32
3.2.11.2
CD19-EXPRESSION
DER
5TGM1-ZELLEN
.......................................
32
3.2.11.3
GFP-EXPRESSION
DER
5TGM1-ZELLEN
.........................................
33
3.2.11.4
BINDUNGSFAEHIGKEIT
DES
BISPEZIFISCHEN
ANTIKOERPERS
....................
33
3.2.11.5
TITRATION
DER
ANTIKOERPER
.............................................................
35
3.2.12
ZYTOTOXIZITAETS-ASSAY
........................................................................
36
3.2.13
IN
V/VO-VERSUCH
................................................................................
38
3.2.13.1
RAHMENBEDINGUNGEN
...............................................................
38
3.2.13.2
DURCHFUEHRUNG
............................................................................
38
3.2.13.3
T
UMORANALYSE
...........................................................................
39
3.3
STATISTIK
......................................................................................................
39
4.
ERGEBNISSE
..................................................................................................
40
4.1
ENTWICKLUNG
DER
MONOKLONALEN
ANTIKOERPER
..................................................
40
4.1.1
PRODUKTION
UND
AUFREINIGUNG
.............................................................
40
4.1.2
QUALITAETSKONTROLLE
MITTELS
SDS-PAGE
...............................................
43
4.1.3
QUALITAETSKONTROLLE
MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
................................
44
4.2
ENTWICKLUNG
DES
BISPEZIFISCHEN
ANTIKOERPERS
................................................
45
4.2.1
PRODUKTION
UND
AUFREINIGUNG
.............................................................
45
4.2.2
QUALITAETSKONTROLLE
MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
................................
47
4.2.2.1
BISPEZIFISCHER
ANTIKOERPER
BINDET
AUF
NK-ZELLEN
.........................
47
4.2.2.2
BISPEZIFISCHER
ANTIKOERPER
BINDET
AUF
5TGM1-CD19
..................
48
4.2.3
ANTIKOERPERTITRATION
............................................................................
49
4.2.3.1
TITRATION
AUF
NK-ZELLEN................................................................
50
4.2.3.2
TITRATION
AUF
5TGM1-CD19
.........................................................
53
4.3
ISOLATIONSKONTROLLEN......................................................................................
55
4.3.1
NK-ZELLISOLATIONSKONTROLLE..................................................................
55
4.3.2
T-ZELLISOLATIONSKONTROLLE
....................................................................
56
4.4
5TGM1-CHARAKTERISIERUNG...........................................................................
57
4.5
ZYTOTOXIZITAETS-ASSAY
....................................................................................
59
4.6
ERMITTLUNG
DER
ZYTOTOXISCHEN
AKTIVITAET
IN
EINEM
SYNGENEN
MURINEN
IN
VIVO
TUMORMODELL
.....................................................................................................
63
4.6.1
TUMORENTWICKLUNG
.............................................................................
64
4.6.2
GEWICHTSVERLAUF
DER
MAEUSE...............................................................
65
4.6.3
EINFLUSS
DER
ANTIKOERPER
AUF
DAS
UEBERLEBEN
DER
TIERE
.......................
66
4.6.4
TUMORANALYSE
MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.....................................
67
5.
DISKUSSION
.....................................................................................................
71
5.1
PRODUKTION
DES
BISPEZIFISCHEN
ANTIKOERPERS
..................................................
71
5.2
TRANSFEKTION
DER
5TGM1-ZELLEN
MIT
MURINEM
CD19
...................................
73
5.3
BINDUNGSFAEHIGKEIT
DES
BISPEZIFISCHEN
ANTIKOERPERS
......................................
75
5.4
ZYTOTOXIZITAETS-ASSAY
....................................................................................
75
5.5
ANTIKOERPERWIRKUNG
AUF
DAS
TUMORWACHSTUM
IN
VIVO
....................................
79
6.
LITERATURVERZEICHNIS
.......................................................................................
83
7.
LEBENSLAUF
.....................................................................................................
97
8.
DANKSAGUNG
..................................................................................................
98
9.
ANHANG
.............................................................................................................
I
9.1
GENEHMIGUNGEN
DER
ABBILDUNGEN
..................................................................
I
9.2
BESCHEINIGUNG
UEBER
EINEN
VERSUCHSTIERKUNDEKURS
..................................
XI
9.3
AUSNAHMEGENEHMIGUNG
ZUR
DURCHFUEHRUNG
VON
TIERVERSUCHEN
.................
XII
9.4
GENEHMIGUNGEN
DES
TIERVERSUCHS
..........................................................
XIV
|
| adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
.
1
1.1
IMMUNSYSTEM
.
1
1.2
ENTWICKLUNG
DER
NK-ZELLEN
.
2
1.3
FUNKTION
DER
NK-ZELLEN
.
5
1.3.1
TUMORLYSE
.
6
1.3.2
INFEKTKONTROLLE
.
6
1.3.3
SCHWANGERSCHAFT.
6
1.4
NK1
.1
-REZEPTOR
UND
SIGNALUEBERTRAGUNG
.
7
1.5
STAMMZELLTRANSPLANTATION
.
9
1.6
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
.
10
1.7
BISPEZIFISCHE
ANTIKOERPER
.
11
2.
ZIEL
DER
ARBEIT
.
14
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
15
3.1
MATERIAL
.
15
3.1.1
TECHNISCHE
GERAETE
.
15
3.1.2
VERBRAUCHSMATERIAL
.
16
3.1.3
CHEMIKALIEN
.
16
3.1.4
ANTIKOERPER
.
17
3.1.5
KITS
.
17
3.1.6
PROTEINMARKER
FUER
SDS-PAGE
.
18
3.1.7
ZELLLINIEN
UND
MAEUSE
.
18
3.1.8
KULTURMEDIEN
.
19
3.1.9
COMPUTERPROGRAMME
.
20
3.2
METHODEN
.
20
3.2.1
ZELLKULTUREN
.
20
3.2.2
BESTIMMUNG
DER
ZELLZAHL
.
20
3.2.3
KRYOKONSERVIERUNG
VON
ZELLEN
.
21
3.2.4
NK-ZELLISOLATION
.
22
3.2.5
T-ZELLISOLATION
.
23
3.2.6
PRODUKTION
DER
MONOKLONALEN
ANTIKOERPER
.
24
3.2.7
SDS-PAGE.
24
3.2.8
CHEMISCHE
VERBINDUNG
CD19XNK1
.1
.
25
3.2.9
HOCHLEISTUNGSFLUESSIGKEITSCHROMATOGRAPHIE.
27
3.2.9.1
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
.
27
3.2.9.2
GROESSENAUSSCHLUSS-CHROMATOGRAPHIE.
28
3.2.10
TRANSFEKTION
DER
5TGM1-ZELLEN
.
29
3.2.11
DURCHFLUSSZYTOMETER
.
31
3.2.11.1
KONTROLLE
DER
NK
UND
T-ZELLISOLATION
.
32
3.2.11.2
CD19-EXPRESSION
DER
5TGM1-ZELLEN
.
32
3.2.11.3
GFP-EXPRESSION
DER
5TGM1-ZELLEN
.
33
3.2.11.4
BINDUNGSFAEHIGKEIT
DES
BISPEZIFISCHEN
ANTIKOERPERS
.
33
3.2.11.5
TITRATION
DER
ANTIKOERPER
.
35
3.2.12
ZYTOTOXIZITAETS-ASSAY
.
36
3.2.13
IN
V/VO-VERSUCH
.
38
3.2.13.1
RAHMENBEDINGUNGEN
.
38
3.2.13.2
DURCHFUEHRUNG
.
38
3.2.13.3
T
UMORANALYSE
.
39
3.3
STATISTIK
.
39
4.
ERGEBNISSE
.
40
4.1
ENTWICKLUNG
DER
MONOKLONALEN
ANTIKOERPER
.
40
4.1.1
PRODUKTION
UND
AUFREINIGUNG
.
40
4.1.2
QUALITAETSKONTROLLE
MITTELS
SDS-PAGE
.
43
4.1.3
QUALITAETSKONTROLLE
MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
44
4.2
ENTWICKLUNG
DES
BISPEZIFISCHEN
ANTIKOERPERS
.
45
4.2.1
PRODUKTION
UND
AUFREINIGUNG
.
45
4.2.2
QUALITAETSKONTROLLE
MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
47
4.2.2.1
BISPEZIFISCHER
ANTIKOERPER
BINDET
AUF
NK-ZELLEN
.
47
4.2.2.2
BISPEZIFISCHER
ANTIKOERPER
BINDET
AUF
5TGM1-CD19
.
48
4.2.3
ANTIKOERPERTITRATION
.
49
4.2.3.1
TITRATION
AUF
NK-ZELLEN.
50
4.2.3.2
TITRATION
AUF
5TGM1-CD19
.
53
4.3
ISOLATIONSKONTROLLEN.
55
4.3.1
NK-ZELLISOLATIONSKONTROLLE.
55
4.3.2
T-ZELLISOLATIONSKONTROLLE
.
56
4.4
5TGM1-CHARAKTERISIERUNG.
57
4.5
ZYTOTOXIZITAETS-ASSAY
.
59
4.6
ERMITTLUNG
DER
ZYTOTOXISCHEN
AKTIVITAET
IN
EINEM
SYNGENEN
MURINEN
IN
VIVO
TUMORMODELL
.
63
4.6.1
TUMORENTWICKLUNG
.
64
4.6.2
GEWICHTSVERLAUF
DER
MAEUSE.
65
4.6.3
EINFLUSS
DER
ANTIKOERPER
AUF
DAS
UEBERLEBEN
DER
TIERE
.
66
4.6.4
TUMORANALYSE
MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
67
5.
DISKUSSION
.
71
5.1
PRODUKTION
DES
BISPEZIFISCHEN
ANTIKOERPERS
.
71
5.2
TRANSFEKTION
DER
5TGM1-ZELLEN
MIT
MURINEM
CD19
.
73
5.3
BINDUNGSFAEHIGKEIT
DES
BISPEZIFISCHEN
ANTIKOERPERS
.
75
5.4
ZYTOTOXIZITAETS-ASSAY
.
75
5.5
ANTIKOERPERWIRKUNG
AUF
DAS
TUMORWACHSTUM
IN
VIVO
.
79
6.
LITERATURVERZEICHNIS
.
83
7.
LEBENSLAUF
.
97
8.
DANKSAGUNG
.
98
9.
ANHANG
.
I
9.1
GENEHMIGUNGEN
DER
ABBILDUNGEN
.
I
9.2
BESCHEINIGUNG
UEBER
EINEN
VERSUCHSTIERKUNDEKURS
.
XI
9.3
AUSNAHMEGENEHMIGUNG
ZUR
DURCHFUEHRUNG
VON
TIERVERSUCHEN
.
XII
9.4
GENEHMIGUNGEN
DES
TIERVERSUCHS
.
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