Bedeutung von Annexin A4 für das kardiale Remodeling:
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| Main Author: | |
|---|---|
| Format: | Thesis Book |
| Language: | German |
| Published: |
Münster
2021
|
| Subjects: | |
| Online Access: | Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis |
| Physical Description: | X, 169 Blätter Illustrationen 30 cm |
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|---|---|
| adam_text | I.
INHALTSVERZEICHNIS
II.
ABBILDUNGS
UND
TABELLENVERZEICHNIS
......................................
IV
III.
EINHEITEN
..................................................................................................
VI
IV.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
..................................................................
VI
1.
EINLEITUNG
..................................................................................................
1
1.1
ADENYLYLCYCLASEN
...................................................................................................................................
1
1.1.1
STRUKTUR
UND
EXPRESSIONSORTE
VON
ADENYLYLCYCLASEN
.....................................................................
1
1.1.2
FUNKTION
UND
REGULATION
VON
ADENYLYLCYCLASEN
.............................................................................
2
1.1.3
DIE
ADENYLYLCYCLASEN
5
UND
6
IN
DER
KARDIALEN
SIGNALTRANSDUKTION
...............................................
4
1.1.4
PHARMAKOLOGISCHE
INHIBITION
VON
ADENYLYLCYCLASEN
.......................................................................
5
1.2
ANNEXINE
..................................................................................................................................................
6
1.2.1
FUNKTIONEN
UND
EXPRESSIONSORTE
VON
ANNEXINEN
...........................................................................
7
1.2.2
ANNEXIN
A4
........................................................................................................................................9
1.3
HERZINSUFFIZIENZ
....................................................................................................................................
12
1.3.1
AETIOLOGIE
UND
SYMPTOME
................................................................................................................
12
1.3.2
ADRENERGE
SIGNALTRANSDUKTION
UND
KARDIALES
REMODELING
..........................................................
12
1.3.3
PHARMAKOLOGISCHE
THERAPIE
DER
HERZINSUFFIZIENZ
........................................................................
17
1.4
ZIELSETZUNG
.............................................................................................................................................
18
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.....................................................................
20
2.1
ZELLKULTUR
................................................................................................................................................20
2.1.1
KULTIVIERUNGSBEDINGUNG
UND
MEDIEN
.............................................................................................20
2.1.2
TRANSIENTE
TRANSFEKTION
..................................................................................................................
21
2.2
DIE
PMHC-ANXA4-UTR-TG-TIERLINIE
..................................................................................................22
2.2.1
HALTUNG
UND
ZUCHT
...........................................................................................................................22
2.2.2
GENOTYPISIERUNG
..............................................................................................................................23
2.3
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.......................................................................................................
24
2.3.1
POLYMERASE-KETTENREAKTION
............................................................................................................24
2.3.2
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
...........................................................................................................25
2.3.3
ERZEUGUNG
UND
TRANSFORMATION
KOMPETENTER
BAKTERIEN
.............................................................
25
2.3.4
DNA-PRAEPARATION,
-AUFREINIGUNG
UND
-KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
...........................................
26
2.3.5
KLONIERUNG
.......................................................................................................................................
27
2.4
BIOCHEMISCHE
METHODEN
....................................................................................................................30
2.4.1
PROTEIN-KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
..............................................................................................
30
2.4.2
WESTERN
BLOT
....................................................................................................................................
32
2.4.3
CO-IMMUNPRAEZIPITATION
...................................................................................................................36
2.5
UNTERSUCHUNG
VON
ANNEXIN
A4-TG-TIEREN
......................................................................................42
INHALTSVERZEICHNIS
2.5.1
ISOLATION
VENTRIKULAERER
KARDIOMYOZYTEN
.........................................................................................
42
2.5.2
HERSTELLUNG
VON
VENTRIKELHOMOGENATEN
........................................................................................
43
2.5.3
BESTIMMUNG
DER
RELATIVEN
ANNEXIN
A4-UEBEREXPRESSION
..............................................................
44
2.5.4
MESSUNG
DER
CAMP-KONZENTRATION
IN
VENTRIKULAEREN
KARDIOMYOZYTEN
........................................
44
2.5.5
IMPLANTATION
OSMOTISCHER
MINIPUMPEN
..........................................................................................
46
2.5.6
HISTOLOGISCHE
UNTERSUCHUNGEN
......................................................................................................
47
2.5.7
BESTIMMUNG
VON
ATRIEN
UND
VENTRIKELGEWICHTEN
.........................................................................
52
2.5.8
BESTIMMUNG
MORPHOLOGISCHER
ZELLPARAMETER
...............................................................................
52
2.5.9
MESSUNG
VON
CALCIUMTRANSIENTEN
UND
SARKOMERLAENGENVERKUERZUNG
..........................................
52
2.5.10
MESSUNG
DER
CALCIUMTRANSPORTRATEN
VON
SERCA,
NCX
UND
PMCA
IN
VENTRIKULAEREN
KARDIOMYOZYTEN
........................................................................................................................................
56
2.5.11
BESTIMMUNG
DER
CALCIUMBELADUNG
DES
SARKOPLASMATISCHEN
RETIKULUMS
...............................
60
2.5.12
MESSUNG
DER
KONTRAKTIONSKRAFT
LINKER
ATRIEN
..............................................................................
60
2.5.13
UNTERSUCHUNG
DER
KARDIALEN
HAEMODYNAMIK
...............................................................................
61
2.6
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
....................................................................................................................
62
3.
ERGEBNISSE
.............................................................................................
63
3.1
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
SPEZIFITAET
DER
INTERAKTION
VON
ANNEXIN
A4
MIT
DEN
KARDIAL
PRAEDOMINANTEN
ADENYLYLCYCLASEN
AC5
UND
AC6
..............................................................................................................63
3.2
CHARAKTERISIERUNG
DER
ANNEXIN
A4-ADENYLYLCYCLASE
5
INTERAKTION
.............................................65
3.2.1
IDENTIFIZIERUNG
WEITERER
INTERAKTIONSPARTNER
MITTELS
CO-LMMUNPRAEZIPITATION
UND
MASSENSPEKTROMETRIE
...............................................................................................................................65
3.2.2
SUMOYLIERUNGSSPEZIFISCHE
KONSENSUSSEQUENZEN
INNERHALB
VON
ANNEXIN
A4
UND
DER
ADENYLYLCYCLASE
5
.....................................................................................................................................
70
3.3
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
CHRONISCHEN
ANNEXIN
A4-UEBEREXPRESSION
IN
MURINEN
HERZEN
.............
71
3.3.1
ERZEUGUNG
EINER
MAUSLINIE
MIT
KARDIALER
ANNEXIN
A4-UEBEREXPRESSION
......................................
71
3.3.2
MORPHOLOGISCHE
AUSWIRKUNGEN
EINER
CHRONISCHEN
ANNEXIN
A4-UEBEREXPRESSION
.......................
73
3.3.3
UNTERSUCHUNG
FUNKTIONELLER
PARAMETER
DER
HERZFUNKTION
............................................................87
3.3.4
UNTERSUCHUNG
DER
KARDIALEN
HAEMODYNAMIK
AN
ANNEXIN
A4-TG-HERZEN
.................................
102
3.3.5
MESSUNG
DER
KONTRAKTIONSKRAFT
LINKER
ATRIEN
...............................................................................
105
3.3.6
EINFLUSS
DER
ANNEXIN
A4-UEBEREXPRESSION
AUF
DIE
EXPRESSION
VON
PROTEINEN
IM
VENTRIKELGEWEBE
.....................................................................................................................................
107
3.4
AUSWIRKUNGEN
EINER
ANNEXIN
A4-UEBEREXPRESSION
NACH
CHRONISCHER
ISOPRENALINBEHANDLUNG
110
3.4.1
VERAENDERUNG
DES
HERZGEWICHTS
UNTER
CHRONISCHER
ISOPRENALINBEHANDLUNG
............................
110
3.4.2
EINFLUSS
VON
ANNEXIN
A4
AUF
DIE
HERZFIBROSIERUNG
NACH
CHRONISCHER
ISOPRENALINBEHANDLUNG
111
4.
DISKUSSION
............................................................................................
113
4.1
KEINE
INTERAKTION
VON
ANNEXIN
A4
MIT
DER
HUMANEN
ADENYLYLCYCLASE
6
................................
114
4.2
BETEILIGUNG
VON
WEITEREN
PROTEINEN
AN
DER
INTERAKTION
VON
ANNEXIN
A4
UND
DER
ADENYLYLCYCLASE
5
....................................................................................................................................
117
4.3
AUSWIRKUNGEN
DER
ANNEXIN
A4-UEBEREXPRESSION
AUF
DIE
HERZPHYSIOLOGIE
..............................
121
4.3.1
ANNEXIN
A4
IST
IM
BEREICH
DER
T-TUBULI
LOKALISIERT
......................................................................
122
4.3.2
STRUKTURELLES
REMODELING
IN
ANNEXIN
A4-TRANSGENEN
TIEREN
....................................................
125
4.3.3
UNTERSUCHUNG
PHYSIOLOGISCHER
HERZPARAMETER
..........................................................................
127
II
INHALTSVERZEICHNIS
4.4
ANNEXIN
A4
UND
SEINE
MOEGLICHE
THERAPEUTISCHE
BEDEUTUNG
.................................................
132
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.............................................................................
134
6.
ANHANG
....................................................................................................
137
7.
GERAETE,
CHEMIKALIEN
UND
KITS
........................................................
138
8.
LITERATURVERZEICHNIS
.......................................................................
142
9.
LEBENSLAUF
...........................................................................................
167
10.
DANKSAGUNG
.......................................................................................
169
III
|
| adam_txt |
I.
INHALTSVERZEICHNIS
II.
ABBILDUNGS
UND
TABELLENVERZEICHNIS
.
IV
III.
EINHEITEN
.
VI
IV.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
VI
1.
EINLEITUNG
.
1
1.1
ADENYLYLCYCLASEN
.
1
1.1.1
STRUKTUR
UND
EXPRESSIONSORTE
VON
ADENYLYLCYCLASEN
.
1
1.1.2
FUNKTION
UND
REGULATION
VON
ADENYLYLCYCLASEN
.
2
1.1.3
DIE
ADENYLYLCYCLASEN
5
UND
6
IN
DER
KARDIALEN
SIGNALTRANSDUKTION
.
4
1.1.4
PHARMAKOLOGISCHE
INHIBITION
VON
ADENYLYLCYCLASEN
.
5
1.2
ANNEXINE
.
6
1.2.1
FUNKTIONEN
UND
EXPRESSIONSORTE
VON
ANNEXINEN
.
7
1.2.2
ANNEXIN
A4
.9
1.3
HERZINSUFFIZIENZ
.
12
1.3.1
AETIOLOGIE
UND
SYMPTOME
.
12
1.3.2
ADRENERGE
SIGNALTRANSDUKTION
UND
KARDIALES
REMODELING
.
12
1.3.3
PHARMAKOLOGISCHE
THERAPIE
DER
HERZINSUFFIZIENZ
.
17
1.4
ZIELSETZUNG
.
18
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
20
2.1
ZELLKULTUR
.20
2.1.1
KULTIVIERUNGSBEDINGUNG
UND
MEDIEN
.20
2.1.2
TRANSIENTE
TRANSFEKTION
.
21
2.2
DIE
PMHC-ANXA4-UTR-TG-TIERLINIE
.22
2.2.1
HALTUNG
UND
ZUCHT
.22
2.2.2
GENOTYPISIERUNG
.23
2.3
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
24
2.3.1
POLYMERASE-KETTENREAKTION
.24
2.3.2
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
.25
2.3.3
ERZEUGUNG
UND
TRANSFORMATION
KOMPETENTER
BAKTERIEN
.
25
2.3.4
DNA-PRAEPARATION,
-AUFREINIGUNG
UND
-KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
.
26
2.3.5
KLONIERUNG
.
27
2.4
BIOCHEMISCHE
METHODEN
.30
2.4.1
PROTEIN-KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
.
30
2.4.2
WESTERN
BLOT
.
32
2.4.3
CO-IMMUNPRAEZIPITATION
.36
2.5
UNTERSUCHUNG
VON
ANNEXIN
A4-TG-TIEREN
.42
INHALTSVERZEICHNIS
2.5.1
ISOLATION
VENTRIKULAERER
KARDIOMYOZYTEN
.
42
2.5.2
HERSTELLUNG
VON
VENTRIKELHOMOGENATEN
.
43
2.5.3
BESTIMMUNG
DER
RELATIVEN
ANNEXIN
A4-UEBEREXPRESSION
.
44
2.5.4
MESSUNG
DER
CAMP-KONZENTRATION
IN
VENTRIKULAEREN
KARDIOMYOZYTEN
.
44
2.5.5
IMPLANTATION
OSMOTISCHER
MINIPUMPEN
.
46
2.5.6
HISTOLOGISCHE
UNTERSUCHUNGEN
.
47
2.5.7
BESTIMMUNG
VON
ATRIEN
UND
VENTRIKELGEWICHTEN
.
52
2.5.8
BESTIMMUNG
MORPHOLOGISCHER
ZELLPARAMETER
.
52
2.5.9
MESSUNG
VON
CALCIUMTRANSIENTEN
UND
SARKOMERLAENGENVERKUERZUNG
.
52
2.5.10
MESSUNG
DER
CALCIUMTRANSPORTRATEN
VON
SERCA,
NCX
UND
PMCA
IN
VENTRIKULAEREN
KARDIOMYOZYTEN
.
56
2.5.11
BESTIMMUNG
DER
CALCIUMBELADUNG
DES
SARKOPLASMATISCHEN
RETIKULUMS
.
60
2.5.12
MESSUNG
DER
KONTRAKTIONSKRAFT
LINKER
ATRIEN
.
60
2.5.13
UNTERSUCHUNG
DER
KARDIALEN
HAEMODYNAMIK
.
61
2.6
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
.
62
3.
ERGEBNISSE
.
63
3.1
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
SPEZIFITAET
DER
INTERAKTION
VON
ANNEXIN
A4
MIT
DEN
KARDIAL
PRAEDOMINANTEN
ADENYLYLCYCLASEN
AC5
UND
AC6
.63
3.2
CHARAKTERISIERUNG
DER
ANNEXIN
A4-ADENYLYLCYCLASE
5
INTERAKTION
.65
3.2.1
IDENTIFIZIERUNG
WEITERER
INTERAKTIONSPARTNER
MITTELS
CO-LMMUNPRAEZIPITATION
UND
MASSENSPEKTROMETRIE
.65
3.2.2
SUMOYLIERUNGSSPEZIFISCHE
KONSENSUSSEQUENZEN
INNERHALB
VON
ANNEXIN
A4
UND
DER
ADENYLYLCYCLASE
5
.
70
3.3
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
CHRONISCHEN
ANNEXIN
A4-UEBEREXPRESSION
IN
MURINEN
HERZEN
.
71
3.3.1
ERZEUGUNG
EINER
MAUSLINIE
MIT
KARDIALER
ANNEXIN
A4-UEBEREXPRESSION
.
71
3.3.2
MORPHOLOGISCHE
AUSWIRKUNGEN
EINER
CHRONISCHEN
ANNEXIN
A4-UEBEREXPRESSION
.
73
3.3.3
UNTERSUCHUNG
FUNKTIONELLER
PARAMETER
DER
HERZFUNKTION
.87
3.3.4
UNTERSUCHUNG
DER
KARDIALEN
HAEMODYNAMIK
AN
ANNEXIN
A4-TG-HERZEN
.
102
3.3.5
MESSUNG
DER
KONTRAKTIONSKRAFT
LINKER
ATRIEN
.
105
3.3.6
EINFLUSS
DER
ANNEXIN
A4-UEBEREXPRESSION
AUF
DIE
EXPRESSION
VON
PROTEINEN
IM
VENTRIKELGEWEBE
.
107
3.4
AUSWIRKUNGEN
EINER
ANNEXIN
A4-UEBEREXPRESSION
NACH
CHRONISCHER
ISOPRENALINBEHANDLUNG
110
3.4.1
VERAENDERUNG
DES
HERZGEWICHTS
UNTER
CHRONISCHER
ISOPRENALINBEHANDLUNG
.
110
3.4.2
EINFLUSS
VON
ANNEXIN
A4
AUF
DIE
HERZFIBROSIERUNG
NACH
CHRONISCHER
ISOPRENALINBEHANDLUNG
111
4.
DISKUSSION
.
113
4.1
KEINE
INTERAKTION
VON
ANNEXIN
A4
MIT
DER
HUMANEN
ADENYLYLCYCLASE
6
.
114
4.2
BETEILIGUNG
VON
WEITEREN
PROTEINEN
AN
DER
INTERAKTION
VON
ANNEXIN
A4
UND
DER
ADENYLYLCYCLASE
5
.
117
4.3
AUSWIRKUNGEN
DER
ANNEXIN
A4-UEBEREXPRESSION
AUF
DIE
HERZPHYSIOLOGIE
.
121
4.3.1
ANNEXIN
A4
IST
IM
BEREICH
DER
T-TUBULI
LOKALISIERT
.
122
4.3.2
STRUKTURELLES
REMODELING
IN
ANNEXIN
A4-TRANSGENEN
TIEREN
.
125
4.3.3
UNTERSUCHUNG
PHYSIOLOGISCHER
HERZPARAMETER
.
127
II
INHALTSVERZEICHNIS
4.4
ANNEXIN
A4
UND
SEINE
MOEGLICHE
THERAPEUTISCHE
BEDEUTUNG
.
132
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
134
6.
ANHANG
.
137
7.
GERAETE,
CHEMIKALIEN
UND
KITS
.
138
8.
LITERATURVERZEICHNIS
.
142
9.
LEBENSLAUF
.
167
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DANKSAGUNG
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III |
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