Verfügbarkeit: Molekularbiologische Methoden 2.0

Molekularbiologische Methoden 2.0:

Gespeichert in:

Bibliographische Detailangaben
1. Verfasser:	Reinard, Thomas 1963- (VerfasserIn)
Format:	Buch
Sprache:	German
Veröffentlicht:	Stuttgart Verlag Eugen Ulmer [2021]
Ausgabe:	3., aktualisierte Auflage
Schriftenreihe:	utb 8449
Schlagworte:	Methode Molekularbiologie Aufreinigung BAC DNA Elektrophorese Klonierungsstrategie Polymerasekettenreaktion RNA Genetik Proteine Laborarbeit Gewebe Aufreinigungsmethoden Nukleinsäure Polymerase Klonierung Immunbiologie immunbiochemische Verfahren PCR Studium Biologie Studium Mikrobiologie utb Lehrbuch 1100: Studien- und Arbeitsbücher 1550: Grundlagen (Bachelor) 1600: Vertiefung (Master) 2080: Biologie/Ökologie 2084: Mikrobiologie/Biochemie/Genetik Praktikum
Online-Zugang:	Inhaltsverzeichnis
Beschreibung:	328 Seiten Illustrationen, Diagramme
ISBN:	9783825287955

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Datensatz im Suchindex

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adam_text	5 INHALT VORWORT ZUR 1. AUFLAGE . 12 VORWORT ZUR 2. AUFLAGE . 13 VORWORT ZUR 3. AUFLAGE . 13 1 DAS LEBEN UND SEINE BESTANDTEILE 1.1 DER AUFBAU VON DNA UND RNA . 17 1.4 PROTEINE . . 26 1.5 DIE ZELLE . . 30 1.2 DER GENETISCHE CODE . 20 1.3 DIE GENE . 22 1.3.1 DIE GENSTRUKTUR IN PROKARYOTEN . 22 1.3.2 GENSTRUKTUR IN EUKARYOTEN . 24 2 GRUNDLAGEN DER ARBEIT IM LABOR 2.1 WASSER . , 34 2.9 PROBENLAGERUNG . . 46 2.2 MESSUNG DES PH-WERTS . . 35 2.10 STERILES ARBEITEN . . 46 2.3 PUFFER . . 36 2.11 GERAETE FUER DEN AUFSCHLUSS VON GEWEBEN . . 49 2.4 WAAGEN . , 36 2.12 PFLEGE UND AUFZUCHT 2.5 MIKROPIPETTEN . . 38 VON ESCHERICHIA COLI . . 51 2.12.1 NAEHRMEDIEN . . 52 2.6 GEFAESSE IM LABOR . . 40 2.12.2 ANTIBIOTIKA . . 53 2.12.3 LAGERUNG VON BAKTERIEN . . 55 2.7 ZENTRIFUGEN . . 41 2.8 MISCHEN UND KONZENTRIEREN . 44 2.8.1 KONZENTRIEREN . 45 2.8.2 PUFFERWECHSEL . . 45 6 INHALT 3 AUFREINIGUNG VON NUKLEINSAEUREN 3.1 GEGENSPIELER ERFOLGREICHER DNA UND RNA-ISOLATIONEN . 59 3.1.1 NUKLEASEN . 59 3.1.2 SCHERKRAEFTE . 60 3.1.3 CHEMISCHE VERUNREINIGUNGEN . 60 3.1.4 EDTA UND ZWEIWERTIGE IONEN: DAS YIN UND YANG DER MOLEKULARBIOLOGIE . 61 3.2 EXTRAKTION VON NUKLEINSAEUREN . 62 3.3 DIE WEITERE AUFREINIGUNG DER DNA . 64 3.3.1 PHENOLEXTRAKTION . 64 3.3.2 ETHANOLFAELLUNG . 65 3.3.3 ISOPROPANOLFAELLUNG . 67 3.3.4 PEG-FAELHMG . 68 3.3.5 ENTFERNEN VON POLYSACCHARIDEN MIT CTAB . 68 3.3.6 TROPFENDIALYSE . 68 3.4 SILICA MATRICES . 69 3.4.1 VON NUKLEINSAEUREN UND SILICA MATRICES . 69 3.4.2 UEBERSICHT UEBER DEN EINSATZ VON KITS . 70 3.5 AUSGEWAEHLTE DNA AUFREINIGUNGSVERFAHREN . 71 3.5.1 DIE PLASMIDPRAEPARATION AUS E. 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COLI . 121 5.6 DER WEG ZUM KLONIERTEN GEN. . 123 5.7 DER UNGERICHTETE EINBAU EINER AMPLIFIZIERTEN DNA IN EINEN VEKTOR . 123 5.7.1 DIE KLONIERUNG UEBER EINE RESTRIKTIONSSTELLE . 124 5.7.2 TA-KLONIERUNG UND TOPO-CLONING 125 5.7.3 KLONIERUNG IN EIN LETAL-PLASMID . 126 5.7.4 ZYKLISCHE BLUNT END KLONIERUNG. . 126 5.8 DER GERICHTETE EINBAU VON DNA IN EINEN VEKTOR . 127 5.9 WENN ES MAL NICHT KLAPPT . 129 6 VEKTOREN 6.1 PLASMIDE . . . 132 6.8 KUENSTLICHE CHROMOSOME: YACS, BACS UND PACS . 148 6.2 KLONIERUNGSPLASMIDE . . 135 6.2.1 BLAU-WEISS-SCREENING . . 135 6.9 HEFEN ALS KLONIERUNGS UND 6.2.2 LETALVEKTOREN . . 138 EXPRESSIONSSYSTEM . 149 6.9.1 HEFE ALS MODELLORGANISMUS . 149 6.3 EXPRESSIONSPLASMIDE . . 139 6.9.2 VEKTOREN FUER HEFE . 151 6.3.1 PROMOTOREN FUER 6.9.3 TRANSFORMATION VON HEFE . 152 EXPRESSIONSVEKTOREN . . 140 6.3.2 WEITERE REGULATIVE SEQUENZEN . . 141 6.10 PFLANZEN ALS BIOREAKTOREN . 152 6.3.3 EXPRESSION IN DAS PERIPLASMA . . 141 6.10.1 DIE TRANSFORMATION VON PFLANZEN . 153 6.3.4 EINSCHLUSSKOERPERCHEN 6.10.2 TRANSIENTE [INCLUSION BODIES] . . 141 TRANSFORMATIONSVERFAHREN . 155 6.3.5 TAG-SEQUENZEN . . 142 6.11 DIE TRANSFORMATION 6.4 REPORTERGENE . . 142 VON SAEUGETIEREN UND TIERISCHEN ZELLKULTUREN . 156 6.5 PHAGEN . . 146 6.11.1 SAEUGETIERE ALS MODELLORGANISMEN . 156 6.11.2 SAEUGER-ZELLKULTUREN . 157 6.6 PHAGEMIDE . . 147 6.11.3 VEKTOREN FUER TIERISCHE ZELLEN . 158 6.11.4 TRANSFEKTION TIERISCHER 6.7 SHUTTLE-VEKTOREN . . 147 ZELLKULTUREN . 159 8 I INHALT 7 ELEKTROPHORESE UND HYBRIDISIERUNG VON NUKLEINSAEUREN 7.1 AGAROSE-GELELEKTROPHORESE VON DNA . 162 7.2. DIE DETEKTION DER DNA IM GEL . 167 7.3 PRAEPARATIVE AGAROSEGELE . 169 7.4 AUFTRENNEN VON RNA IM AGAROSEGEL . 170 7.5 FEHLERSUCHE BEI AGAROSE GELELEKTROPHORESE . 170 7.6 HYBRIDISIERUNG VON NUKLEINSAEUREN . 171 7.6.1 SOUTHERN UND NORTHERN BLOT . 173 7.6.2 HERSTELLUNG DER SONDE UND HYBRIDISIERUNG . 174 7.7 MICROARRAYS . 174 8 FORTGESCHRITTENE KLONIERUNG 8.1 KLONSAMMLUNGEN UND SYNTHETISCHE GENE . . 179 8.6 BIOBRICKS . 189 8.1.1 KLONSAMMLUNGEN . . 180 8.7 NAHTLOSE 8.1.2 SYNTHETISCHE GENE UND KLONIERUNGSVERFAHREN . 189 GENFRAGMENTE . . 180 8.7.1 GOLDEN GATE KLONIERUNG . 190 8.7.2 CUT-LIGATION VERFAHREN . 191 8.2 REKOMBINASE-BASIERTE 8.7.3 MULTIPLE INSERTIONEN MITTELS KLONIERUNG . . 181 8.7.4 GOLDEN GATE KLONIERUNG . GOLDEN GATE BASIERTE TOOL KITS AM 192 8.3 MUTAGENESEVERFAHREN . . 183 BEISPIEL DES MOCLO KITS . 192 8.4 PCR-BASIERTE 8.8 GIBSON ASSEMBLY . 195 KLONIERUNGSVERFAHREN: RF-CLONING UND OEPCR . . 186 8.9 VERGLEICH DER VERFAHREN . 198 8.5 SYNTHETISCHE BIOLOGIE . . 188 INHALT 9 9 PROTEINAUFREINIGUNG 9.1 HOMOGENISATION. . . . 203 9.5 QUANTIFIZIERUNG 9.1.1 PROTEASEN . . 204 VON PROTEINEN . . 217 9.1.2 PHENOLOXIDASEN . . 206 9.5.1 PROTEINBESTIMMUNG NACH BRADFORD . . 217 9.2 EXTRAKTION VON PROTEINEN . . 207 9.5.2 BCA-TEST . . 219 9.2.1 HOMOGENISATIONSPUFFER . . 207 9.5.3 WELCHEN TEST BENUTZEN? . . 220 9.2.2 ABTRENNEN VON ZELL UND GEWEBETRUEMMERN . . 208 9.6 AUFREINIGUNGSVERFAHREN 9.2.3 FRAKTIONIERUNG DES ROHEXTRAKTS 208 FUER GETAGGTE PROTEINE AUS E. COLI . . 221 9.3 DIALYSE UND KONZENTRIERUNG . .211 9.6.1 BAKTERIENANZUCHT UND HOMOGENISATION . . 222 9.4 WEITERE 9.6.2 WEITERE AUFREINIGUNG DES AUFREINIGUNGSSCHRITTE . . 212 HETEROLOGEN PROTEINS . . 224 9.4.1 CHROMATOGRAPHIE . . 213 9.4.2 CHROMATOGRAPHISCHE TRENNPRINZIPIEN . . 215 9.4.3 MAGNETIC BEADS . . 216 10 GELELEKTROPHORESE VON PROTEINEN 10.1 DIE POLYACRYLAMID GELELEKTROPHORESE (PAGE) . 229 10.4 WEITERE ELEKTROPHORESE VERFAHREN FUER PROTEINE . . 239 10.4.1 NATIVE PAGE. . 239 10.2 DIE DENATURIERENDE 10.4.2 ISOELEKTRISCHE FOKUSSIERUNG. . . 239 SDS-PAGE . 229 10.4.3 2-D-GELELEKTROPHORESE . . 239 10.2.1 HERSTELLUNG EINES PROTEINEXTRAKTS FUER DIE SDS-GELELEKTROPHORESE . 229 10.5 WESTERN BLOTTING . . 241 10.2.2 HERSTELLEN DES GELS . 232 10.2.3 DER GELLAUF . 235 10.6 MASSENSPEKTROMETRISCHE VERFAHREN . . 246 10.3 DAS FAERBEN DER GELE . 237 10 INHALT 11 IMMUNBIOCHEMISCHE METHODEN 11.1 ANTIKOERPER . . 251 11.3 ELISA . 261 11.3.1 SANDWICH-ELISA . 263 11.2 PRINZIPIEN IMMUN- 11.3.2 KOMPETITIVER ELISA . 265 BIOCHEMISCHER VERFAHREN . . 254 11.2.1 IMMUNPRAEZIPITATION . . 254 11.4 IMMUNFAERBUNG NACH 11.2.2 TRAEGERBASIERTE IMMUNFAERBUNG . . 256 WESTERN BLOT . 266 11.2.3 IMMOBILISIERUNG DES ANTIGENS . . 257 11.2.4 BLOCKEN UEBERSCHUESSIGER 11.5 IMMUNAFFINITAETS BINDESTELLEN . . 257 CHROMATOGRAPHIE . 269 11.2.5 DETEKTION DER BINDUNG . . 257 11.2.6 ANTIKOERPER-KASKADEN . . 259 11.6 WEITERE ANTIKOERPER 11.2.7 SPEZIFISCHE UND BASIERTE METHODEN . 270 UNSPEZIFISCHE BINDUNGEN . . 260 11.6.1 REKOMBINANTE ANTIKOERPER . 270 11.6.2 PHAGE DISPLAY UND SCFV . 271 11.6.3 IMMUNHISTOCHEMISCHE VERFAHREN . 273 11.6.4 MARKIERUNG VON ZELLEN . 274 12 FORTGESCHRITTENE VERFAHREN 12.1 DNA-SEQUENZIERUNG . 278 12.4 ANALYSE DER GENFUNKTION . . 286 12.1.1 SEQUENZIERUNG NACH SANGER . 278 12.4.1 REVERSE GENETIK UND 12.1.2 HERSTELLEN VON PROBEN FUER GENE TARGETING . . . 286 DIE DNA-SEQUENZIERUNG . 280 12.4.2 RNAI . . 287 12.4.3 DURCHFUEHRUNG VON 12.2 NEXT GENERATION SIRNA-EXPERIMENTEN . . 288 SEQUENZIERUNG . 281 12.5 GENOM EDITIERUNG . . 289 12.3 VON DEN YYOMICS " ZUR SYSTEMBIOLOGIE . 285 13 BIOINFORMATIK 13.1 DATENBANKEN . 296 13.2 DATEIFORMATE . 298 13.3 SEQUENZSUCHE ANHAND VON STICHWOERTERN (ENTREZ) . 300 13.4 SEQUENZSUCHE MIT EINER SEQUENZ (BLAST) . 300 13.5 BIOINFORMATIK ZUR PLANUNG DER LABORARBEIT . 305 INHALT I 11 14 ANHANG AL SICHERHEIT IM LABOR . 308 A2 DIE 10 GOLDENEN LABORREGELN . 309 A3 DAS LABORBUCH UND DIE FINALE ARBEIT . 311 VERZEICHNIS DER YYGUT ZU WISSEN " -BOXEN . 313 ABBILDUNGSVERZEICHNIS . 314 VERZEICHNIS DER MAPS . 316 VERZEICHNIS DER PROTOKOLLE . 316 TABELLENVERZEICHNIS . 317 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS . 318 SACHVERZEICHNIS . 321 QUELLENVERZEICHNIS . 328
adam_txt	5 INHALT VORWORT ZUR 1. AUFLAGE . 12 VORWORT ZUR 2. AUFLAGE . 13 VORWORT ZUR 3. AUFLAGE . 13 1 DAS LEBEN UND SEINE BESTANDTEILE 1.1 DER AUFBAU VON DNA UND RNA . 17 1.4 PROTEINE . . 26 1.5 DIE ZELLE . . 30 1.2 DER GENETISCHE CODE . 20 1.3 DIE GENE . 22 1.3.1 DIE GENSTRUKTUR IN PROKARYOTEN . 22 1.3.2 GENSTRUKTUR IN EUKARYOTEN . 24 2 GRUNDLAGEN DER ARBEIT IM LABOR 2.1 WASSER . , 34 2.9 PROBENLAGERUNG . . 46 2.2 MESSUNG DES PH-WERTS . . 35 2.10 STERILES ARBEITEN . . 46 2.3 PUFFER . . 36 2.11 GERAETE FUER DEN AUFSCHLUSS VON GEWEBEN . . 49 2.4 WAAGEN . , 36 2.12 PFLEGE UND AUFZUCHT 2.5 MIKROPIPETTEN . . 38 VON ESCHERICHIA COLI . . 51 2.12.1 NAEHRMEDIEN . . 52 2.6 GEFAESSE IM LABOR . . 40 2.12.2 ANTIBIOTIKA . . 53 2.12.3 LAGERUNG VON BAKTERIEN . . 55 2.7 ZENTRIFUGEN . . 41 2.8 MISCHEN UND KONZENTRIEREN . 44 2.8.1 KONZENTRIEREN . 45 2.8.2 PUFFERWECHSEL . . 45 6 INHALT 3 AUFREINIGUNG VON NUKLEINSAEUREN 3.1 GEGENSPIELER ERFOLGREICHER DNA UND RNA-ISOLATIONEN . 59 3.1.1 NUKLEASEN . 59 3.1.2 SCHERKRAEFTE . 60 3.1.3 CHEMISCHE VERUNREINIGUNGEN . 60 3.1.4 EDTA UND ZWEIWERTIGE IONEN: DAS YIN UND YANG DER MOLEKULARBIOLOGIE . 61 3.2 EXTRAKTION VON NUKLEINSAEUREN . 62 3.3 DIE WEITERE AUFREINIGUNG DER DNA . 64 3.3.1 PHENOLEXTRAKTION . 64 3.3.2 ETHANOLFAELLUNG . 65 3.3.3 ISOPROPANOLFAELLUNG . 67 3.3.4 PEG-FAELHMG . 68 3.3.5 ENTFERNEN VON POLYSACCHARIDEN MIT CTAB . 68 3.3.6 TROPFENDIALYSE . 68 3.4 SILICA MATRICES . 69 3.4.1 VON NUKLEINSAEUREN UND SILICA MATRICES . 69 3.4.2 UEBERSICHT UEBER DEN EINSATZ VON KITS . 70 3.5 AUSGEWAEHLTE DNA AUFREINIGUNGSVERFAHREN . 71 3.5.1 DIE PLASMIDPRAEPARATION AUS E. COLI . 71 3.5.2 DIE ISOLATION VON DNA AUS PFLANZEN MIT CTAB . 72 3.5.3 ISOLATION VON DNA AUS BLUT ODER ZELLKULTUREN . 74 3.5.4 ISOLATION HOCHMOLEKULARER DNA . 75 3.6 DIE ISOLATION VON RNA . 76 3.7 TIPPS ZUM ERZIELEN HOHER AUSBEUTEN BEI DER ISOLATION VON NUKLEINSAEUREN . 78 3.8 QUANTIFIZIERUNG VON NUKLEINSAEUREN . 79 3.8.1 DNA-BESTIMMUNG IM PHOTOMETER . 79 3.8.2 KONZENTRATIONSBESTIMMUNG MITTELS OPTISCHER DICHTE . 81 4 POLYMERASE-KETTENREAKTION 4.1 PRINZIP DER POLYMERASE- KETTENREAKTION . 85 4.5.2 4.5.3 GRADIENTEN-PCR UND TOUCH-DOWN PCR . NESTED PCR . 4.2 4.2.1 4.2.2 4.2.3 4.2.4 DIE KOMPONENTEN DER PCR . DIE AUSGANGS-DNA . THERMOSTABILE DNA-POLYMERASEN . PUFFER, MAGNESIUM UND DNTPS . PRIMER . 86 86 86 89 91 4.5.4 4.5.5 4.5.6 MULTIPLEXPCR . EINFUHREN VON RESTRIKTIONSSCHNITTSTELLEN . REVERSE TRANSKRIPTIONS-PCR (RT-PCR) . 4.5.7 KOLONIE-PCR . 4.3 GERAETE FUER DIE PCR . 93 4.5.8 QUANTITATIVE PCR . 4.4 DIE STANDARD-PCR . 94 4.6 ANWENDUNGEN DER PCR . 4.5 AUSGEWAEHLTE PCR-METHODEN . 94 4.7 OPTIMIERUNG DER PCR-REAKTION . 4.5.1 TWO-STEP PCR . 94 96 97 97 98 99 102 103 105 105 INHALT I 7 5 KLONIEREN FUER EINSTEIGER 5.1 RESTRIKTIONSENZYME . 109 5.1.1 RESTRIKTIONSENZYME DES TYPS II. . 110 5.1.2 RESTRIKTIONSENZYME IM LABOR . 113 5.1.3 METHYLASEN UND TYP IIM-ENZYME . 115 5.1.4 TYP IIS-ENZYME . 116 5.2 LIGATION . 116 5.3 (DE)PHOSPHORYLIERUNG VON DNA . 118 5.3.1 DEPHOSPHORYLIERUNG . 118 5.3.2 PHOSPHORYLIERUNG . 119 5.4 ENZYME FUER SPEZIELLE AUFGABEN . 121 5.5 DIE TRANSFORMATION VON E. COLI . 121 5.6 DER WEG ZUM KLONIERTEN GEN. . 123 5.7 DER UNGERICHTETE EINBAU EINER AMPLIFIZIERTEN DNA IN EINEN VEKTOR . 123 5.7.1 DIE KLONIERUNG UEBER EINE RESTRIKTIONSSTELLE . 124 5.7.2 TA-KLONIERUNG UND TOPO-CLONING 125 5.7.3 KLONIERUNG IN EIN LETAL-PLASMID . 126 5.7.4 ZYKLISCHE BLUNT END KLONIERUNG. . 126 5.8 DER GERICHTETE EINBAU VON DNA IN EINEN VEKTOR . 127 5.9 WENN ES MAL NICHT KLAPPT . 129 6 VEKTOREN 6.1 PLASMIDE . . . 132 6.8 KUENSTLICHE CHROMOSOME: YACS, BACS UND PACS . 148 6.2 KLONIERUNGSPLASMIDE . . 135 6.2.1 BLAU-WEISS-SCREENING . . 135 6.9 HEFEN ALS KLONIERUNGS UND 6.2.2 LETALVEKTOREN . . 138 EXPRESSIONSSYSTEM . 149 6.9.1 HEFE ALS MODELLORGANISMUS . 149 6.3 EXPRESSIONSPLASMIDE . . 139 6.9.2 VEKTOREN FUER HEFE . 151 6.3.1 PROMOTOREN FUER 6.9.3 TRANSFORMATION VON HEFE . 152 EXPRESSIONSVEKTOREN . . 140 6.3.2 WEITERE REGULATIVE SEQUENZEN . . 141 6.10 PFLANZEN ALS BIOREAKTOREN . 152 6.3.3 EXPRESSION IN DAS PERIPLASMA . . 141 6.10.1 DIE TRANSFORMATION VON PFLANZEN . 153 6.3.4 EINSCHLUSSKOERPERCHEN 6.10.2 TRANSIENTE [INCLUSION BODIES] . . 141 TRANSFORMATIONSVERFAHREN . 155 6.3.5 TAG-SEQUENZEN . . 142 6.11 DIE TRANSFORMATION 6.4 REPORTERGENE . . 142 VON SAEUGETIEREN UND TIERISCHEN ZELLKULTUREN . 156 6.5 PHAGEN . . 146 6.11.1 SAEUGETIERE ALS MODELLORGANISMEN . 156 6.11.2 SAEUGER-ZELLKULTUREN . 157 6.6 PHAGEMIDE . . 147 6.11.3 VEKTOREN FUER TIERISCHE ZELLEN . 158 6.11.4 TRANSFEKTION TIERISCHER 6.7 SHUTTLE-VEKTOREN . . 147 ZELLKULTUREN . 159 8 I INHALT 7 ELEKTROPHORESE UND HYBRIDISIERUNG VON NUKLEINSAEUREN 7.1 AGAROSE-GELELEKTROPHORESE VON DNA . 162 7.2. DIE DETEKTION DER DNA IM GEL . 167 7.3 PRAEPARATIVE AGAROSEGELE . 169 7.4 AUFTRENNEN VON RNA IM AGAROSEGEL . 170 7.5 FEHLERSUCHE BEI AGAROSE GELELEKTROPHORESE . 170 7.6 HYBRIDISIERUNG VON NUKLEINSAEUREN . 171 7.6.1 SOUTHERN UND NORTHERN BLOT . 173 7.6.2 HERSTELLUNG DER SONDE UND HYBRIDISIERUNG . 174 7.7 MICROARRAYS . 174 8 FORTGESCHRITTENE KLONIERUNG 8.1 KLONSAMMLUNGEN UND SYNTHETISCHE GENE . . 179 8.6 BIOBRICKS . 189 8.1.1 KLONSAMMLUNGEN . . 180 8.7 NAHTLOSE 8.1.2 SYNTHETISCHE GENE UND KLONIERUNGSVERFAHREN . 189 GENFRAGMENTE . . 180 8.7.1 GOLDEN GATE KLONIERUNG . 190 8.7.2 CUT-LIGATION VERFAHREN . 191 8.2 REKOMBINASE-BASIERTE 8.7.3 MULTIPLE INSERTIONEN MITTELS KLONIERUNG . . 181 8.7.4 GOLDEN GATE KLONIERUNG . GOLDEN GATE BASIERTE TOOL KITS AM 192 8.3 MUTAGENESEVERFAHREN . . 183 BEISPIEL DES MOCLO KITS . 192 8.4 PCR-BASIERTE 8.8 GIBSON ASSEMBLY . 195 KLONIERUNGSVERFAHREN: RF-CLONING UND OEPCR . . 186 8.9 VERGLEICH DER VERFAHREN . 198 8.5 SYNTHETISCHE BIOLOGIE . . 188 INHALT 9 9 PROTEINAUFREINIGUNG 9.1 HOMOGENISATION. . . . 203 9.5 QUANTIFIZIERUNG 9.1.1 PROTEASEN . . 204 VON PROTEINEN . . 217 9.1.2 PHENOLOXIDASEN . . 206 9.5.1 PROTEINBESTIMMUNG NACH BRADFORD . . 217 9.2 EXTRAKTION VON PROTEINEN . . 207 9.5.2 BCA-TEST . . 219 9.2.1 HOMOGENISATIONSPUFFER . . 207 9.5.3 WELCHEN TEST BENUTZEN? . . 220 9.2.2 ABTRENNEN VON ZELL UND GEWEBETRUEMMERN . . 208 9.6 AUFREINIGUNGSVERFAHREN 9.2.3 FRAKTIONIERUNG DES ROHEXTRAKTS 208 FUER GETAGGTE PROTEINE AUS E. COLI . . 221 9.3 DIALYSE UND KONZENTRIERUNG . .211 9.6.1 BAKTERIENANZUCHT UND HOMOGENISATION . . 222 9.4 WEITERE 9.6.2 WEITERE AUFREINIGUNG DES AUFREINIGUNGSSCHRITTE . . 212 HETEROLOGEN PROTEINS . . 224 9.4.1 CHROMATOGRAPHIE . . 213 9.4.2 CHROMATOGRAPHISCHE TRENNPRINZIPIEN . . 215 9.4.3 MAGNETIC BEADS . . 216 10 GELELEKTROPHORESE VON PROTEINEN 10.1 DIE POLYACRYLAMID GELELEKTROPHORESE (PAGE) . 229 10.4 WEITERE ELEKTROPHORESE VERFAHREN FUER PROTEINE . . 239 10.4.1 NATIVE PAGE. . 239 10.2 DIE DENATURIERENDE 10.4.2 ISOELEKTRISCHE FOKUSSIERUNG. . . 239 SDS-PAGE . 229 10.4.3 2-D-GELELEKTROPHORESE . . 239 10.2.1 HERSTELLUNG EINES PROTEINEXTRAKTS FUER DIE SDS-GELELEKTROPHORESE . 229 10.5 WESTERN BLOTTING . . 241 10.2.2 HERSTELLEN DES GELS . 232 10.2.3 DER GELLAUF . 235 10.6 MASSENSPEKTROMETRISCHE VERFAHREN . . 246 10.3 DAS FAERBEN DER GELE . 237 10 INHALT 11 IMMUNBIOCHEMISCHE METHODEN 11.1 ANTIKOERPER . . 251 11.3 ELISA . 261 11.3.1 SANDWICH-ELISA . 263 11.2 PRINZIPIEN IMMUN- 11.3.2 KOMPETITIVER ELISA . 265 BIOCHEMISCHER VERFAHREN . . 254 11.2.1 IMMUNPRAEZIPITATION . . 254 11.4 IMMUNFAERBUNG NACH 11.2.2 TRAEGERBASIERTE IMMUNFAERBUNG . . 256 WESTERN BLOT . 266 11.2.3 IMMOBILISIERUNG DES ANTIGENS . . 257 11.2.4 BLOCKEN UEBERSCHUESSIGER 11.5 IMMUNAFFINITAETS BINDESTELLEN . . 257 CHROMATOGRAPHIE . 269 11.2.5 DETEKTION DER BINDUNG . . 257 11.2.6 ANTIKOERPER-KASKADEN . . 259 11.6 WEITERE ANTIKOERPER 11.2.7 SPEZIFISCHE UND BASIERTE METHODEN . 270 UNSPEZIFISCHE BINDUNGEN . . 260 11.6.1 REKOMBINANTE ANTIKOERPER . 270 11.6.2 PHAGE DISPLAY UND SCFV . 271 11.6.3 IMMUNHISTOCHEMISCHE VERFAHREN . 273 11.6.4 MARKIERUNG VON ZELLEN . 274 12 FORTGESCHRITTENE VERFAHREN 12.1 DNA-SEQUENZIERUNG . 278 12.4 ANALYSE DER GENFUNKTION . . 286 12.1.1 SEQUENZIERUNG NACH SANGER . 278 12.4.1 REVERSE GENETIK UND 12.1.2 HERSTELLEN VON PROBEN FUER GENE TARGETING . . . 286 DIE DNA-SEQUENZIERUNG . 280 12.4.2 RNAI . . 287 12.4.3 DURCHFUEHRUNG VON 12.2 NEXT GENERATION SIRNA-EXPERIMENTEN . . 288 SEQUENZIERUNG . 281 12.5 GENOM EDITIERUNG . . 289 12.3 VON DEN YYOMICS " ZUR SYSTEMBIOLOGIE . 285 13 BIOINFORMATIK 13.1 DATENBANKEN . 296 13.2 DATEIFORMATE . 298 13.3 SEQUENZSUCHE ANHAND VON STICHWOERTERN (ENTREZ) . 300 13.4 SEQUENZSUCHE MIT EINER SEQUENZ (BLAST) . 300 13.5 BIOINFORMATIK ZUR PLANUNG DER LABORARBEIT . 305 INHALT I 11 14 ANHANG AL SICHERHEIT IM LABOR . 308 A2 DIE 10 GOLDENEN LABORREGELN . 309 A3 DAS LABORBUCH UND DIE FINALE ARBEIT . 311 VERZEICHNIS DER YYGUT ZU WISSEN " -BOXEN . 313 ABBILDUNGSVERZEICHNIS . 314 VERZEICHNIS DER MAPS . 316 VERZEICHNIS DER PROTOKOLLE . 316 TABELLENVERZEICHNIS . 317 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS . 318 SACHVERZEICHNIS . 321 QUELLENVERZEICHNIS . 328
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spelling	Reinard, Thomas 1963- Verfasser (DE-588)113461046 aut Molekularbiologische Methoden Molekularbiologische Methoden 2.0 Thomas Reinard 3., aktualisierte Auflage Stuttgart Verlag Eugen Ulmer [2021] 328 Seiten Illustrationen, Diagramme txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier utb 8449 Methode (DE-588)4038971-6 gnd rswk-swf Molekularbiologie (DE-588)4039983-7 gnd rswk-swf Aufreinigung BAC DNA Elektrophorese Klonierungsstrategie Polymerasekettenreaktion RNA Genetik Proteine Laborarbeit Gewebe Aufreinigungsmethoden Nukleinsäure Polymerase Klonierung Immunbiologie immunbiochemische Verfahren PCR Studium Biologie Studium Mikrobiologie utb Lehrbuch 1100: Studien- und Arbeitsbücher 1550: Grundlagen (Bachelor) 1600: Vertiefung (Master) 2080: Biologie/Ökologie 2084: Mikrobiologie/Biochemie/Genetik (DE-588)4123623-3 Lehrbuch gnd-content (DE-588)4127380-1 Praktikum gnd-content Molekularbiologie (DE-588)4039983-7 s Methode (DE-588)4038971-6 s DE-604 Uni-Taschenbücher GmbH (DE-588)5161273-2 pbl Eugen-Ulmer-Verlag (DE-588)2009596-X pbl Erscheint auch als Online-Ausgabe 978-3-8385-8795-0 utb 8449 (DE-604)BV000895355 8449 DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=032724835&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis
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