Detektion von mutierten Onkogenen in vesikulärer und frei zirkulierender DNA zur Verbesserung der nicht invasiven Diagnostik bei Tumorerkrankungen:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Freiburg im Breisgau
[2020]
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | 92 Blätter Illustrationen, Diagramme 30 cm |
Internformat
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Datensatz im Suchindex
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|---|---|
| adam_text | 1
INHALTSVERZEICHNIS
1
INHALTSVERZEICHNIS
......................................................................................................................................
5
2
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
..........................................
.
..................................................................................
1
3
EINLEITUNG
....................................................................................................................................................
3
3.1
DIE
KARZINOGENESE
AUF
MOLEKULARER
EBENE
....................................................................................
3
3.1.1
ZELLZYKLUSVERAENDERUNGEN
WAEHREND
DER
KARZINOGENESE
.......................................................
3
3.1.2
DER
MAPK-SIGNALWEG:
SIGNALTRANSDUKTION
DURCH
PROTOONKOGENE
....................................
4
3.2
AKTUELLE
TUMORDIAGNOSTISCHE
VERFAHREN
........................................................................................
6
3.3
LIQUIDBIOPSY
IM
PATIENTENSCREENING
UND
THERAPIEMONITORING
...................................................
8
3.3.1
FREI
ZIRKULIERENDE
DNA
UND
IHRE
ROLLE
IN
DER
LIQUIDBIOPSY
.............................................
9
3.3.2
EXTRAZELLULAERE
VESIKEL
UND
IHRE
ROLLE
IN
DER
LIQUIDBIOPSY
..............................................
10
3.4
ZIEL
DER
ARBEIT
..................................................................................................................................
13
4
MATERIAL
.....................................................................................................................................................
15
4.1
INSTRUMENTE
......................................................................................................................................
15
4.2
VERBRAUCHSMATERIALIEN
....................................................................................................................
16
4.3
CHEMIKALIEN
UND
REAGENZIEN
........................................................................................................
16
4.4
KITS
....................................................................................................................................................
17
4.5
PUFFER
.................................................................................................................................................
17
4.6
ZELLLINIEN
........................................................................................................
17
5
METHODEN
..................................................................................................................................................
18
5.1
ZELLKULTUR
..........................................................................................................................................
18
5.1.1
MONOLAY
ER
ZELLKULTUR
.............................................................................................................
18
5.1.2
3D
ZELLKULTUR
..........................................................................................................................20
5.2
MATERIALGEWINNUNG
UND
LAGERUNG
VON
PATIENTENPROBEN
............................................................
22
5.3
ISOLATION
EXTRAZELLULAERER
VESIKEL
...................................................................................................
23
5.3.1
ISOLATION
VON
EVS
AUS
IN
VITRO
MATERIAL
DURCH
ULTRAZENTRIFUGATION
.................................
23
5.3.2
ISOLATION
VON
EVS
AUS
PATIENTENPROBEN
DURCH
ULTRAZENTRIFUGATION
..................................24
5.3.3
ISOLATION
VON
EVS
AUS
PATIENTENPROBEN
DURCH
PEG-PRAEZIPITATION
...................................
25
5.4
SEPARIEREN
UND
AUFKONZENTRIEREN
VON
FREI
ZIRKULIERENDER
DNA
...............................................
25
5.5
DNA
ISOLATION
UND
MESSUNG
DER
KONZENTRATION
........................................................................
27
5.5.1
DNA
ISOLATION
MIT
DEM
DNA
MICRO
KIT
VON
QUIAGEN
......................................................
27
5.5.2
DNA
ISOLATION
MIT
DEM
FREE
NUCLEID
ACID
KIT
QUIAGEN
....................................................
28
5.5.3
MESSUNG
DER DNA
KONZENTRATION
.......................................................................................
28
5.6
FRAGMENTANALYSE
.............................................................................................................................
29
5.7
DIGITALE
DROPLET
PCR
......................................................................................................................
30
5.8
NANOPARTIKEL
TRACKING
ANALYSE
....................................................................................................
33
5.9
DYNAMISCHE
LICHTSTREUUNG
............................................................................................................
35
5.10
TRANSMISSIONSELEKTRONENMIKROSKOPIE
...........................................................................................
35
6
ERGEBNISSE
........................................................................
37
6.1
SEPARIERUNG
EXTRAZELLULAERER
VESIKEL
UND
FREI
ZIRKULIERENDER
DNA
.............................................
37
6.1.1
VERGLEICH
DER
GENUTZTEN
DNA
KITS
......................................................................................
37
6.1.2
ANALYSE
DER
SEPARIERTEN
FZDNA
DURCH
EINE
1000
KDA
SAEULE
VERSUS
EINER
300
KDA
SAEULE
37
6.1.3
ANALYSE
DER
SEPARIERTEN
FZDNA
DURCH
EINE
300
KDA
SAEULE
VERSUS
EINER
100
KDA
SAEULE
39
6.1.4
ANALYSE
DER
SEPARIERTEN
UND
AUFKONZENTRIERTEN
DNA
DURCH
KOMBINATION
EINER
300
KDA
SAEULE
UND
EINER
30
KDA
SAEULE
...............................................................................................................
42
6.2
VERGLEICH
UND
ANALYSE
DER
VESIKELAUSBEUTE
DURCH
PEG-PRAEZIPITATION
VERSUS
ULTRAZENTRIFUGATION
.....................................................................................................................................44
6.3
ANALYSE
DER
DNA
NACH
DNASE
UND
PROTEINASEK
VERDAU
..........................................................46
6.4
SENSITIVITAET
DER
DIGITALEN
DROPLET
PCR
..........................................................................................49
6.5
ANALYSE
DER
ISOLIERTEN
VESIKEL
UND
DNA
AUS
IN
VITRO
MATERIAL
................................................49
6.5.1
VERGLEICH
DER
VESIKELAUSBEUTE
UND
ANALYSE
DER
DNA
AUS
MONOLAYER
VERSUS
3D-
ZELLKULTUR49
6.6
ANALYSE
DER
ISOLIERTEN
VESIKEL
UND
DNA
AUS
PATIENTENPROBEN
.................................................
53
6.6.1
ANALYSE
DER
ISOLIERTEN
VESIKEL
UND
VESIKULAERER
UND
FZDNA
VON
MELANOMPATIENTEN....
53
6.6.2
ANALYSE
DER
ISOLIERTEN
VESIKEL
UND
VESIKULAERER
UND
FZDNA
VON
MASTOZYTOSEPATIENTEN56
7
DISKUSSION
................................................................................................................................................
59
7.1
ETABLIERUNG
DER METHODE
ZUR
SEPARIERUNG
UND
AUFKONZENTRIERUNG
FREI
ZIRKULIERENDER
DNA
VON
EXTRAZELLULAEREN
VESIKELN
.....................................................................................................................
59
7.2
ANALYSE
DER VESIKEL,
SOWIE
DER
VESIKULAEREN
UND
FREI
ZIRKULIERENDEN
DNA
NACH
ISOLATION
DURCH
ULTRAZENTRIFUGATION
ODER
PEG-PRAEZIPITATION
.................................................................................
60
7.3
FRAGMENTANALYSE
DER
ISOLIERTEN
DNA
NACH
DNASE
UND
PROTEINASEK-VERDAU
.........................
61
7.4
UEBERPRUEFUNG
DER
SENSITIVITAET
DER
DIGITALEN
DROPLET
PCR
DURCH
SPIKEN
.....................................
62
7.5
ANALYSE
DER
ISOLIERTEN
VESIKEL
SOWIE
DER
VESIKULAEREN
UND
FREI
ZIRKULIERENDEN
DNA
AUS
UNTERSUCHTEN
ZELLKULTUR-
UND
PATIENTENPROBEN
.........................................................................................
62
7.6
LIMITATIONEN
UND
METHODISCHE
EINSCHRAENKUNGEN
.......................................................................
65
7.7
AUSBLICK:
DIE
ZUKUNFT
DER
LIQUID
BIOPSY
.....................................................................................
66
8
ZUSAMMENFASSUNG
...................................................................................................................................
68
9
LITERATURVERZEICHNIS
................................................................................................................................
69
10
ABBILDUNGS-
UND
TABELLENVERZEICHNIS
.............................................................................................
78
10.1
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
....................................................................................................................
78
10.2
TABELLENVERZEICHNIS
.......................................................................................................................79
11
PUBLIKATION
............................................................................................................................................
80
12
LEBENSLAUF.
...........................................................................................................................................
81
13
EIDESSTATTLICHE
VERSICHERUNG
...............................................................................................................
82
14
ERKLAERUNG
ZUM
EIGENANTEIL
.................................................................................................................
83
15
DANKSAGUNG
...........................................................................................................................................
84
16
ANHANG
.................................................................................................................................................
85
|
| adam_txt |
1
INHALTSVERZEICHNIS
1
INHALTSVERZEICHNIS
.
5
2
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
.
.
1
3
EINLEITUNG
.
3
3.1
DIE
KARZINOGENESE
AUF
MOLEKULARER
EBENE
.
3
3.1.1
ZELLZYKLUSVERAENDERUNGEN
WAEHREND
DER
KARZINOGENESE
.
3
3.1.2
DER
MAPK-SIGNALWEG:
SIGNALTRANSDUKTION
DURCH
PROTOONKOGENE
.
4
3.2
AKTUELLE
TUMORDIAGNOSTISCHE
VERFAHREN
.
6
3.3
LIQUIDBIOPSY
IM
PATIENTENSCREENING
UND
THERAPIEMONITORING
.
8
3.3.1
FREI
ZIRKULIERENDE
DNA
UND
IHRE
ROLLE
IN
DER
LIQUIDBIOPSY
.
9
3.3.2
EXTRAZELLULAERE
VESIKEL
UND
IHRE
ROLLE
IN
DER
LIQUIDBIOPSY
.
10
3.4
ZIEL
DER
ARBEIT
.
13
4
MATERIAL
.
15
4.1
INSTRUMENTE
.
15
4.2
VERBRAUCHSMATERIALIEN
.
16
4.3
CHEMIKALIEN
UND
REAGENZIEN
.
16
4.4
KITS
.
17
4.5
PUFFER
.
17
4.6
ZELLLINIEN
.
17
5
METHODEN
.
18
5.1
ZELLKULTUR
.
18
5.1.1
MONOLAY
ER
ZELLKULTUR
.
18
5.1.2
3D
ZELLKULTUR
.20
5.2
MATERIALGEWINNUNG
UND
LAGERUNG
VON
PATIENTENPROBEN
.
22
5.3
ISOLATION
EXTRAZELLULAERER
VESIKEL
.
23
5.3.1
ISOLATION
VON
EVS
AUS
IN
VITRO
MATERIAL
DURCH
ULTRAZENTRIFUGATION
.
23
5.3.2
ISOLATION
VON
EVS
AUS
PATIENTENPROBEN
DURCH
ULTRAZENTRIFUGATION
.24
5.3.3
ISOLATION
VON
EVS
AUS
PATIENTENPROBEN
DURCH
PEG-PRAEZIPITATION
.
25
5.4
SEPARIEREN
UND
AUFKONZENTRIEREN
VON
FREI
ZIRKULIERENDER
DNA
.
25
5.5
DNA
ISOLATION
UND
MESSUNG
DER
KONZENTRATION
.
27
5.5.1
DNA
ISOLATION
MIT
DEM
DNA
MICRO
KIT
VON
QUIAGEN
.
27
5.5.2
DNA
ISOLATION
MIT
DEM
FREE
NUCLEID
ACID
KIT
QUIAGEN
.
28
5.5.3
MESSUNG
DER DNA
KONZENTRATION
.
28
5.6
FRAGMENTANALYSE
.
29
5.7
DIGITALE
DROPLET
PCR
.
30
5.8
NANOPARTIKEL
TRACKING
ANALYSE
.
33
5.9
DYNAMISCHE
LICHTSTREUUNG
.
35
5.10
TRANSMISSIONSELEKTRONENMIKROSKOPIE
.
35
6
ERGEBNISSE
.
37
6.1
SEPARIERUNG
EXTRAZELLULAERER
VESIKEL
UND
FREI
ZIRKULIERENDER
DNA
.
37
6.1.1
VERGLEICH
DER
GENUTZTEN
DNA
KITS
.
37
6.1.2
ANALYSE
DER
SEPARIERTEN
FZDNA
DURCH
EINE
1000
KDA
SAEULE
VERSUS
EINER
300
KDA
SAEULE
37
6.1.3
ANALYSE
DER
SEPARIERTEN
FZDNA
DURCH
EINE
300
KDA
SAEULE
VERSUS
EINER
100
KDA
SAEULE
39
6.1.4
ANALYSE
DER
SEPARIERTEN
UND
AUFKONZENTRIERTEN
DNA
DURCH
KOMBINATION
EINER
300
KDA
SAEULE
UND
EINER
30
KDA
SAEULE
.
42
6.2
VERGLEICH
UND
ANALYSE
DER
VESIKELAUSBEUTE
DURCH
PEG-PRAEZIPITATION
VERSUS
ULTRAZENTRIFUGATION
.44
6.3
ANALYSE
DER
DNA
NACH
DNASE
UND
PROTEINASEK
VERDAU
.46
6.4
SENSITIVITAET
DER
DIGITALEN
DROPLET
PCR
.49
6.5
ANALYSE
DER
ISOLIERTEN
VESIKEL
UND
DNA
AUS
IN
VITRO
MATERIAL
.49
6.5.1
VERGLEICH
DER
VESIKELAUSBEUTE
UND
ANALYSE
DER
DNA
AUS
MONOLAYER
VERSUS
3D-
ZELLKULTUR49
6.6
ANALYSE
DER
ISOLIERTEN
VESIKEL
UND
DNA
AUS
PATIENTENPROBEN
.
53
6.6.1
ANALYSE
DER
ISOLIERTEN
VESIKEL
UND
VESIKULAERER
UND
FZDNA
VON
MELANOMPATIENTEN.
53
6.6.2
ANALYSE
DER
ISOLIERTEN
VESIKEL
UND
VESIKULAERER
UND
FZDNA
VON
MASTOZYTOSEPATIENTEN56
7
DISKUSSION
.
59
7.1
ETABLIERUNG
DER METHODE
ZUR
SEPARIERUNG
UND
AUFKONZENTRIERUNG
FREI
ZIRKULIERENDER
DNA
VON
EXTRAZELLULAEREN
VESIKELN
.
59
7.2
ANALYSE
DER VESIKEL,
SOWIE
DER
VESIKULAEREN
UND
FREI
ZIRKULIERENDEN
DNA
NACH
ISOLATION
DURCH
ULTRAZENTRIFUGATION
ODER
PEG-PRAEZIPITATION
.
60
7.3
FRAGMENTANALYSE
DER
ISOLIERTEN
DNA
NACH
DNASE
UND
PROTEINASEK-VERDAU
.
61
7.4
UEBERPRUEFUNG
DER
SENSITIVITAET
DER
DIGITALEN
DROPLET
PCR
DURCH
SPIKEN
.
62
7.5
ANALYSE
DER
ISOLIERTEN
VESIKEL
SOWIE
DER
VESIKULAEREN
UND
FREI
ZIRKULIERENDEN
DNA
AUS
UNTERSUCHTEN
ZELLKULTUR-
UND
PATIENTENPROBEN
.
62
7.6
LIMITATIONEN
UND
METHODISCHE
EINSCHRAENKUNGEN
.
65
7.7
AUSBLICK:
DIE
ZUKUNFT
DER
LIQUID
BIOPSY
.
66
8
ZUSAMMENFASSUNG
.
68
9
LITERATURVERZEICHNIS
.
69
10
ABBILDUNGS-
UND
TABELLENVERZEICHNIS
.
78
10.1
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
.
78
10.2
TABELLENVERZEICHNIS
.79
11
PUBLIKATION
.
80
12
LEBENSLAUF.
.
81
13
EIDESSTATTLICHE
VERSICHERUNG
.
82
14
ERKLAERUNG
ZUM
EIGENANTEIL
.
83
15
DANKSAGUNG
.
84
16
ANHANG
.
85 |
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