Kardiomyozytäre Effekte der Proprotein Konvertase Subtilisin/Kexin Typ 9 (PCSK9):
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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Giessen
VVB Laufersweiler Verlag
2020
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|---|---|
| adam_text | II Inhaltsverzeichnis
II Inhaltsverzeichnis
I Abkürzungsverzelchnis I
II Inhaltsverzeichnis VI
1 Einleitung 1
1 1 Das Säugetierherz „ 1
1 2 Die Physiologie der Kardiomyozyten ‚ 2
121 Elektromechanische Kopplung in Kardiomyozyten 4
122 Kontraktionsmessungen isolierter Kardiomyozyten 5
1 3 Herz-Kreislauf—Erkrankungen 6
131 Atherosklerose
132 Der Myokardinfarkt 9
133 Die Rolle von Angiotensin—Il im kardialen Remodeling 11
1 4 Proprotein Konvenase Subtilisin/Kexin Typ 9
141 Extrahepatische Funktionen von PCSK9 15
142 Loss-of-function Mutationen im PCSKQ-Gen 17
1 5 Arbeitshypothesen
2 Material an
2 1 Chemikalien 90
2 2 Geräte ‚ 23
221 Allgemein verwendete Geräte 2’;
222 Langendorff-Versuche „24
223 Isolation und Kultivierung der Kardiomyozyten „24
224 Kontraktionsmessungen „25
225 cDNA Synthese und qPCR ‚ „25
226 Western-Blot und Immunopräzipitation
2 3 Verbrauchsmaterialien ‚ 26
2 4 Computerprogramme 27
2 5 Antikörper 28
251 Primäre Antikörper 28
252 Sekundäre Antikörper 28
2 6 Primer
VI
II Inhaltsverzeichnis
2 7 Vektoren
„30
2,8 Small interfering RNA 30
2 9 ELISA
2 10 Versuchstiere
Methoden
3 1 Das isoliert perfundierte Mausherz
3 2 TriphenyI-Tetrazolium-Chlorid-Färbung (TTC)
3 3 Isolation und Kultivierung von adulten ventrikulären Kardiomyozyten 35
331 lsolation von adulten ventn‘kulären Kardiomyozyten „35
332 Kultivierung von adulten ventrikulären Kardiomyozyten „38
333 Small interfering RNA 41
334 lnfektion von Kardiomyozyten mit humanem PCSKS „41
3 4 Die Bestimmung der Iastfreien Zellverkürzung isolierter Kardiomyozyten 42
3 5 Apoptose-Nekrose-Nachweis „43
3 6 Quantitative Polymerase-Kettenreaktion (qPCR) 44
361 RNA—Isolation aus Gewebeproben i-- n44
362 RNA-Isolation aus Ratten—Kardiomyozyten 45
363 cDNA Synthese 45
364 qPCR ‚ 46
3 7 Westem—Blot Verfahren 47
371 Proteinisolation aus Kardiomyozyten 47
3-7-2 SI33 F“°l)’acrylamid GeI-Elektrophorese 48
373 Blot‘ting 49
374 Immunologisches Nachweisverfahren zur Proteindetektion ‚ 49
3 8 ELISA 50
3 9 Immunopräzipitation - 51
3-10 SPONtan hypertensive Ratten „53
3 11 Stan‘stische Auswertung „54
VII
II Inhaltsverzeichnis
4 Ergebnisse 55
4 1 PCSK9 in isollenen ventrikulären Kardiomyozyten der Ratte „55
411 Auswirkungen von oxLDL auf die Viabilität und das Kontraktionsverhalten von
Kardiomyozyten „60
412 Die Beteiligung von LOX-1 und PCSK9 an der oxLDL—induzierten Reduktion
der relativen Zellverkürzung ventrikulärer Kardiomyozyten
413 Der Einfluss von extrazellulärem humanem PCSK9 auf die lastfreie
Zellverkürzung ventrikulärer Kardiomyozyten „70
414 Der Einfluss von oxLDL auf das Kontraktionsverhalten von PCSK9—
Kardiomyozyten 75
4 2 PCSK9 unter pathophysiologischen Bedingungen 77
421 Die Rolle von PCSK9 bei der durch Angiotensin-Il induzierten kardialen
Dysfunktion 77
422 PCSK9 in spontan hypertensiven Ratten (SHR)
423 Die Rolle von PCSK9 im Modell eines Ischämie‘Reper‘fusions-schadens am
Isolierten Mausherz „83
5 Diskussion es
5 1 Die Charakterisierung von PCSK9 in adulten Kardiomyozyten der Ratte „95
5 2 OxLDL induziert eine Reduktion der kardiomyozytären Funktion 97
5 3 Die oxLDL-induzierte Reduktion der kardiomyozytären Funktion wird über PCSK9
vermittelt „99
5 4 Extrazelluläres PCSK9 beeinträchtigt das Kontraktions—verhalten adulter
ventrikulärer Kardiomyozyten 101
5 5 Zwischenfazit 103
5 6 PCSK9 unter pathophysiologischen Bedingungen 105
561 PCSK9 wird im Rahmen einer Ang-lI-induzierten Iinksventrikulären Dysfunktion
induziert „106
562 PCSK9 spielt eine Rolle bei dem lschämie—Reperfusionsschaden am isolierten
Mausherz „108
5 7 Fazit 112
6 Relevanz der Daten 114
7 7l e ‘ mg 115
8 Summary 117
VIII
|
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II Inhaltsverzeichnis
II Inhaltsverzeichnis
I Abkürzungsverzelchnis I
II Inhaltsverzeichnis VI
1 Einleitung 1
1 1 Das Säugetierherz „ 1
1 2 Die Physiologie der Kardiomyozyten ‚ 2
121 Elektromechanische Kopplung in Kardiomyozyten 4
122 Kontraktionsmessungen isolierter Kardiomyozyten 5
1 3 Herz-Kreislauf—Erkrankungen 6
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132 Der Myokardinfarkt 9
133 Die Rolle von Angiotensin—Il im kardialen Remodeling 11
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141 Extrahepatische Funktionen von PCSK9 15
142 Loss-of-function Mutationen im PCSKQ-Gen 17
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223 Isolation und Kultivierung der Kardiomyozyten „24
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252 Sekundäre Antikörper 28
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Methoden
3 1 Das isoliert perfundierte Mausherz
3 2 TriphenyI-Tetrazolium-Chlorid-Färbung (TTC)
3 3 Isolation und Kultivierung von adulten ventrikulären Kardiomyozyten 35
331 lsolation von adulten ventn‘kulären Kardiomyozyten „35
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3 4 Die Bestimmung der Iastfreien Zellverkürzung isolierter Kardiomyozyten 42
3 5 Apoptose-Nekrose-Nachweis „43
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361 RNA—Isolation aus Gewebeproben i-- n44
362 RNA-Isolation aus Ratten—Kardiomyozyten 45
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3 11 Stan‘stische Auswertung „54
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Kardiomyozyten „60
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Kardiomyozyten 75
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423 Die Rolle von PCSK9 im Modell eines Ischämie‘Reper‘fusions-schadens am
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