Prävalenz von Helicobacteraceae in subgingivalen Proben aus der menschlichen Mundhöhle:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Aachen
[2019]
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| Beschreibung: | VII, 94 Seiten Illustrationen, Diagramme 21 cm |
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Datensatz im Suchindex
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|---|---|
| adam_text | I.
INHALTSVERZEICHNIS
I.
INHALTSVERZEICHNIS
....................................................................................................................
I
II.
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
..........................................................................................................
IV
III.
TABELLENVERZEICHNIS
...............................................................................................................V
IV.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.........................................................................................................
VI
1
EINLEITUNG
.................................................................................................................................
1
1.1
DIE
ORALE
MIKROFLORA
................................................................................................
1
1.1.1
CHARAKTERISTIKA
DER
ORALEN
PARODONTOPATHOGENEN
FLORA
...............................
3
1.2
PARODONTITIS
.............................................................................................................
5
1.2.1
DEFINITION,
KLASSIFIKATION
UND
AETIOLOGIE
DER
PARODONTOPATHIEN
.................
5
1.2.2
PATHOGENESE
.....................................................................................................
6
1.3
NACHWEIS
PARODONTOPATHOGENER
KEIME
..................................................................
8
1.3.1
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)
...............................................................
10
1.3.2
DNA-SEQUENZIERUNG
......................................................................................
12
1.3.3
SSCP
(EINZELSTRANG
KONFORMATIONSPOLYMORPHISMUS
GELELEKTROPHORESE)
13
1.3.4
DAS
16S-RRNA-GEN
.....................................................................................
14
1.4
HELICOBACTERACEAE
..................................................................................................
15
1.4.1
HELICOBACTER
..................................................................................................
16
1.4.1.1
HELICOBACTER
PYLORI
...............................................................................
16
1.5
ZIELSETZUNG
...........................................................................................................
18
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.........................................................................................................
20
2.1
VERWENDETE
PROBEN
..............................................................................................20
2.1.1
PROBEN
VON
PATIENTEN
MIT
EINER
PARODONTITIS
..............................................
20
2.1.2
PROBEN
VON
PARODONTAL
GESUNDEN
PROBANDEN
.............................................20
2.2
CHEMIKALIEN,
GERAETE
UND
ANDERE
MATERIALIEN
.....................................................
21
2.2.1
CHEMIKALIEN
.................................................................................................
21
2.2.2
KITS
................................................................................................................
23
2.2.3
OLIGONUKLEOTIDE
(PRIMER)
.............................................................................
23
2.2.4
GERAETE
UND
VERBRAUCHSMATERIAL
...................................................................
24
2.2.5
SOFTWARE
UND
WEBSEITEN
..............................................................................
25
INHALTSVERZEICHNIS
2.3
METHODEN
............................................................................................................
26
2.3.1
DNA-ISOLIERUNG
............................................................................................
26
2.3.2
NESTED-PCR
..................................................................................................
27
2.3.2.1
PRE-PCR
................................................................................................
28
2.3.2.2
NESTED-PCR
.........................................................................................
29
2.3.3
SPIKING-VERSUCH
...........................................................................................
31
2.3.3.1
KLONIERUNG
............................................................................................
31
2.3.3.2
SPIKING-PCR
.........................................................................................
33
2.3.4
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
DER
PCR-PRODUKTE
.........................................
34
2.3.5
DNA-AUFREINIGUNG
.....................................................................................
34
2.3.6
EINZELSTRANG-KONFORMATIONSPOLYMORPHISMUS-GELELEKTROPHORESE
(SSCP-
GELELEKTROPHORESE)
.....................................................................................................
35
2.3.6.1
DNA-VORBEREITUNG
...............................................................................
35
2.3.6.2
GELVORBEREITUNG
UND
-LAUF
....................................................................
36
2.3.6.3
SILBERFARBUNG
NACH
BASSAM
..................................................................
37
2.3.7
REAMPLIFIZIERUNG
VON
SSCP-BANDEN
..........................................................
38
2.3.7.1
DNA-RUECKGEWINNUNG
..........................................................................
38
2.3.7.2
REAMPLIFIZIERUNGS-PCR
........................................................................
38
2.3.8
SEQUENZIERUNG
..............................................................................................
38
2.3.8.1
KETTENABBRUCHREAKTION
..........................................................................
39
2.3.8.2
ETHANOLFALLUNG
.......................................................................................40
2.3.8.3
SEQUENZIERUNG
.......................................................................................40
3
ERGEBNISSE
........................................................................................................................
3.1
VORVERSUCHE
(ZUR
PCR-OPTIMIERUNG)
.................................................................
41
3.1.1
ERMITTLUNG
PASSENDER
PRIMER
.......................................................................
41
3.1.2
ERMITTLUNG
OPTIMALER
PCR-BEDINGUNGEN
...................................................
43
3.1.2.1
PRE-PCR
(PRIMERPAAR
PF-1
/
EPS
914R)
..............................................
43
3.1.2.2
NESTED-PCR
(PRIMERPAAR
H-GSP-8F
/
H-GSP-9R)
.................................
44
3.1.3
BESTIMMUNG
DER
SENSITIVITAET
.......................................................................
45
3.2
NACHWEIS
VON
HELICOBACTERACEAE
IN
PATIENTENPROBEN
.......................................
46
41
II
INHALTSVERZEICHNIS
3.3
NACHWEIS
VERSCHIEDENER
SPEZIES
VON
HELICOBACTERACEAE
MITTELS
SSCP-
GELELEKTROPHORESE
UND
SEQUENZIERUNG
...........................................................................49
4
DISKUSSION
..............................................................................................................................
52
4.1
DIE
PCR
ALS
METHODE
ZUM
NACHWEIS
VON
HELICOBACTERACEAE
..........................
52
4.2
HELICOBACTERACEAE
IN
DER
MENSCHLICHEN
MUNDHOEHLE
........................................
55
4.3
DIE
GATTUNG
WOLINELLA
.........................................................................................
57
4.4
CANDIDATUS
WOLINELLA
AFRICANUS
UND
SEINE
ROLLE
IN
DER
MENSCHLICHEN
MUNDHOEHLE
.......................................................................................................................
58
4.5
HELICOBACTER
PYLORI
ALS
BESIEDLER
DER
MENSCHLICHEN
MUNDHOEHLE
....................
59
4.6
HELICOBACTERACEAE
UND
DER
ZAHNMEDIZINISCHE
BERUF
.........................................
61
5
ZUSAMMENFASSUNG
/
SUMMARY
.............................................................................................
64
SUMMARY
......................................................................................................................................
65
6
LITERATURVERZEICHNIS
..............................................................................................................
66
7
ANHANG
...................................................................................................................................
90
7.1
SEQUENZ
DER
IN
DIESER
ARBEIT
NACHGEWIESENEN
HELICOBACTERACEAE-SPEZIES
....
90
8
DANKSAGUNG
...........................................................................................................................
91
9
ERKLAERUNGEN
............................................................................................................................
92
9.1
ERKLAERUNG
§
5
ABS.
1
ZUR
DATENAUFBEWAHRUNG
...................................................
92
9.2
EIDESSTATTLICHE
ERKLAERUNG
GEMAESS
§
5
ABS.
(1)
UND
§
11
ABS.
(3)
12.
DER
PROMOTIONSORDNUNG
.........................................................................................................
93
10
LEBENSLAUF.
.............................................................................................................................
94
III
|
| adam_txt |
I.
INHALTSVERZEICHNIS
I.
INHALTSVERZEICHNIS
.
I
II.
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
.
IV
III.
TABELLENVERZEICHNIS
.V
IV.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
VI
1
EINLEITUNG
.
1
1.1
DIE
ORALE
MIKROFLORA
.
1
1.1.1
CHARAKTERISTIKA
DER
ORALEN
PARODONTOPATHOGENEN
FLORA
.
3
1.2
PARODONTITIS
.
5
1.2.1
DEFINITION,
KLASSIFIKATION
UND
AETIOLOGIE
DER
PARODONTOPATHIEN
.
5
1.2.2
PATHOGENESE
.
6
1.3
NACHWEIS
PARODONTOPATHOGENER
KEIME
.
8
1.3.1
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)
.
10
1.3.2
DNA-SEQUENZIERUNG
.
12
1.3.3
SSCP
(EINZELSTRANG
KONFORMATIONSPOLYMORPHISMUS
GELELEKTROPHORESE)
13
1.3.4
DAS
16S-RRNA-GEN
.
14
1.4
HELICOBACTERACEAE
.
15
1.4.1
HELICOBACTER
.
16
1.4.1.1
HELICOBACTER
PYLORI
.
16
1.5
ZIELSETZUNG
.
18
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.
20
2.1
VERWENDETE
PROBEN
.20
2.1.1
PROBEN
VON
PATIENTEN
MIT
EINER
PARODONTITIS
.
20
2.1.2
PROBEN
VON
PARODONTAL
GESUNDEN
PROBANDEN
.20
2.2
CHEMIKALIEN,
GERAETE
UND
ANDERE
MATERIALIEN
.
21
2.2.1
CHEMIKALIEN
.
21
2.2.2
KITS
.
23
2.2.3
OLIGONUKLEOTIDE
(PRIMER)
.
23
2.2.4
GERAETE
UND
VERBRAUCHSMATERIAL
.
24
2.2.5
SOFTWARE
UND
WEBSEITEN
.
25
INHALTSVERZEICHNIS
2.3
METHODEN
.
26
2.3.1
DNA-ISOLIERUNG
.
26
2.3.2
NESTED-PCR
.
27
2.3.2.1
PRE-PCR
.
28
2.3.2.2
NESTED-PCR
.
29
2.3.3
SPIKING-VERSUCH
.
31
2.3.3.1
KLONIERUNG
.
31
2.3.3.2
SPIKING-PCR
.
33
2.3.4
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
DER
PCR-PRODUKTE
.
34
2.3.5
DNA-AUFREINIGUNG
.
34
2.3.6
EINZELSTRANG-KONFORMATIONSPOLYMORPHISMUS-GELELEKTROPHORESE
(SSCP-
GELELEKTROPHORESE)
.
35
2.3.6.1
DNA-VORBEREITUNG
.
35
2.3.6.2
GELVORBEREITUNG
UND
-LAUF
.
36
2.3.6.3
SILBERFARBUNG
NACH
BASSAM
.
37
2.3.7
REAMPLIFIZIERUNG
VON
SSCP-BANDEN
.
38
2.3.7.1
DNA-RUECKGEWINNUNG
.
38
2.3.7.2
REAMPLIFIZIERUNGS-PCR
.
38
2.3.8
SEQUENZIERUNG
.
38
2.3.8.1
KETTENABBRUCHREAKTION
.
39
2.3.8.2
ETHANOLFALLUNG
.40
2.3.8.3
SEQUENZIERUNG
.40
3
ERGEBNISSE
.
3.1
VORVERSUCHE
(ZUR
PCR-OPTIMIERUNG)
.
41
3.1.1
ERMITTLUNG
PASSENDER
PRIMER
.
41
3.1.2
ERMITTLUNG
OPTIMALER
PCR-BEDINGUNGEN
.
43
3.1.2.1
PRE-PCR
(PRIMERPAAR
PF-1
/
EPS
914R)
.
43
3.1.2.2
NESTED-PCR
(PRIMERPAAR
H-GSP-8F
/
H-GSP-9R)
.
44
3.1.3
BESTIMMUNG
DER
SENSITIVITAET
.
45
3.2
NACHWEIS
VON
HELICOBACTERACEAE
IN
PATIENTENPROBEN
.
46
41
II
INHALTSVERZEICHNIS
3.3
NACHWEIS
VERSCHIEDENER
SPEZIES
VON
HELICOBACTERACEAE
MITTELS
SSCP-
GELELEKTROPHORESE
UND
SEQUENZIERUNG
.49
4
DISKUSSION
.
52
4.1
DIE
PCR
ALS
METHODE
ZUM
NACHWEIS
VON
HELICOBACTERACEAE
.
52
4.2
HELICOBACTERACEAE
IN
DER
MENSCHLICHEN
MUNDHOEHLE
.
55
4.3
DIE
GATTUNG
WOLINELLA
.
57
4.4
CANDIDATUS
WOLINELLA
AFRICANUS
UND
SEINE
ROLLE
IN
DER
MENSCHLICHEN
MUNDHOEHLE
.
58
4.5
HELICOBACTER
PYLORI
ALS
BESIEDLER
DER
MENSCHLICHEN
MUNDHOEHLE
.
59
4.6
HELICOBACTERACEAE
UND
DER
ZAHNMEDIZINISCHE
BERUF
.
61
5
ZUSAMMENFASSUNG
/
SUMMARY
.
64
SUMMARY
.
65
6
LITERATURVERZEICHNIS
.
66
7
ANHANG
.
90
7.1
SEQUENZ
DER
IN
DIESER
ARBEIT
NACHGEWIESENEN
HELICOBACTERACEAE-SPEZIES
.
90
8
DANKSAGUNG
.
91
9
ERKLAERUNGEN
.
92
9.1
ERKLAERUNG
§
5
ABS.
1
ZUR
DATENAUFBEWAHRUNG
.
92
9.2
EIDESSTATTLICHE
ERKLAERUNG
GEMAESS
§
5
ABS.
(1)
UND
§
11
ABS.
(3)
12.
DER
PROMOTIONSORDNUNG
.
93
10
LEBENSLAUF.
.
94
III |
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Inhaltsverzeichnis