Expression des Transkriptionsfaktors Hand2 während der Dezidualisierung humaner endometrialer Stromazellen in vitro in Korrelation zu Expression und Sekretion von Fibroblasten-Wachstumsfaktoren:
Gespeichert in:
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| Veröffentlicht: |
Aachen
[2020?]
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
...................................................................................................
IV
1
EINLEITUNG
......................................................................................................................
1
1.1
ANATOMIE
DES
UTERUS
UND
DES
ENDOMETRIUMS
.....................................................
2
1.2
MENSTRUATIONSZYKLUS
............................................................................................
4
1.3
BILDUNG
UND
WIRKUNGSWEISE
DER
STEROIDHORMONE
................................................
7
1.3.1
ESTRADIOL
........................................................................................................
7
1.3.2
PROGESTERON
...................................................................................................
9
1.3.3
MEDROXYPROGESTERONACETAT
..........................................................................
9
1.4
WIRKUNGSWEISE
UND
BILDUNG
VON
CYCLISCHEM
ADENOSINMONOPHOSPHAT
..........
10
1.5
ESTROGEN-
UND
PROGESTERONREZEPTOREN
DES
ENDOMETRIUMS
.................................
10
1.6
DEZIDUALISIERUNG
..................................................................................................
12
1.6.1
MORPHOLOGISCHE
TRANSFORMATION
IM
LAUFE
DER
DEZIDUALISIERUNG
.............
12
1.6.2
SEKRETORISCHE
TRANSFORMATION
IM
LAUFE
DER
DEZIDUALISIERUNG
.................
12
1.6.3
HAND2,
EIN
TRANSKRIPTIONSFAKTOR
DER
DEZIDUALISIERUNG
.............................
13
1.6.4
DEZIDUALISIERUNG
UND
FGF-SEKRETION/-EXPRESSION
....................................
15
1.7
IN-VITRO
MODELL
.....................................................................................................
18
2
ZIELSETZUNG
.................................................................................................................
19
3
MATERIAL
UND
METHODEN
...........................................................................................
20
3.1
ZELLKULTUR
.............................................................................................................
20
3.1.1
TELOMERASE
TRANSFORMED
HUMAN
ENDOMETRIAL
STROMAL
CELLS
(THESCS)...2O
3.1.2
KONSERVIERUNG
DER
ZELLEN
..........................................................................
20
3.1.3
KULTIVIERUNG
DER
THESCS
VOR
DEM
VERSUCHSSTART
...................................
21
3.1.4
PASSAGIEREN
DER
THESCS
...........................................................................
22
3.1.5
QUANTIFIZIERUNG
DER
THESCS
....................................................................
24
3.1.6
HORMONBEHANDLUNG
DER
THESCS
.............................................................
24
3.1.7
SAMMLUNG
DER
ZELLEN
UND
DER
ZELLKULTURUEBERSTAENDE
................................
27
3.1.8
DOKUMENTATION
DER
MORPHOLOGISCHEN
VERAENDERUNGEN
............................
28
3.2
IMMUNFLUORESZENZ
..............................................................................................
28
3.3
REAL
TIME
REVERSE-TRANSKRIPTASE
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(RT-PCR)
.....
33
3.3.1
ZELLAUFSCHLUSS
UND
RNA-ISOLIERUNG
..........................................................
33
3.3.2
BESTIMMUNG
DER
RNA-KONZENTRATION
.......................................................
33
3.3.3
CDNA
SYNTHESE
...........................................................................................
33
3.3.4
REAL
TIME
RT-PCR
.......................................................................................
36
3.4
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
DER
ZELLKULTURUEBERSTAENDE
....................................
38
3.4.1
PROLAKTIN
......................................................................................................40
3.4.2
FGF1
............................................................................................................40
3.4.3
FGF2
............................................................................................................
41
3.4.4
FGF18
..........................................................................................................
41
3.5
AUSWERTUNG
..........................................................................................................
42
3.5.1
MIKROSKOPIE
UND
FOTODOKUMENTATION
.......................................................
42
3.5.2
BILDBEARBEITUNG
...........................................................................................
42
3.5.3
PROGRAMME
..................................................................................................42
3.5.4
STATISTIK
........................................................................................................
43
4
ERGEBNISSE
...................................................................................................................
44
4.1
ERGEBNISSE
DER
ZELLKULTUR:
MORPHOLOGISCHE
TRANSFORMATION
DER
THESCS
44
4.2
ERGEBNISSE
DER
IMMUNFLUORESZENZMARKIERUNG:
NACHWEIS
VON
HAND2
..........
55
4.3
ERGEBNISSE
DER
REAL
TIME
REVERSE-TRANSKRIPTASE-POLYMERASE-KETTENREAKTION
(RT-PCR)
.........................................................................................................................
71
4.3.1
PROLAKTIN-GENEXPRESSION
............................................................................
73
4.3.2
HAND2-GENEXPRESSION
................................................................................
74
4.3.3
F
GF
1
-GENEXPRESSION
..................................................................................
75
4.3.4
FGF2-GENEXPRESSION
..................................................................................
76
4.4
ERGEBNISSE
DER
ENZYM-LINKED
IMMUNOSORBENT
ASSAYS
(ELISA)
.....................
77
4.4.1
PROLAKTIN-SEKRETION
.....................................................................................
78
4.4.2
FGF1-SEKRETION
...........................................................................................
81
4.4.3
FGF2-SEKRETION
...........................................................................................
84
4.4.4
FGF18-SEKRETION
.........................................................................................
87
5
DISKUSSION
...................................................................................................................90
5.1
AUSWIRKUNGEN
DER
HORMONE
AUF
DIE
MORPHOLOGIE
UND
PROLAKTIN-SEKRETION..
90
5.1.1
FEHLENDE
MORPHOLOGISCHE
TRANSFORMATION
...............................................
92
II
5.1.2
STATTGEFUNDENE
MORPHOLOGISCHE
TRANSFORMATION
......................................
93
5.2
ZUSAMMENHANG
ZWISCHEN
DEZIDUALISIERUNG
UND
HAND2
................................
96
5.3
BEURTEILUNG
DER
ERGEBNISSE
ZUR
GENEXPRESSION
UND
SEKRETION
.......................
98
5.3.1
PROLAKTIN-GENEXPRESSION
UND
-SEKRETION
..................................................99
5.3.2
HAND2-GENEXPRESSION
..............................................................................
100
5.3.3
FGF1-GENEXPRESSION
UND
-SEKRETION
......................................................
101
5.3.4
FGF2-GENEXPRESSION
UND
-SEKRETION
......................................................
102
5.3.5
FGF18-SEKRETION
......................................................................................
103
5.4
GRENZEN
UND
AUSBLICK
......................................................................................
106
6
ZUSAMMENFASSUNG
...................................................................................................
107
SUMMARY
...........................................................................................................................
108
7
LITERATUR
....................................................................................................................
109
8
ANHANG
......................................................................................................................
115
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
....................................................................................................
122
TABELLENVERZEICHNIS
.........................................................................................................
124
POSTER
UND
KONGRESSBEITRAEGE
........................................................................................
126
DANKSAGUNG
......................................................................................................................
127
ERKLAERUNGEN
......................................................................................................................
129
LEBENSLAUF
.........................................................................................................................
131
III
|
| adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
IV
1
EINLEITUNG
.
1
1.1
ANATOMIE
DES
UTERUS
UND
DES
ENDOMETRIUMS
.
2
1.2
MENSTRUATIONSZYKLUS
.
4
1.3
BILDUNG
UND
WIRKUNGSWEISE
DER
STEROIDHORMONE
.
7
1.3.1
ESTRADIOL
.
7
1.3.2
PROGESTERON
.
9
1.3.3
MEDROXYPROGESTERONACETAT
.
9
1.4
WIRKUNGSWEISE
UND
BILDUNG
VON
CYCLISCHEM
ADENOSINMONOPHOSPHAT
.
10
1.5
ESTROGEN-
UND
PROGESTERONREZEPTOREN
DES
ENDOMETRIUMS
.
10
1.6
DEZIDUALISIERUNG
.
12
1.6.1
MORPHOLOGISCHE
TRANSFORMATION
IM
LAUFE
DER
DEZIDUALISIERUNG
.
12
1.6.2
SEKRETORISCHE
TRANSFORMATION
IM
LAUFE
DER
DEZIDUALISIERUNG
.
12
1.6.3
HAND2,
EIN
TRANSKRIPTIONSFAKTOR
DER
DEZIDUALISIERUNG
.
13
1.6.4
DEZIDUALISIERUNG
UND
FGF-SEKRETION/-EXPRESSION
.
15
1.7
IN-VITRO
MODELL
.
18
2
ZIELSETZUNG
.
19
3
MATERIAL
UND
METHODEN
.
20
3.1
ZELLKULTUR
.
20
3.1.1
TELOMERASE
TRANSFORMED
HUMAN
ENDOMETRIAL
STROMAL
CELLS
(THESCS).2O
3.1.2
KONSERVIERUNG
DER
ZELLEN
.
20
3.1.3
KULTIVIERUNG
DER
THESCS
VOR
DEM
VERSUCHSSTART
.
21
3.1.4
PASSAGIEREN
DER
THESCS
.
22
3.1.5
QUANTIFIZIERUNG
DER
THESCS
.
24
3.1.6
HORMONBEHANDLUNG
DER
THESCS
.
24
3.1.7
SAMMLUNG
DER
ZELLEN
UND
DER
ZELLKULTURUEBERSTAENDE
.
27
3.1.8
DOKUMENTATION
DER
MORPHOLOGISCHEN
VERAENDERUNGEN
.
28
3.2
IMMUNFLUORESZENZ
.
28
3.3
REAL
TIME
REVERSE-TRANSKRIPTASE
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(RT-PCR)
.
33
3.3.1
ZELLAUFSCHLUSS
UND
RNA-ISOLIERUNG
.
33
3.3.2
BESTIMMUNG
DER
RNA-KONZENTRATION
.
33
3.3.3
CDNA
SYNTHESE
.
33
3.3.4
REAL
TIME
RT-PCR
.
36
3.4
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
DER
ZELLKULTURUEBERSTAENDE
.
38
3.4.1
PROLAKTIN
.40
3.4.2
FGF1
.40
3.4.3
FGF2
.
41
3.4.4
FGF18
.
41
3.5
AUSWERTUNG
.
42
3.5.1
MIKROSKOPIE
UND
FOTODOKUMENTATION
.
42
3.5.2
BILDBEARBEITUNG
.
42
3.5.3
PROGRAMME
.42
3.5.4
STATISTIK
.
43
4
ERGEBNISSE
.
44
4.1
ERGEBNISSE
DER
ZELLKULTUR:
MORPHOLOGISCHE
TRANSFORMATION
DER
THESCS
44
4.2
ERGEBNISSE
DER
IMMUNFLUORESZENZMARKIERUNG:
NACHWEIS
VON
HAND2
.
55
4.3
ERGEBNISSE
DER
REAL
TIME
REVERSE-TRANSKRIPTASE-POLYMERASE-KETTENREAKTION
(RT-PCR)
.
71
4.3.1
PROLAKTIN-GENEXPRESSION
.
73
4.3.2
HAND2-GENEXPRESSION
.
74
4.3.3
F
GF
1
-GENEXPRESSION
.
75
4.3.4
FGF2-GENEXPRESSION
.
76
4.4
ERGEBNISSE
DER
ENZYM-LINKED
IMMUNOSORBENT
ASSAYS
(ELISA)
.
77
4.4.1
PROLAKTIN-SEKRETION
.
78
4.4.2
FGF1-SEKRETION
.
81
4.4.3
FGF2-SEKRETION
.
84
4.4.4
FGF18-SEKRETION
.
87
5
DISKUSSION
.90
5.1
AUSWIRKUNGEN
DER
HORMONE
AUF
DIE
MORPHOLOGIE
UND
PROLAKTIN-SEKRETION.
90
5.1.1
FEHLENDE
MORPHOLOGISCHE
TRANSFORMATION
.
92
II
5.1.2
STATTGEFUNDENE
MORPHOLOGISCHE
TRANSFORMATION
.
93
5.2
ZUSAMMENHANG
ZWISCHEN
DEZIDUALISIERUNG
UND
HAND2
.
96
5.3
BEURTEILUNG
DER
ERGEBNISSE
ZUR
GENEXPRESSION
UND
SEKRETION
.
98
5.3.1
PROLAKTIN-GENEXPRESSION
UND
-SEKRETION
.99
5.3.2
HAND2-GENEXPRESSION
.
100
5.3.3
FGF1-GENEXPRESSION
UND
-SEKRETION
.
101
5.3.4
FGF2-GENEXPRESSION
UND
-SEKRETION
.
102
5.3.5
FGF18-SEKRETION
.
103
5.4
GRENZEN
UND
AUSBLICK
.
106
6
ZUSAMMENFASSUNG
.
107
SUMMARY
.
108
7
LITERATUR
.
109
8
ANHANG
.
115
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
.
122
TABELLENVERZEICHNIS
.
124
POSTER
UND
KONGRESSBEITRAEGE
.
126
DANKSAGUNG
.
127
ERKLAERUNGEN
.
129
LEBENSLAUF
.
131
III |
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Inhaltsverzeichnis