Verfügbarkeit: Zytokin-assoziierte parakrine Effekte kardialer Progenitorzellen auf funktionelle Parameter adulter isolierter Kardiomyozyten

Zytokin-assoziierte parakrine Effekte kardialer Progenitorzellen auf funktionelle Parameter adulter isolierter Kardiomyozyten:

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Bibliographische Detailangaben
1. Verfasser:	Mufti, Solaiman (VerfasserIn)
Format:	Abschlussarbeit Buch
Sprache:	German
Veröffentlicht:	Gießen [2019]
Schlagworte:	Herzmuskelzelle Vorläuferzelle Wistar-Ratte Growth-differentiation Factor 15 Hochschulschrift
Online-Zugang:	Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis
Beschreibung:	116 Seiten Illustrationen, Diagramme 21 cm

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adam_text	INHALTSVERZEICHNIS 1 EINLEITUNG .................................................................................................................................. 1 1.1 THERAPEUTISCHE PERSPEKTIVEN BEI HERZERKRANKUNGEN .......................................................... 1 1.2 REGENERATIVES POTENTIAL VON STAMMZELLEN UND PROGENITORZELLEN BEI KARDIOVASKULAEREN ERKRANKUNGEN ....................................................................................................................... 2 1.3 MOEGLICHE HERKUNFT VON STAMMZELLEN UND PROGENITORZELLEN ................................................. 5 1.4 BEDEUTUNG DER MEDIATOREN UND PARAKRINER FAKTOREN .......................................................... 6 1.5 DEFINITION UND EIGENSCHAFTEN VON ZYTOKINEN ........................................................................ 7 1.6 WIRKSPEKTRUM VON ZYTOKINEN ................................................................................................ 9 1.7 BEDEUTUNG DER SARCOPLASMIC/ENDOPLASMIC RETICULUM CALCIUM ATPASE (SERCA) UND DES NATRIUM-CALCIUM-AUSTAUSCHERS (NCX) ............................................................................... 10 1.8 FRAGESTELLUNG ...................................................................................................................... 12 2 MATERIAL UND METHODE ............................................................................................................ 13 CHEMIKALIEN .............................................................................................................................. 13 MEDIEN FUER ZELLKULTUR .................................................................................................................. 15 MEDIEN FUER WESTERNBLOT/GELELEKTROPHORESE .............................................................................. 17 DETEKTION ................................................................................................................................... 19 PCR-LOESUNGEN .......................................................................................................................... 21 2.1 HERKUNFT UND GEWINNUNG KONDITIONIERTER UEBERSTAENDE ...................................................... 26 2.1.1 MODIFIKATION ZUR GEWINNUNG VON KONDITIONIERTEN UEBERSTAENDEN ............................... 26 2.1.2 ZYTOKINDETEKTION BEI KONDITIONIERTEN UND UNKONDITIONIERTEN MEDIEN ...................... 28 2.2 ISOLIERUNG UND ZELLKULTIVIERUNG ADULTER VENTRIKULAERER KARDIOMYOZYTEN ............................... 34 2.2.1 VORBEREITENDE MASSNAHMEN ZUR GEWINNUNG ISOLIERTER VENTRIKULAERER KARDIO MYOZYTEN ........................................................................................................ 34 2.2.2 ZELLKULTUR VON KARDIOMYOZYTEN ................................................................................. 38 2.2.3 UNTERSUCHUNG DER KONTRAKTIONSPARAMETER AN ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN .............40 2.2.4 MOEGLICHE ZELLKONTRAKTIONSPARAMETER ........................................................................ 40 2.2.5 STATISTISCHE AUSWERTUNGEN ....................................................................................... 41 2.3 UNTERSUCHUNGEN DER ZYTOKINWIRKUNG AUF PROTEINEBENE .................................................... 41 2.3.1 VORBEREITUNG DER ZELLPROBEN (ZELLERNTE ) ................................................................ 42 2.3.2 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE ................................................................... 42 2.3.3 SEMI DRY VERFAHREN UND DETEKTION ..........................................................................43 2.3.4 DETEKTIONSVERFAHREN ZUR DARSTELLUNG DER PROTEINE .................................................. 44 2.4 UNTERSUCHUNGEN DER ZYTOKINWIRKUNG MITTELS POLYMERASEKETTENREAKTION (PCR) ........... 44 2.4.1 ZELLERNTE UND RNA-ISOLIERUNG ................................................................................... 45 2.4.2 GENERIERUNG VON CDNA (REVERSE TRANSKRIPTION ) .................................................. 46 2.4.3 POLYMERASEKETTENREAKTION ....................................................................................... 47 3 ERGEBNISSE .......................................................................................................................... 48 3.1 ERMITTLUNG DER ZUSAMMENSETZUNG DER ZYTOKINE AUS VORLAEUFERZELLKULTUREN ...................... 48 3.2 MESSUNG FUNKTIONELLER PARAMETER AN ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN VON WISTAR-RATTEN NACH ZUGABE VON ZYTOKINEN ......................................................................................................... 53 3.2.1 MESSUNG FUNKTIONELLER PARAMETER AN ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN VON WISTAR-RATTEN NACH ZUGABE DES GROWTH DIFFERENTIATION FACTOR 15 (GDF-15) .................................. 53 3.2.2 MESSUNG FUNKTIONELLER PARAMETER AN ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN VON WISTAR-RATTEN NACH ZUGABE VON LNTERLEUKIN-8 ................................................................................ 55 3.2.3 MESSUNG FUNKTIONELLER PARAMETER AN ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN VON WISTAR-RATTEN NACH ZUGABE DES SINGLE-IMMUNOGLOBULIN INTERLEUKIN-1 RECEPTOR-RELATED (SIGIRR) ZYTOKINS .................................................................................................................... 56 3.2.4 MESSUNG FUNKTIONELLER PARAMETER AN ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN VON WISTAR-RATTEN NACH ZUGABE DES LNTERLEUKIN-6 ZYTOKINS ................................................................. 57 3.2.5 MESSUNG FUNKTIONELLER PARAMETER AN ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN VON WISTAR-RATTEN NACH ZUGABE DES A PROLIFERATION-LNDUCING LIGAND (APRIL) ZYTOKINS ....................... 59 3.2.6 MESSUNG FUNKTIONELLER PARAMETER AN ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN VON WISTAR-RATTEN NACH ZUGABE DES TRANSMEMBRANE ACTIVATOR AND CALCIUM-MODULATOR AND CYCLOPHILIN LIGAND INTERACTOR (TAO) ZYTOKINS ............................................................................. 60 3.2.7 MESSUNG FUNKTIONELLER PARAMETER AN ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN VON WISTAR-RATTEN NACH ZUGABE DES GROWTH-REGULATED ONCOGENE/PROTEIN BETA (GROBETA) ZYTOKINS ..61 3.2.8 MESSUNG FUNKTIONELLER PARAMETER AN ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN VON WISTAR-RATTEN NACH ZUGABE DES MONOCYTE CHEMOATTRACTANT/CHEMOTACTIC PROTEIN-1 (MCP-1) ZYTOKINS .................................................................................................................... 61 3.2.9 MESSUNG FUNKTIONELLER PARAMETER AN ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN VON WISTAR-RATTEN NACH ZUGABE DES INTERFERON-GAMMA ZYTOKINS ....................................................... 62 3.2.10 MESSUNG FUNKTIONELLER PARAMETER AN ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN VON WISTAR-RATTEN NACH ZUGABE DES GRANULOCYTE-COLONY STIMULATING FACTOR (G-CSF) ZYTOKINS ....... 62 3.2.11 MESSUNG FUNKTIONELLER PARAMETER AN ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN VON WISTAR-RATTEN NACH ZUGABE DES LNTERLEUKIN-1 ZYTOKINS ................................................................ 63 3.3 MESSUNG FUNKTIONELLER PARAMETER AN ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN VON WISTAR-RATTEN NACH ZUGABE VON KONDITIONIERTEN MEDIEN UND NEUTRALISIERENDER ZYTOKIN-ANTIKOERPER .............. 64 3.3.1 AENDERUNG DES KONTRAKTIONSVERHALTENS VON ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN (WISTAR- RATTE) NACH ZUGABE VON KONDITIONIERTEM MEDIUM UND EINES GROWTH DIFFERENTIATION FACTOR 15 (GDF-15) ZYTOKIN-ANTIKOERPERS (GDF-AK) ................................................. 65 3.3.2 AENDERUNG DES KONTRAKTIONSVERHALTENS VON ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN (WISTAR- RATTE) NACH ZUGABE VON KONDITIONIERTEM MEDIUM UND EINES SINGLE-IMMUNOGLOBULIN INTERLEUKIN-1 RECEPTOR-RELATED ZYTOKIN-ANTIKOERPERS (SIGGIR-AK) ............................ 66 3.3.3 AENDERUNG DES KONTRAKTIONSVERHALTENS VON ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN (WISTAR- RATTE) NACH ZUGABE VON KONDITIONIERTEM MEDIUM UND EINES LNTERLEUKIN-6 ANTIKOERPERS (IL-6 AK) ............................................................................................... 68 3.3.4 AENDERUNG DES KONTRAKTIONSVERHALTENS VON ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN (WISTAR- RATTE) NACH ZUGABE VON KONDITIONIERTEM MEDIUM UND EINES LNTERLEUKIN-8 ANTIKOERPERS (IL-8 AK) ............................................................................................... 69 3.4 UEBERPRUEFUNG DER BEEINFLUSSUNG DER FUER DIE KONTRAKTILE FUNKTION RELEVANTEN KALZIUMTRANSPORTER SERCA UND NCX DURCH INKUBATION MIT VERSCHIEDENEN ZYTOKINEN 70 3.4.1 UEBERPRUEFUNG DER BEEINFLUSSUNG DER KALZIUMTRANSPORTER SERCA UND NCX DURCH INKUBATION MIT VERSCHIEDENEN ZYTOKINEN AUF PROTEINEBENE .................................... 71 3.4.2 UEBERPRUEFUNG DER BEEINFLUSSUNG DER KALZIUMTRANSPORTER SERCA UND NCX NACH INKUBATION ISOLIERTER KARDIOMYOZYTEN MIT KONDITIONIERTEN MEDIEN UND GLEICHZEITIGER HEMMUNG SPEZIFISCHER ZYTOKINE DURCH ZUGABE NEUTRALISIERENDER ANTIKOERPER ...... 73 3.5 UEBERPRUEFUNG DER BEEINFLUSSUNG DER KALZIUMTRANSPORTER SERCA UND NCX NACH INKUBATION ISOLIERTER KARDIOMYOZYTEN MIT VERSCHIEDENEN ZYTOKINEN AUF RNA-EBENE ..... 75 4 DISKUSSION ........................................................................................................................... 77 4.1 ZYTOKINARRAY KONDITIONIERTER UEBERSTAENDE ............................................................................ 78 4.2 MESSUNG KONTRAKTILER FUNKTIONSPARAMETER ISOLIERTER KARDIOMYOZYTEN ............................... 79 4.3 WERTUNG DER EINGESETZTEN ZYTOKINE ................................................................................... 80 4.3.1 COLONY STIMULATING FACTOR (CSF) ................................................................................... 80 4.3.2 INTERFERON-GAMMA (INF-GAMMA) ................................................................................ 80 4.3.3 TNF-REZEPTOREN APRIL UND TACI 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................................................................................................................. 93 7 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS .......................................................................................................... 95 8 ABBILDUNGSVERZEICHNIS ........................................................................................................... 99 9 QUELLENANGABEN ................................................................................................................... 103 10 PUBLIKATIONSVERZEICHNIS .................................. 113 11 EHRENWOERTLICHE ERKLAERUNG ................................................................................................... 115 12 DANKSAGUNG ........................................................................................................................ 116
adam_txt	INHALTSVERZEICHNIS 1 EINLEITUNG . 1 1.1 THERAPEUTISCHE PERSPEKTIVEN BEI HERZERKRANKUNGEN . 1 1.2 REGENERATIVES POTENTIAL VON STAMMZELLEN UND PROGENITORZELLEN BEI KARDIOVASKULAEREN ERKRANKUNGEN . 2 1.3 MOEGLICHE HERKUNFT VON STAMMZELLEN UND PROGENITORZELLEN . 5 1.4 BEDEUTUNG DER MEDIATOREN UND PARAKRINER FAKTOREN . 6 1.5 DEFINITION UND EIGENSCHAFTEN VON ZYTOKINEN . 7 1.6 WIRKSPEKTRUM VON ZYTOKINEN . 9 1.7 BEDEUTUNG DER SARCOPLASMIC/ENDOPLASMIC RETICULUM CALCIUM ATPASE (SERCA) UND DES NATRIUM-CALCIUM-AUSTAUSCHERS (NCX) . 10 1.8 FRAGESTELLUNG . 12 2 MATERIAL UND METHODE . 13 CHEMIKALIEN . 13 MEDIEN FUER ZELLKULTUR . 15 MEDIEN FUER WESTERNBLOT/GELELEKTROPHORESE . 17 DETEKTION . 19 PCR-LOESUNGEN . 21 2.1 HERKUNFT UND GEWINNUNG KONDITIONIERTER UEBERSTAENDE . 26 2.1.1 MODIFIKATION ZUR GEWINNUNG VON KONDITIONIERTEN UEBERSTAENDEN . 26 2.1.2 ZYTOKINDETEKTION BEI KONDITIONIERTEN UND UNKONDITIONIERTEN MEDIEN . 28 2.2 ISOLIERUNG UND ZELLKULTIVIERUNG ADULTER VENTRIKULAERER KARDIOMYOZYTEN . 34 2.2.1 VORBEREITENDE MASSNAHMEN ZUR GEWINNUNG ISOLIERTER VENTRIKULAERER KARDIO MYOZYTEN . 34 2.2.2 ZELLKULTUR VON KARDIOMYOZYTEN . 38 2.2.3 UNTERSUCHUNG DER KONTRAKTIONSPARAMETER AN ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN .40 2.2.4 MOEGLICHE ZELLKONTRAKTIONSPARAMETER . 40 2.2.5 STATISTISCHE AUSWERTUNGEN . 41 2.3 UNTERSUCHUNGEN DER ZYTOKINWIRKUNG AUF PROTEINEBENE . 41 2.3.1 VORBEREITUNG DER ZELLPROBEN (ZELLERNTE ) . 42 2.3.2 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE . 42 2.3.3 SEMI DRY VERFAHREN UND DETEKTION .43 2.3.4 DETEKTIONSVERFAHREN ZUR DARSTELLUNG DER PROTEINE . 44 2.4 UNTERSUCHUNGEN DER ZYTOKINWIRKUNG MITTELS POLYMERASEKETTENREAKTION (PCR) . 44 2.4.1 ZELLERNTE UND RNA-ISOLIERUNG . 45 2.4.2 GENERIERUNG VON CDNA (REVERSE TRANSKRIPTION ) . 46 2.4.3 POLYMERASEKETTENREAKTION . 47 3 ERGEBNISSE . 48 3.1 ERMITTLUNG DER ZUSAMMENSETZUNG DER ZYTOKINE AUS VORLAEUFERZELLKULTUREN . 48 3.2 MESSUNG FUNKTIONELLER PARAMETER AN ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN VON WISTAR-RATTEN NACH ZUGABE VON ZYTOKINEN . 53 3.2.1 MESSUNG FUNKTIONELLER PARAMETER AN ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN VON WISTAR-RATTEN NACH ZUGABE DES GROWTH DIFFERENTIATION FACTOR 15 (GDF-15) . 53 3.2.2 MESSUNG FUNKTIONELLER PARAMETER AN ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN VON WISTAR-RATTEN NACH ZUGABE VON LNTERLEUKIN-8 . 55 3.2.3 MESSUNG FUNKTIONELLER PARAMETER AN ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN VON WISTAR-RATTEN NACH ZUGABE DES SINGLE-IMMUNOGLOBULIN INTERLEUKIN-1 RECEPTOR-RELATED (SIGIRR) ZYTOKINS . 56 3.2.4 MESSUNG FUNKTIONELLER PARAMETER AN ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN VON WISTAR-RATTEN NACH ZUGABE DES LNTERLEUKIN-6 ZYTOKINS . 57 3.2.5 MESSUNG FUNKTIONELLER PARAMETER AN ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN VON WISTAR-RATTEN NACH ZUGABE DES A PROLIFERATION-LNDUCING LIGAND (APRIL) ZYTOKINS . 59 3.2.6 MESSUNG FUNKTIONELLER PARAMETER AN ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN VON WISTAR-RATTEN NACH ZUGABE DES TRANSMEMBRANE ACTIVATOR AND CALCIUM-MODULATOR AND CYCLOPHILIN LIGAND INTERACTOR (TAO) ZYTOKINS . 60 3.2.7 MESSUNG FUNKTIONELLER PARAMETER AN ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN VON WISTAR-RATTEN NACH ZUGABE DES GROWTH-REGULATED ONCOGENE/PROTEIN BETA (GROBETA) ZYTOKINS .61 3.2.8 MESSUNG FUNKTIONELLER PARAMETER AN ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN VON WISTAR-RATTEN NACH ZUGABE DES MONOCYTE CHEMOATTRACTANT/CHEMOTACTIC PROTEIN-1 (MCP-1) ZYTOKINS . 61 3.2.9 MESSUNG FUNKTIONELLER PARAMETER AN ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN VON WISTAR-RATTEN NACH ZUGABE DES INTERFERON-GAMMA ZYTOKINS . 62 3.2.10 MESSUNG FUNKTIONELLER PARAMETER AN ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN VON WISTAR-RATTEN NACH ZUGABE DES GRANULOCYTE-COLONY STIMULATING FACTOR (G-CSF) ZYTOKINS . 62 3.2.11 MESSUNG FUNKTIONELLER PARAMETER AN ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN VON WISTAR-RATTEN NACH ZUGABE DES LNTERLEUKIN-1 ZYTOKINS . 63 3.3 MESSUNG FUNKTIONELLER PARAMETER AN ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN VON WISTAR-RATTEN NACH ZUGABE VON KONDITIONIERTEN MEDIEN UND NEUTRALISIERENDER ZYTOKIN-ANTIKOERPER . 64 3.3.1 AENDERUNG DES KONTRAKTIONSVERHALTENS VON ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN (WISTAR- RATTE) NACH ZUGABE VON KONDITIONIERTEM MEDIUM UND EINES GROWTH DIFFERENTIATION FACTOR 15 (GDF-15) ZYTOKIN-ANTIKOERPERS (GDF-AK) . 65 3.3.2 AENDERUNG DES KONTRAKTIONSVERHALTENS VON ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN (WISTAR- RATTE) NACH ZUGABE VON KONDITIONIERTEM MEDIUM UND EINES SINGLE-IMMUNOGLOBULIN INTERLEUKIN-1 RECEPTOR-RELATED ZYTOKIN-ANTIKOERPERS (SIGGIR-AK) . 66 3.3.3 AENDERUNG DES KONTRAKTIONSVERHALTENS VON ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN (WISTAR- RATTE) NACH ZUGABE VON KONDITIONIERTEM MEDIUM UND EINES LNTERLEUKIN-6 ANTIKOERPERS (IL-6 AK) . 68 3.3.4 AENDERUNG DES KONTRAKTIONSVERHALTENS VON ISOLIERTEN KARDIOMYOZYTEN (WISTAR- RATTE) NACH ZUGABE VON KONDITIONIERTEM MEDIUM UND EINES LNTERLEUKIN-8 ANTIKOERPERS (IL-8 AK) . 69 3.4 UEBERPRUEFUNG DER BEEINFLUSSUNG DER FUER DIE KONTRAKTILE FUNKTION RELEVANTEN KALZIUMTRANSPORTER SERCA UND NCX DURCH INKUBATION MIT VERSCHIEDENEN ZYTOKINEN 70 3.4.1 UEBERPRUEFUNG DER BEEINFLUSSUNG DER KALZIUMTRANSPORTER SERCA UND NCX DURCH INKUBATION MIT VERSCHIEDENEN ZYTOKINEN AUF PROTEINEBENE . 71 3.4.2 UEBERPRUEFUNG DER BEEINFLUSSUNG DER KALZIUMTRANSPORTER SERCA UND NCX NACH INKUBATION ISOLIERTER KARDIOMYOZYTEN MIT KONDITIONIERTEN MEDIEN UND GLEICHZEITIGER HEMMUNG SPEZIFISCHER ZYTOKINE DURCH ZUGABE NEUTRALISIERENDER ANTIKOERPER . 73 3.5 UEBERPRUEFUNG DER BEEINFLUSSUNG DER KALZIUMTRANSPORTER SERCA UND NCX NACH INKUBATION ISOLIERTER KARDIOMYOZYTEN MIT VERSCHIEDENEN ZYTOKINEN AUF RNA-EBENE . 75 4 DISKUSSION . 77 4.1 ZYTOKINARRAY KONDITIONIERTER UEBERSTAENDE . 78 4.2 MESSUNG KONTRAKTILER FUNKTIONSPARAMETER ISOLIERTER KARDIOMYOZYTEN . 79 4.3 WERTUNG DER EINGESETZTEN ZYTOKINE . 80 4.3.1 COLONY STIMULATING FACTOR (CSF) . 80 4.3.2 INTERFERON-GAMMA (INF-GAMMA) . 80 4.3.3 TNF-REZEPTOREN APRIL UND TACI . 81 4.3.4 CHEMOKINE (MCP, LNTERLEUKIN-8, GRO-BETA) . 82 4.3.5 IL-1 ZYTOKINSUPERFAMILIE (IL-1) UND IL-1 REZEPTORFAMILIE IL-1 R/TOLL-IIKE (SIGIRR).83 4.3.6 LNTERLEUKIN-6 (IL-6) . 85 4.3.7 GROWTH DIFFERENTIATION FACTOR 15 (GDF-15) . 86 4.4 WERTUNG DER UNTERSUCHUNGEN AUF PROTEIN- UND MRNA-EBENE . 89 4.5 LIMITATIONEN BEI DER WERTUNG EINZELNER ZYTOKINE ALS MOEGLICHE SCHLUESSELZYTOKINE . 90 5 SCHLUSSFOLGERUNG . 92 6 ZUSAMMENFASSUNG . 93 7 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS . 95 8 ABBILDUNGSVERZEICHNIS . 99 9 QUELLENANGABEN . 103 10 PUBLIKATIONSVERZEICHNIS . 113 11 EHRENWOERTLICHE ERKLAERUNG . 115 12 DANKSAGUNG . 116
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