CCL21 als parakrines Signal des peritumoralen Fettgewebes bei übergewichtigen Patientinnen mit Hormonrezeptor-positivem Mammakarzinom:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Köln
[2020]
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
1
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
....................................................................................
10
2
EINLEITUNG
...........................................................................................................
12
2.1
MAMMAKARZINOM
..............................................................................................
12
2.1.1
EPIDEMIOLOGIE
..............................................................................................
12
2.1.2
NICHT-MODIFIZIERBARE
RISIKOFAKTOREN
............................................................
13
2.1.3
HORMONREZEPTORSTATUS
.................................................................................
15
2.1.4
HER2
............................................................................................................
16
2.1.5
HISTOLOGISCHE
KLASSIFIKATION
..........................................................................
16
2.1.6
THERAPIE
.......................................................................................................
18
2.2
ADIPOSITAS
.........................................................................................................
21
2.2.1
DEFINITION
......................................................................................................
21
2.2.2
BEDEUTUNG
DER
ADIPOSITAS
ALS
RISIKOFAKTOR
FUER
DIE
ENTSTEHUNG
MALIGNER
HYPERPLASIEN
..............................................................................................................
21
2.2.3
ASSOZIATION
VON
ADIPOSITAS
UND
MAMMAKARZINOM
...................................22
2.2.4
EINFLUSS
DER
VERMEHRTEN
OESTROGEN
PRODUKTION
IM
FETTGEWEBE
AUF
DIE
PROGRESSION
DES
MAMMAKARZINOMS
.......................................................................23
2.3
ADIPOSITAS
ASSOZIIERTE
INFLAMMATION
................................................................
24
2.4
ROLLE
DER
ZYTOKINE
IN
DER
PROGRESSION
DES
MAMMAKARZINOMS
.....................
25
2.4.1
CHEMOKINE
...................................................................................................
25
2.4.2
CCL21
UND
SEIN
EINFLUSS
AUF
DIE
KARZINOGENESE
.....................................
26
2.4.3
DIE
ROLLE
VON
CCL21/CCR7
IN
DER
ENTSTEHUNG
DES
MAMMAKARZINOMS
27
2.5
ZUSAMMENFASSUNG
UND
ZIEL
DER
ARBEIT
............................................................27
3
MATERIAL
.............................................................................................................28
3.1
PATIENTENKOLLEKTIV
...............................................................................................28
3.2
PATIENTENINFORMATION
UND
EINVERSTAENDNISERKLAERUNG
.........................................28
3.3
GEWEBEPROBEN
.................................................................................................28
3.4
GEWEBEHISTOLOGIE
..............................................................................................
29
3.5
ZELLLINIE
MCF-7
(ATCC
HTB-22*)
..................................................................
29
3.6
ALLGEMEINE
LABORCHEMIKALIEN
..........................................................................29
3.7
KITS
.......................................................................................................................30
3.8
VERBRAUCHSMATERIALIEN
......................................................................................
30
3.9
LOESUNGEN
............................................................................................................32
3.10
ANTIKOERPER
............................................................................................................32
3.10.1
WESTERN
BLOT
ANTIKOERPER
...............................................................................32
3.10.2
IMMUNHISTOCHEMIE
ANTIKOERPER
....................................................................
33
3.11
PRIMER
.................................................................................................................33
3.12
GERAETE
.................................................................................................................34
4
METHODEN
.............................................................................................................35
4.1
RNA
PRAEPARATION
................................................................................................35
4.2
RNA
QUALITAETSBESTIMMUNG
................................................................................
35
4.3
MICROARRAYS
........................................................................................................36
4.4
ANALYSE
DER
MICROARRAY
DATEN
.........................................................................36
4.5
SYNTHESE
KOMPLEMENTAERER
DNA
(CDNA)
.........................................................36
4.6
QUANTITATIVE
REAL-TIME
PCR
(QPCR)
..............................................................
37
4.7
IMMUNHISTOCHEMIE
............................................................................................38
4.7.1
HISTOLOGISCHES
MATERIAL
................................................................................38
4.7.2
VERWENDETE
ANTIKOERPER
................................................................................39
4.7.3
FAERBEPROTOKOLL
...............................................................................................39
4.7.4
AUSWERTUNG
DER
IMMUNHISTOCHEMIE
...........................................................39
4.8
ZELLKULTUR
............................................................................................................
40
4.8.1
MCF-7
ZELLLINIE
.............................................................................................
41
4.8.2
MEDIEN
FUER
DIE
ZELLKULTUR
..............................................................................
41
4.8.3
PASSAGIEREN
DER
ZELLEN
...............................................................................
42
7
4.8.4
EINFRIEREN
DER
ZELLEN
....................................................................................
42
4.8.5
AUFTAUEN
DER
ZELLEN
.....................................................................................42
4.8.6
ZELLZAHLBESTIMMUNG
....................................................................................
43
4.8.7
ZELLSTIMULATION
MIT
CCL21
FUER
WESTERN
BLOT
ANALYSEN
.............................
43
4.8.8
ZELLSTIMULATION
MIT
CCL21
ZUR
ZELLZAHLBESTIMMUNG
.................................
43
4.9
POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
............................................
44
4.10
WESTERN
BLOT
....................................................................................................44
4.11
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.......................................................................................
45
4.12
STATISTISCHE
AUSWERTUNGEN
.............................................................................
45
5
ERGEBNISSE
.......................................................................................................
46
5.1
IDENTIFIZIERUNG
DIFFERENTIELL
REGULIERTER
ZIELGENE
..............................................46
5.2
DIE
MRNA
EXPRESSION
VON
CCL21
,
CCL23
UND
CCR7
IST
IM
FETTGEWEBE
VON
UEBERGEWICHTIGEN
MAMMAKARZINOM
PATIENTINNEN
ERHOEHT
......................47
5.3
AUSWERTUNG
DER
IMMUNHISTOCHEMISCHEN
FAERBUNG
VON
CCL21
UND
CCR7
IM
TUMOR-
UND
FETTGEWEBE
...................................................................................
53
5.3.1
CCL21
ZEIGT
EINE
STARKE
EXPRESSION
IN
DEN
MAMMAKARZINOMZELLEN
ADIPOESER
PATIENTINNEN
..............................................................................................54
5.3.2
CCR7
ZEIGT
EINE
STARKE
EXPRESSION
IN
DEN
MAMMAKARZINOMZELLEN
ADIPOESER
PATIENTINNEN
..............................................................................................
56
5.4
AKTIVIERUNG
DES
AKT-
UND
MARK
SIGNALWEGS
DURCH
CCL21
IN
DER
BRUSTZELLLINIE
MCF-7
.........................................................................................
58
5.4.1
CCL21-STIMULATION
VON
MCF-7-ZELLEN
UND
DARSTELLUNG
DER
QUANTITATIVEN
PROTEINEXPRESSION
MIT
HILFE
VON
WESTERN
BLOTS
......................................................58
5.4.2
EINFLUSS
DER
CCL21-STIMULATION
AUF
DIE
AKTIVIERUNG
VON
AKT
................59
5.4.3
EINFLUSS
DER
CCL21
-STIMULATION
AUF
DIE
AKTIVIERUNG
VON
MARK
............60
5.5
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
ZELLZAEHLUNG
NACH
STIMULATION
MIT
CCL21
.............62
6
DISKUSSION
.........................................................................................................
65
8
6.1
CCL21
ALS
AUTOKRINES
UND
PARAKRINES
SIGNAL
DES
PERITUMORALEN
FETTGEWEBES
BEI
UEBERGEWICHTIGEN
PATIENTINNEN
MIT
HORMONREZEPTOR
POSITIVEM
MAMMAKARZINOM
.............................................................................65
6.2
DIE
CCL21-EXPRESSION
IM
PERITUMORALEN
GEWEBE
IST
BEI
UEBERGEWICHTIGEN
MAMMAKARZINOM
PATIENTINNEN
ERHOEHT
............................................................66
6.3
DIE
STIMULATION
MIT
CCL21
AKTIVIERT
DEN
INTRAZELLULAEREN
SIGNALTRANSDUKTIONSWEG
AKT
IN
MCF-7-ZELLEN
..............................................
67
6.4
DIE
STIMULATION
MIT
CCL21
FUEHRT
ZU
EINER
VERMEHRTEN
PROLIFERATION
VON
MCF-
7-ZELLEN
..............................................................................................................68
7
ZUSAMMENFASSUNG
...........................................................................................70
8
LITERATURVERZEICHNIS
...........................................................................................72
9
LEBENSLAUF
.........................................................................................................
84
9
|
| adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
1
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
10
2
EINLEITUNG
.
12
2.1
MAMMAKARZINOM
.
12
2.1.1
EPIDEMIOLOGIE
.
12
2.1.2
NICHT-MODIFIZIERBARE
RISIKOFAKTOREN
.
13
2.1.3
HORMONREZEPTORSTATUS
.
15
2.1.4
HER2
.
16
2.1.5
HISTOLOGISCHE
KLASSIFIKATION
.
16
2.1.6
THERAPIE
.
18
2.2
ADIPOSITAS
.
21
2.2.1
DEFINITION
.
21
2.2.2
BEDEUTUNG
DER
ADIPOSITAS
ALS
RISIKOFAKTOR
FUER
DIE
ENTSTEHUNG
MALIGNER
HYPERPLASIEN
.
21
2.2.3
ASSOZIATION
VON
ADIPOSITAS
UND
MAMMAKARZINOM
.22
2.2.4
EINFLUSS
DER
VERMEHRTEN
OESTROGEN
PRODUKTION
IM
FETTGEWEBE
AUF
DIE
PROGRESSION
DES
MAMMAKARZINOMS
.23
2.3
ADIPOSITAS
ASSOZIIERTE
INFLAMMATION
.
24
2.4
ROLLE
DER
ZYTOKINE
IN
DER
PROGRESSION
DES
MAMMAKARZINOMS
.
25
2.4.1
CHEMOKINE
.
25
2.4.2
CCL21
UND
SEIN
EINFLUSS
AUF
DIE
KARZINOGENESE
.
26
2.4.3
DIE
ROLLE
VON
CCL21/CCR7
IN
DER
ENTSTEHUNG
DES
MAMMAKARZINOMS
27
2.5
ZUSAMMENFASSUNG
UND
ZIEL
DER
ARBEIT
.27
3
MATERIAL
.28
3.1
PATIENTENKOLLEKTIV
.28
3.2
PATIENTENINFORMATION
UND
EINVERSTAENDNISERKLAERUNG
.28
3.3
GEWEBEPROBEN
.28
3.4
GEWEBEHISTOLOGIE
.
29
3.5
ZELLLINIE
MCF-7
(ATCC
HTB-22*)
.
29
3.6
ALLGEMEINE
LABORCHEMIKALIEN
.29
3.7
KITS
.30
3.8
VERBRAUCHSMATERIALIEN
.
30
3.9
LOESUNGEN
.32
3.10
ANTIKOERPER
.32
3.10.1
WESTERN
BLOT
ANTIKOERPER
.32
3.10.2
IMMUNHISTOCHEMIE
ANTIKOERPER
.
33
3.11
PRIMER
.33
3.12
GERAETE
.34
4
METHODEN
.35
4.1
RNA
PRAEPARATION
.35
4.2
RNA
QUALITAETSBESTIMMUNG
.
35
4.3
MICROARRAYS
.36
4.4
ANALYSE
DER
MICROARRAY
DATEN
.36
4.5
SYNTHESE
KOMPLEMENTAERER
DNA
(CDNA)
.36
4.6
QUANTITATIVE
REAL-TIME
PCR
(QPCR)
.
37
4.7
IMMUNHISTOCHEMIE
.38
4.7.1
HISTOLOGISCHES
MATERIAL
.38
4.7.2
VERWENDETE
ANTIKOERPER
.39
4.7.3
FAERBEPROTOKOLL
.39
4.7.4
AUSWERTUNG
DER
IMMUNHISTOCHEMIE
.39
4.8
ZELLKULTUR
.
40
4.8.1
MCF-7
ZELLLINIE
.
41
4.8.2
MEDIEN
FUER
DIE
ZELLKULTUR
.
41
4.8.3
PASSAGIEREN
DER
ZELLEN
.
42
7
4.8.4
EINFRIEREN
DER
ZELLEN
.
42
4.8.5
AUFTAUEN
DER
ZELLEN
.42
4.8.6
ZELLZAHLBESTIMMUNG
.
43
4.8.7
ZELLSTIMULATION
MIT
CCL21
FUER
WESTERN
BLOT
ANALYSEN
.
43
4.8.8
ZELLSTIMULATION
MIT
CCL21
ZUR
ZELLZAHLBESTIMMUNG
.
43
4.9
POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
.
44
4.10
WESTERN
BLOT
.44
4.11
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
45
4.12
STATISTISCHE
AUSWERTUNGEN
.
45
5
ERGEBNISSE
.
46
5.1
IDENTIFIZIERUNG
DIFFERENTIELL
REGULIERTER
ZIELGENE
.46
5.2
DIE
MRNA
EXPRESSION
VON
CCL21
,
CCL23
UND
CCR7
IST
IM
FETTGEWEBE
VON
UEBERGEWICHTIGEN
MAMMAKARZINOM
PATIENTINNEN
ERHOEHT
.47
5.3
AUSWERTUNG
DER
IMMUNHISTOCHEMISCHEN
FAERBUNG
VON
CCL21
UND
CCR7
IM
TUMOR-
UND
FETTGEWEBE
.
53
5.3.1
CCL21
ZEIGT
EINE
STARKE
EXPRESSION
IN
DEN
MAMMAKARZINOMZELLEN
ADIPOESER
PATIENTINNEN
.54
5.3.2
CCR7
ZEIGT
EINE
STARKE
EXPRESSION
IN
DEN
MAMMAKARZINOMZELLEN
ADIPOESER
PATIENTINNEN
.
56
5.4
AKTIVIERUNG
DES
AKT-
UND
MARK
SIGNALWEGS
DURCH
CCL21
IN
DER
BRUSTZELLLINIE
MCF-7
.
58
5.4.1
CCL21-STIMULATION
VON
MCF-7-ZELLEN
UND
DARSTELLUNG
DER
QUANTITATIVEN
PROTEINEXPRESSION
MIT
HILFE
VON
WESTERN
BLOTS
.58
5.4.2
EINFLUSS
DER
CCL21-STIMULATION
AUF
DIE
AKTIVIERUNG
VON
AKT
.59
5.4.3
EINFLUSS
DER
CCL21
-STIMULATION
AUF
DIE
AKTIVIERUNG
VON
MARK
.60
5.5
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
ZELLZAEHLUNG
NACH
STIMULATION
MIT
CCL21
.62
6
DISKUSSION
.
65
8
6.1
CCL21
ALS
AUTOKRINES
UND
PARAKRINES
SIGNAL
DES
PERITUMORALEN
FETTGEWEBES
BEI
UEBERGEWICHTIGEN
PATIENTINNEN
MIT
HORMONREZEPTOR
POSITIVEM
MAMMAKARZINOM
.65
6.2
DIE
CCL21-EXPRESSION
IM
PERITUMORALEN
GEWEBE
IST
BEI
UEBERGEWICHTIGEN
MAMMAKARZINOM
PATIENTINNEN
ERHOEHT
.66
6.3
DIE
STIMULATION
MIT
CCL21
AKTIVIERT
DEN
INTRAZELLULAEREN
SIGNALTRANSDUKTIONSWEG
AKT
IN
MCF-7-ZELLEN
.
67
6.4
DIE
STIMULATION
MIT
CCL21
FUEHRT
ZU
EINER
VERMEHRTEN
PROLIFERATION
VON
MCF-
7-ZELLEN
.68
7
ZUSAMMENFASSUNG
.70
8
LITERATURVERZEICHNIS
.72
9
LEBENSLAUF
.
84
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Inhaltsverzeichnis