Verfügbarkeit: Toll-like Rezeptoren vermitteln selektiv die Bildung von Plättchen-Leukozyten-Komplexen

Toll-like Rezeptoren vermitteln selektiv die Bildung von Plättchen-Leukozyten-Komplexen:

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Bibliographische Detailangaben
1. Verfasser:	Seyfert, Julia (VerfasserIn)
Format:	Abschlussarbeit Buch
Sprache:	German
Veröffentlicht:	Freiburg im Breisgau [2020]
Schlagworte:	Stimulation Leukozyt Hochschulschrift
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Beschreibung:	114 Seiten Illustrationen, Diagramme 30 cm

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adam_text	INHALTSVERZEICHNIS I. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS ............................................................................................. 7 1. EINLEITUNG ............................................................................................................................. 9 1.1. D IE R ELEVANZ KARDIOVASKULAERER I NFLAMMATION ............................................................ 9 1.2. A THEROSKLEROSE .............................................................................................................. 10 1.2.1. ATHEROTHROMBOSE ................................................................................................................................. 10 1.2.2. RISIKOFAKTOREN ...................................................................................................................................... 11 1.3. I SCHAEMIE -R EPERFUSIONSSCHADEN ................................................................................... 12 1.3.1. BEDEUTUNG ............................................................................................................................................ 12 1.3.2. PATHOGENESE DES IR-SCHADENS ......................................................................................................... 13 1.3.3. ZUSAMMENFASSUNG: ISCHAEMIE-REPERFUSIONSSCHADEN ....................................................................... 15 1.4. P LAETTCHEN -N EUTROPHILEN - UND P LAETTCHEN -M ONOZYTEN -K OMPLEXE .......................... 16 1.4.1. ENTSTEHUNG ........................................................................................................................................... 16 1.4.2. FUNKTION ............................................................................................................................................... 17 1.4.3. ROLLE DER PNCS UND PMCS IN DER ATHEROSKLEROSE ............................................................................ 19 1.4.4. ISCHAEMIE-REPERFUSIONSSCHADEN ........................................................................................................20 1.5. TOLL-LIKE REZEPTOREN ............................................................................................. 21 1.5.1. ALLGEMEINES ......................................................................................................................................... 21 1.5.2. FUNKTION .............................................................................................................................................. 22 1.5.3. TOLL-IIKE REZEPTOREN IN KRANKHEITEN ..................................................................................................23 2. ZIELSETZUNG DER ARBEIT: ............................................................................................. 25 3. MATERIAL UND METHODEN ............................................................................................. 26 3.1. M ATERIALIEN ...................................................................................................................... 26 3.1.1. VERSUCHSTIERE / MAEUSE ....................................................................................................................... 26 3.1.2. ANTIKOERPER ............................................................................................................................................ 26 3.1.3. APOPTOSEMARKER .................................................................................................................................. 29 3.1.4. PUFFER .................................................................................................................................................... 30 3.1.4. BLUTENTNAHME UND ANTIKOAGULATION ................................................................................................... 31 3.1.5. TLR-AGONISTEN .................................................................................................................................... 32 3.1.5. WEITERE AGONISTEN ............................................................................................................................... 33 3.1.6. ERYTHROZYTENLYSE ................................................................................................................................. 34 3.1.7. GERAETE .................................................................................................................................................. 34 3.2. M ETHODEN .........................................................................................................................36 3.2.1 ETABLIERUNG DER MESSUNG VON PNCS IN MURINEM UND HUMANEM BLUT MIT DEM LICHTMIKROSKOP UND DURCHFLUSSZYTOMETER ..................................................................................................................................... 36 3.2.2. SCREENING AUF DEN EINFLUSS VON TLRS AUF DIE BILDUNG VON PNCS UND PMCS IN HUMANEM VOLLBLUT IN VITRO ............................................................................................................................................................. 40 3.2.3. STATISTISCHE AUSWERTUNG ..................................................................................................................... 42 4. ERGEBNISSE ........................................................................................................................ 43 4.1. E TABLIERUNG DER M ESSUNG VON P LAETTCHEN -N EUTROPHILEN K OMPLEXEN MIT DEM D URCHFLUSSZYTOMETER IN M AUS UND M ENSCH ..................................................................... 43 4.1.1. MESSUNG VON PNCS IN BLUTAUSSTRICHEN ............................................................................................. 43 4.1.2. PROZESSIERUNG VON VOLLBLUT FUER DIE DURCHFLUSSZYTOMETRIE UND GATING STRATEGIE ............................ 44 4.1.3. BEEINFLUSSUNG DER PNC-WERTE DURCH EINLESEGESCHWINDIGKEIT UND VERDUENNUNG DER BLUTPROBEN . 44 4.1.4. BLOCKIERUNG VON P-SELEKTIN UND DESSEN EINFLUSS AUF PNC-ENTSTEHUNG ......................................... 50 4.1.5. VORAKTIVIERUNG DER THROMBOZYTEN ...................................................................................................... 52 4 4.2 P LAETTCHEN -N EUTROPHILEN - UND P LAETTCHEN -M ONOZYTEN K OMPLEXE NACH T OLL - LIKE - R EZEPTOR S TIMULATION ...........................................................................................................54 4.2.1. NEGATIV- UND POSITIVKONTROLLE ............................................................................................................. 55 4.2.2. TLR1/2 STIMULATION ............................................................................................................................. 56 4.2.3. TLR3 STIMULATION ................................................................................................................................. 57 4.2.4. TLR4 STIMULATION ................................................................................................................................. 58 4.2.5. 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HISTONE ..............................................................................................................................................69 4.2.12. UEBERSICHT: PNC- UND PMC-BILDUNG NACH STIMULATION DER TLR 1/2, 3, 4, 5, 2/6, 7, 7/8, 8 UND 9 72 4.3. F AERBUNG VON P HOSPHATIDYLSERIN DURCH A NNEXIN -V .................................................. 73 4.3.1. TLR 1/2 STIMULATION ............................................................................................................................. 74 4.3.2. TLR4 STIMULATION ................................................................................................................................. 75 4.3.3. TLR2/6 STIMULATION ............................................................................................................................. 77 4.3.4. TLR9 .................................................................................................................................................... 78 4.3.5. HISTONE ................................................................................................................................................. 79 5. DISKUSSION ......................................................................................................................... 80 5.1. E TABLIERUNG EINER VERLAESSLICHEN M ESSUNG ................................................................ 80 5.1.1 PNC-MESSUNG IN BLUTAUSSTRICHEN MOEGLICH ......................................................................................... 80 5.1.2 MAUS: NIEDRIGE EINLESEGESCHWINDIGKEIT UND AUSREICHENDE PROBENVERDUENNUNG ENTSCHEIDEND .... 80 5.1.3 MENSCH: NIEDRIGE EINLESEGESCHWINDIGKEIT UND AUSREICHENDE PROBENVERDUENNUNG EMPFOHLEN .... 81 5.1.4 ANTIKOAGULATION MIT ENOXAPARIN VERSTAERKT PNC-INDUKTION DURCH ADP IN HUMANEM BLUT ................ 82 5.1.5 RELEVANZ VON P-SELEKTIN BESTAETIGT: BLOCKIERUNG VERHINDERT KOMPLEXBILDUNG .................................. 82 5.1.6 KEINE VORAKTIVIERUNG VON THROMBOZYTEN DELEKTIERT ........................................................................... 83 5.1.7 ZUSAMMENFASSUNG: LEICHT REPRODUZIERBARE UND GENAUE METHODIK ZUR PNC-MESSUNG ETABLIERT.. 83 5.2 N UR DIE A KTIVIERUNG VON TLR 1/2,2/6 UND 4 BEEINFLUSST DIE K OMPLEXBILDUNG .......84 5.2.1 KOMPLEXBILDUNG DURCH TLR 1/2 UNSPEZIFISCH: THROMBOZYTEN APOPTOTISCH ....................................... 84 5.2.2 IN-VIVO-EFFEKTE DES TLR2 WOHL PLC-UNABHAENGIG ............................................................................... 85 5.2.3 KEINE INDUKTION VON PNCS UND PMCS DURCH TLR3 ........................................................................... 85 5.2.4 SPEZIFISCHE KOMPLEXBILDUNG DURCH TLR4-STIMULATION ...................................................................... 86 5.2.5 IN-VITRO PLC-BILDUNG NACH TLR4-STIMULATION IN EINKLANG MIT IN-VIVO STUDIEN .................................. 86 5.2.6 KEINE AUSWIRKUNG VON TLR5 AUF DIE BILDUNG VON PLCS ................................................................... 87 5.2.7 TLR2/6 BEWIRKT SELEKTIVE PNC-BILDUNG .............................................................................................. 88 5.2.8 WIDERSPRUCH ZU BEKANNTER LITERATUR: KEINE KOMPLEXBILDUNG DURCH TLR7 UND TLR8 BEOBACHTET. 88 5.2.9 GERINGE PMC-INDUKTION DURCH TLR9 (BIOLOGISCH IRRELEVANT?) .......................................................... 89 5.2.10 HISTONE BEWIRKEN KOMPLEXBILDUNG UNTER MASSIVER APOPTOSE DER THROMBOZYTEN ........................ 91 5.2.11 TLR-AKTIVIERUNG UEBER DAMPS: ANGRIFFSPUNKT FUER ZUKUENFTIGE THERAPIEN? ....................................... 91 5.3. S CHLUSSFOLGERUNG ......................................................................................................... 93 6. ZUSAMMENFASSUNG: ........................................................................................................ 94 7. LITERATURVERZEICHNIS .................................................................................................. 95 8. PUBLIKATION ...................................................................................................................... 107 9. ANHANG .............................................................................................................................. 108 9.1. Z USAETZLICHE M ATERIALIEN ..............................................................................................108 9.2. V ORTRAEGE UND P OSTER .................................................................................................. 111 9.3. E RKLAERUNG ZUM E IGENANTEIL ........................................................................................ 112 5 9.4. E IDESSTATTLICHE V ERSICHERUNG .................................................................................. 113 9.5. D ANKSAGUNG .................................................................................................................. 114 6
adam_txt	INHALTSVERZEICHNIS I. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS . 7 1. EINLEITUNG . 9 1.1. D IE R ELEVANZ KARDIOVASKULAERER I NFLAMMATION . 9 1.2. A THEROSKLEROSE . 10 1.2.1. ATHEROTHROMBOSE . 10 1.2.2. RISIKOFAKTOREN . 11 1.3. I SCHAEMIE -R EPERFUSIONSSCHADEN . 12 1.3.1. BEDEUTUNG . 12 1.3.2. PATHOGENESE DES IR-SCHADENS . 13 1.3.3. ZUSAMMENFASSUNG: ISCHAEMIE-REPERFUSIONSSCHADEN . 15 1.4. P LAETTCHEN -N EUTROPHILEN - UND P LAETTCHEN -M ONOZYTEN -K OMPLEXE . 16 1.4.1. ENTSTEHUNG . 16 1.4.2. FUNKTION . 17 1.4.3. ROLLE DER PNCS UND PMCS IN DER ATHEROSKLEROSE . 19 1.4.4. ISCHAEMIE-REPERFUSIONSSCHADEN .20 1.5. TOLL-LIKE REZEPTOREN . 21 1.5.1. ALLGEMEINES . 21 1.5.2. FUNKTION . 22 1.5.3. TOLL-IIKE REZEPTOREN IN KRANKHEITEN .23 2. ZIELSETZUNG DER ARBEIT: . 25 3. MATERIAL UND METHODEN . 26 3.1. M ATERIALIEN . 26 3.1.1. VERSUCHSTIERE / MAEUSE . 26 3.1.2. ANTIKOERPER . 26 3.1.3. APOPTOSEMARKER . 29 3.1.4. PUFFER . 30 3.1.4. BLUTENTNAHME UND ANTIKOAGULATION . 31 3.1.5. TLR-AGONISTEN . 32 3.1.5. WEITERE AGONISTEN . 33 3.1.6. ERYTHROZYTENLYSE . 34 3.1.7. GERAETE . 34 3.2. M ETHODEN .36 3.2.1 ETABLIERUNG DER MESSUNG VON PNCS IN MURINEM UND HUMANEM BLUT MIT DEM LICHTMIKROSKOP UND DURCHFLUSSZYTOMETER . 36 3.2.2. SCREENING AUF DEN EINFLUSS VON TLRS AUF DIE BILDUNG VON PNCS UND PMCS IN HUMANEM VOLLBLUT IN VITRO . 40 3.2.3. STATISTISCHE AUSWERTUNG . 42 4. ERGEBNISSE . 43 4.1. E TABLIERUNG DER M ESSUNG VON P LAETTCHEN -N EUTROPHILEN K OMPLEXEN MIT DEM D URCHFLUSSZYTOMETER IN M AUS UND M ENSCH . 43 4.1.1. MESSUNG VON PNCS IN BLUTAUSSTRICHEN . 43 4.1.2. PROZESSIERUNG VON VOLLBLUT FUER DIE DURCHFLUSSZYTOMETRIE UND GATING STRATEGIE . 44 4.1.3. BEEINFLUSSUNG DER PNC-WERTE DURCH EINLESEGESCHWINDIGKEIT UND VERDUENNUNG DER BLUTPROBEN . 44 4.1.4. BLOCKIERUNG VON P-SELEKTIN UND DESSEN EINFLUSS AUF PNC-ENTSTEHUNG . 50 4.1.5. VORAKTIVIERUNG DER THROMBOZYTEN . 52 4 4.2 P LAETTCHEN -N EUTROPHILEN - UND P LAETTCHEN -M ONOZYTEN K OMPLEXE NACH T OLL - LIKE - R EZEPTOR S TIMULATION .54 4.2.1. NEGATIV- UND POSITIVKONTROLLE . 55 4.2.2. TLR1/2 STIMULATION . 56 4.2.3. TLR3 STIMULATION . 57 4.2.4. TLR4 STIMULATION . 58 4.2.5. TLR5 STIMULATION . 60 4.2.6. TLR2/6 STIMULATION . 62 4.2.7. TLR7 STIMULATION . 63 4.2.8. TLR7/8 STIMULATION . 64 4.2.9. TLR8 STIMULATION . 66 4.2.10. TLR9 STIMULATION . 67 4.2.11. HISTONE .69 4.2.12. UEBERSICHT: PNC- UND PMC-BILDUNG NACH STIMULATION DER TLR 1/2, 3, 4, 5, 2/6, 7, 7/8, 8 UND 9 72 4.3. F AERBUNG VON P HOSPHATIDYLSERIN DURCH A NNEXIN -V . 73 4.3.1. TLR 1/2 STIMULATION . 74 4.3.2. TLR4 STIMULATION . 75 4.3.3. TLR2/6 STIMULATION . 77 4.3.4. TLR9 . 78 4.3.5. HISTONE . 79 5. DISKUSSION . 80 5.1. E TABLIERUNG EINER VERLAESSLICHEN M ESSUNG . 80 5.1.1 PNC-MESSUNG IN BLUTAUSSTRICHEN MOEGLICH . 80 5.1.2 MAUS: NIEDRIGE EINLESEGESCHWINDIGKEIT UND AUSREICHENDE PROBENVERDUENNUNG ENTSCHEIDEND . 80 5.1.3 MENSCH: NIEDRIGE EINLESEGESCHWINDIGKEIT UND AUSREICHENDE PROBENVERDUENNUNG EMPFOHLEN . 81 5.1.4 ANTIKOAGULATION MIT ENOXAPARIN VERSTAERKT PNC-INDUKTION DURCH ADP IN HUMANEM BLUT . 82 5.1.5 RELEVANZ VON P-SELEKTIN BESTAETIGT: BLOCKIERUNG VERHINDERT KOMPLEXBILDUNG . 82 5.1.6 KEINE VORAKTIVIERUNG VON THROMBOZYTEN DELEKTIERT . 83 5.1.7 ZUSAMMENFASSUNG: LEICHT REPRODUZIERBARE UND GENAUE METHODIK ZUR PNC-MESSUNG ETABLIERT. 83 5.2 N UR DIE A KTIVIERUNG VON TLR 1/2,2/6 UND 4 BEEINFLUSST DIE K OMPLEXBILDUNG .84 5.2.1 KOMPLEXBILDUNG DURCH TLR 1/2 UNSPEZIFISCH: THROMBOZYTEN APOPTOTISCH . 84 5.2.2 IN-VIVO-EFFEKTE DES TLR2 WOHL PLC-UNABHAENGIG . 85 5.2.3 KEINE INDUKTION VON PNCS UND PMCS DURCH TLR3 . 85 5.2.4 SPEZIFISCHE KOMPLEXBILDUNG DURCH TLR4-STIMULATION . 86 5.2.5 IN-VITRO PLC-BILDUNG NACH TLR4-STIMULATION IN EINKLANG MIT IN-VIVO STUDIEN . 86 5.2.6 KEINE AUSWIRKUNG VON TLR5 AUF DIE BILDUNG VON PLCS . 87 5.2.7 TLR2/6 BEWIRKT SELEKTIVE PNC-BILDUNG . 88 5.2.8 WIDERSPRUCH ZU BEKANNTER LITERATUR: KEINE KOMPLEXBILDUNG DURCH TLR7 UND TLR8 BEOBACHTET. 88 5.2.9 GERINGE PMC-INDUKTION DURCH TLR9 (BIOLOGISCH IRRELEVANT?) . 89 5.2.10 HISTONE BEWIRKEN KOMPLEXBILDUNG UNTER MASSIVER APOPTOSE DER THROMBOZYTEN . 91 5.2.11 TLR-AKTIVIERUNG UEBER DAMPS: ANGRIFFSPUNKT FUER ZUKUENFTIGE THERAPIEN? . 91 5.3. S CHLUSSFOLGERUNG . 93 6. ZUSAMMENFASSUNG: . 94 7. LITERATURVERZEICHNIS . 95 8. PUBLIKATION . 107 9. ANHANG . 108 9.1. Z USAETZLICHE M ATERIALIEN .108 9.2. V ORTRAEGE UND P OSTER . 111 9.3. E RKLAERUNG ZUM E IGENANTEIL . 112 5 9.4. E IDESSTATTLICHE V ERSICHERUNG . 113 9.5. D ANKSAGUNG . 114 6
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