Charakterisierung der Tn Antigen exprimierenden COSMC knockdown Pankreaskarzinom-Zelllinie Panc-1:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Hamburg
2018
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | 102 Blätter Illustrationen, Diagramme 30 cm |
Internformat
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|---|---|
| adam_text | 1
INHALTSVERZEICHNIS
1
INHALTSVERZEICHNIS
...........................................................................................................
3
2
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.................................................................................................
6
2.1
ABKUERZUNGEN
..........................................................................................................................
6
2.2
SYMBOLE
....................................................................................................................................8
3
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
...................................................................................................
9
3.1
ABBILDUNGEN
...........................................................................................................................
9
3.2
TABELLEN
.................................................................................................................................10
4
ARBEITSHYPOTHESE
UND
FRAGESTELLUNG
........................................................................
11
5
EINLEITUNG
........................................................................................................................12
5.1
GLYKANE
..................................................................................................................................
12
5.1.1
GLYKOPROTEINE
................................................................................................................
13
5.1.2
PATHOLOGISCH
VERAENDERTE
GLYKANSYTHESE
.....................................................................
14
5.1.3
O-GLYKOSYLIERUNG
..........................................................................................................
15
5.2
DAS
DUKTALE
ADENOKARZINOM
DES
PANKREAS
.................................................................. 16
5.3
DAS
TN
ANTIGEN
...................................................................................................................
17
5.3.1
BIOSYNTHESE
VON
O-GALNAC-CORE
STRUKTUREN
............................................................
19
5.3.2
DAS
MOLEKULARE
CHAPERON
COSMC
...........................................................................22
5.3.3
TN
ANTIGEN
IM
ZUSAMMENHANG
PATHOLOGISCHER
PROZESSE
.......................................
24
5.3.4
TN
ANTIGEN
IM
ZUSAMMENHANG
MIT
DEM
PDAC
...................................................... 25
6
MATERIAL
UND
METHODEN...........
...................................................................................
26
6.1
MATERIAL
................................................................................................................................
26
6.1.1
VERWENDETE
GERAETE
.......................................................................................................
26
6.1.2
VERBRAUCHSMATERIALIEN
................................................................................................
27
6.1.3
VERSUCHSKITS
..................................................................................................................
28
6.1.4
OLIGONUKLEOTIDE
............................................................................................................
28
6.1.5
PUFFER-
UND
STAMMLOESUNGEN
........................................................................................29
6.1.6
ANTIKOERPER
.....................................................................................................................
31
6.1.6.1
PRIMAERANTIKOERPER
.................................................................................................
31
6.1.6.2
SEKUNDAERANTIKOERPER
.............................................................................................
34
6.1
,7LECTINE
.............................................................................................................................
35
6.2
METHODEN.......................................................
..................................................................
36
6.2.1
ZELLBIOLOGISCHE
METHODEN
...........................................................................................
36
6.2.1.1
ZELLKULTUR
STAMMHALTUNG
....................................................................................
36
6.2.1.2
BESTIMMUNG
DER
ZELLZAHL
..................................................................................
37
6.2.1.3
KRYOKONSERVIERUNG
DER
ZELLKULTUR
....................................................................
37
6.2.1.4
MTT
ZELL-PROLIFERATIONS-ASSAY
.........................................................................
37
6.2.1.5
ZELL-MIGRATIONS-ASSAY
........................................................................................
38
6.2.2
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
...............................................................................
39
6.2.2.1
RNA
ISOLATION
NACH
DER
TRIZOL-METHODE
..........................................................
39
6.2.2.2
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
..............................................
40
6.2.2.3
CDNA
SYNTHESE
..................................................................................................
40
6.2.2.4
QUANTITATIVE
REAL
TIME
POLYMERASEKETTENREAKTION
............................................
41
6.2.2.5
LENTI
VIRALE
TRANSFEKTION
UND
TRANSDUKTION
.....................................................
43
6.2.3
PROTEINBIOCHEMISCHE
METHODEN
.................................................................................
46
6.2.3.1
PROTEINLYSATE
.......................................................................................................
46
6.2.3.2
PROTEINKONZENTRATIONSBESTIMMUNG
(BCA-TEST)
..............................................
46
6.2.3.3
SODIUM-DODECYL-SULFAT-POLYACRYLAMID
GRADIENTENGEL
ELEKTROPHORESE
....... 47
6.2.3.4
WESTERN
BLOT
.......................................................................................................
47
6.2.3.5
WESTERN
BLOT
STRIPPING
......................................................................................
49
6.2.3.6
ISOLATION
VON
MEMBRANPROTEINEN
.......................................................................
49
6.2.3.7
IMMUNPRAEZIPITATION
MIT
UNKONJUGIERTEN
PRIMAEREN
ANIKOERPERN
......................
49
6.2.3.8
IMMUNPRAEZIPITATION
MIT
LEKTINEN
.....................................................................
50
6.2.3.9
CLEAVED
CASPASE-3
SANDWICH
ELISA
................................................................
51
6.2.3.10
PONCEAU
FAERBUNG
..............................................................................................
52
6.2.3.11
COOMASSIE
FAERBUNG
..........................................................................................
52
6.2.3.11
HAEMATOXYLIN-EOSIN-FAERBUNG
...........................................................................
52
6.2.4
HISTOCHEMISCHE
METHODEN
..........................................................................................
53
6.2.4.1
IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG
HISTOLOGISCHER
SCHNITTE
MIT
ZWEI
VERSCHIEDENEN
ANTIKOERPERN
...............................................................................
53
6.2.4.2
IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG
VON
ZELLEN
MIT
ZWEI
VERSCHIEDENEN
ANTIKOERPERN
54
7
ERGEBNISSE
......................................................................................................................
55
7.1
ETABLIERUNG
DER
COSMC
KNOCKDOWN
PANC-1
ZELLLINIE
..............................................
56
7.1.1
TN
ANTIGEN
EXPRESSION
IN
HUMANEN
PANKREASKARZINOM-ZELLLINIEN
.......................
56
7.1.2
GENERIERUNG
EINER
TN
ANTIGEN
EXPRIMIERENDEN
PANKREASKARZINOM-ZELLLINIE
......
59
7.1.2.1
NACHWEIS
EINES
COSMC
KNOCKDOWNS
IM
WESTERN
BLOT
................................
60
7.1.2.2
NACHWEIS
DER
TN
ANTIGEN
EXPRESSION
IM
WESTERN
BLOT
................................
61
7.1.3
TN
ANTIGEN
EXPRESSION
IN
PANC-1
COSMC
KNOCKDOWN
GEZEIGT
MIT
IMMUNHISTOCHEMISCHER
FAERBUNG
...............................................................................
63
7.2
CHARAKTERISIERUNG
TN
ANTIGEN
TRAGENDER
PROTEINE
IN
PANC-1
COSMC
KNOCKDOWN
ZELLEN
................................................................................................................
64
7.2.1
IMMUNPRAEZIPITATION
MIT
PNA
UND
WFA
ZUR
ANREICHERUNG
TN
ANTIGEN
TRAGENDER
PROTEINE
........................................................................................................
64
7.2.2
AUSWERTUNG
DER
MASSENSPEKTROMETRISCHEN
UNTERSUCHUNG
......................................
65
7.2.3
GALNAC-TRANSFERASE-EXPRESSIONSLEVEL
IN
PANC-1
COSMC
KNOCKDOWN
...............68
7.2.4
NACHWEIS
DER
TN
ANTIGEN
EXPRESSION
VON
NUCLEOLIN,
GRP
78,
A-ENOLASE
UND
ANNEXIN
A2
IM
WESTERN
BLOT
......................................................................................
71
7.2.5
NACHWEIS
DER
MEMBRANSTAENDIGKEIT
VON
NUCLEOLIN,
GRP
78,
A-ENOLASE
UND
ANNEXIN
A2
IM
WESTERN
BLOT
....................................................................................
73
7.2.6
IMMUNZYTOCHEMISCHE
FAERBUNG
VON
TN
ANTIGEN
UND
NUCLEOLIN
IN
DER
PANC-1
COSMC
KNOCKDOWN
ZELLE
..........................................................................................75
7.3
PROLIFERATION,
MIGRATION
UND
APOPTOSE
VON
PANC-1
COSMC
KNOCKDOWN
ZELLEN
.76
7.3.1
POLIFERATION
VON
PANC-1
COSMC
KNOCKDOWN
ZELLEN
..............................................
76
7.3.2
MIGRATION
VON
PANC-1
COSMC
KNOCKDOWN
ZELLEN
.................................................77
7.3.3
APOPTOSE
VON
PANC-1
COSMC
KNOCKDOWN
ZELLEN
.................................................
79
7.4
LOKALISATION
VON
TN
ANTIGEN
UND
NUCLEOLIN
IN
PDAC
PATIENTENPROBEN
...............
80
7.4.1
IMMUNHISTOCHEMISCHE
FAERBUNG
VON
TN
ANTIGEN
UND
NUCLEOLIN
IN
PDAC
PATIENTENPROBEN
............................................................................................................
80
7.4.2
KORRELATION
KLINISCHER
DATEN
MIT
DER
CO-LOKALISATION
VON
TN
ANTIGEN
UND
NUCLEOLIN
IN
PDAC
PATIENTENPROBEN
.........................................................................
83
8
DISKUSSION
......................................................................................................................
85
9
ZUSAMMENFASSUNG
........................................................................................................
89
10
ABSTRACT
..........................................................................................................................
90
11
LITERATURVERZEICHNIS
....................................................................................................
91
12
VEROEFFENTLICHUNG
..........................................................................................................
99
13
DANKSAGUNG
.................................................................................................................
100
14
LEBENSLAUF.
...................................................................................................................
101
15
EIDESSTATTLICHE
ERKLAERUNG
.........................................................................................
102
|
| adam_txt |
1
INHALTSVERZEICHNIS
1
INHALTSVERZEICHNIS
.
3
2
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
6
2.1
ABKUERZUNGEN
.
6
2.2
SYMBOLE
.8
3
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
.
9
3.1
ABBILDUNGEN
.
9
3.2
TABELLEN
.10
4
ARBEITSHYPOTHESE
UND
FRAGESTELLUNG
.
11
5
EINLEITUNG
.12
5.1
GLYKANE
.
12
5.1.1
GLYKOPROTEINE
.
13
5.1.2
PATHOLOGISCH
VERAENDERTE
GLYKANSYTHESE
.
14
5.1.3
O-GLYKOSYLIERUNG
.
15
5.2
DAS
DUKTALE
ADENOKARZINOM
DES
PANKREAS
. 16
5.3
DAS
TN
ANTIGEN
.
17
5.3.1
BIOSYNTHESE
VON
O-GALNAC-CORE
STRUKTUREN
.
19
5.3.2
DAS
MOLEKULARE
CHAPERON
COSMC
.22
5.3.3
TN
ANTIGEN
IM
ZUSAMMENHANG
PATHOLOGISCHER
PROZESSE
.
24
5.3.4
TN
ANTIGEN
IM
ZUSAMMENHANG
MIT
DEM
PDAC
. 25
6
MATERIAL
UND
METHODEN.
.
26
6.1
MATERIAL
.
26
6.1.1
VERWENDETE
GERAETE
.
26
6.1.2
VERBRAUCHSMATERIALIEN
.
27
6.1.3
VERSUCHSKITS
.
28
6.1.4
OLIGONUKLEOTIDE
.
28
6.1.5
PUFFER-
UND
STAMMLOESUNGEN
.29
6.1.6
ANTIKOERPER
.
31
6.1.6.1
PRIMAERANTIKOERPER
.
31
6.1.6.2
SEKUNDAERANTIKOERPER
.
34
6.1
,7LECTINE
.
35
6.2
METHODEN.
.
36
6.2.1
ZELLBIOLOGISCHE
METHODEN
.
36
6.2.1.1
ZELLKULTUR
STAMMHALTUNG
.
36
6.2.1.2
BESTIMMUNG
DER
ZELLZAHL
.
37
6.2.1.3
KRYOKONSERVIERUNG
DER
ZELLKULTUR
.
37
6.2.1.4
MTT
ZELL-PROLIFERATIONS-ASSAY
.
37
6.2.1.5
ZELL-MIGRATIONS-ASSAY
.
38
6.2.2
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
39
6.2.2.1
RNA
ISOLATION
NACH
DER
TRIZOL-METHODE
.
39
6.2.2.2
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
.
40
6.2.2.3
CDNA
SYNTHESE
.
40
6.2.2.4
QUANTITATIVE
REAL
TIME
POLYMERASEKETTENREAKTION
.
41
6.2.2.5
LENTI
VIRALE
TRANSFEKTION
UND
TRANSDUKTION
.
43
6.2.3
PROTEINBIOCHEMISCHE
METHODEN
.
46
6.2.3.1
PROTEINLYSATE
.
46
6.2.3.2
PROTEINKONZENTRATIONSBESTIMMUNG
(BCA-TEST)
.
46
6.2.3.3
SODIUM-DODECYL-SULFAT-POLYACRYLAMID
GRADIENTENGEL
ELEKTROPHORESE
. 47
6.2.3.4
WESTERN
BLOT
.
47
6.2.3.5
WESTERN
BLOT
STRIPPING
.
49
6.2.3.6
ISOLATION
VON
MEMBRANPROTEINEN
.
49
6.2.3.7
IMMUNPRAEZIPITATION
MIT
UNKONJUGIERTEN
PRIMAEREN
ANIKOERPERN
.
49
6.2.3.8
IMMUNPRAEZIPITATION
MIT
LEKTINEN
.
50
6.2.3.9
CLEAVED
CASPASE-3
SANDWICH
ELISA
.
51
6.2.3.10
PONCEAU
FAERBUNG
.
52
6.2.3.11
COOMASSIE
FAERBUNG
.
52
6.2.3.11
HAEMATOXYLIN-EOSIN-FAERBUNG
.
52
6.2.4
HISTOCHEMISCHE
METHODEN
.
53
6.2.4.1
IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG
HISTOLOGISCHER
SCHNITTE
MIT
ZWEI
VERSCHIEDENEN
ANTIKOERPERN
.
53
6.2.4.2
IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG
VON
ZELLEN
MIT
ZWEI
VERSCHIEDENEN
ANTIKOERPERN
54
7
ERGEBNISSE
.
55
7.1
ETABLIERUNG
DER
COSMC
KNOCKDOWN
PANC-1
ZELLLINIE
.
56
7.1.1
TN
ANTIGEN
EXPRESSION
IN
HUMANEN
PANKREASKARZINOM-ZELLLINIEN
.
56
7.1.2
GENERIERUNG
EINER
TN
ANTIGEN
EXPRIMIERENDEN
PANKREASKARZINOM-ZELLLINIE
.
59
7.1.2.1
NACHWEIS
EINES
COSMC
KNOCKDOWNS
IM
WESTERN
BLOT
.
60
7.1.2.2
NACHWEIS
DER
TN
ANTIGEN
EXPRESSION
IM
WESTERN
BLOT
.
61
7.1.3
TN
ANTIGEN
EXPRESSION
IN
PANC-1
COSMC
KNOCKDOWN
GEZEIGT
MIT
IMMUNHISTOCHEMISCHER
FAERBUNG
.
63
7.2
CHARAKTERISIERUNG
TN
ANTIGEN
TRAGENDER
PROTEINE
IN
PANC-1
COSMC
KNOCKDOWN
ZELLEN
.
64
7.2.1
IMMUNPRAEZIPITATION
MIT
PNA
UND
WFA
ZUR
ANREICHERUNG
TN
ANTIGEN
TRAGENDER
PROTEINE
.
64
7.2.2
AUSWERTUNG
DER
MASSENSPEKTROMETRISCHEN
UNTERSUCHUNG
.
65
7.2.3
GALNAC-TRANSFERASE-EXPRESSIONSLEVEL
IN
PANC-1
COSMC
KNOCKDOWN
.68
7.2.4
NACHWEIS
DER
TN
ANTIGEN
EXPRESSION
VON
NUCLEOLIN,
GRP
78,
A-ENOLASE
UND
ANNEXIN
A2
IM
WESTERN
BLOT
.
71
7.2.5
NACHWEIS
DER
MEMBRANSTAENDIGKEIT
VON
NUCLEOLIN,
GRP
78,
A-ENOLASE
UND
ANNEXIN
A2
IM
WESTERN
BLOT
.
73
7.2.6
IMMUNZYTOCHEMISCHE
FAERBUNG
VON
TN
ANTIGEN
UND
NUCLEOLIN
IN
DER
PANC-1
COSMC
KNOCKDOWN
ZELLE
.75
7.3
PROLIFERATION,
MIGRATION
UND
APOPTOSE
VON
PANC-1
COSMC
KNOCKDOWN
ZELLEN
.76
7.3.1
POLIFERATION
VON
PANC-1
COSMC
KNOCKDOWN
ZELLEN
.
76
7.3.2
MIGRATION
VON
PANC-1
COSMC
KNOCKDOWN
ZELLEN
.77
7.3.3
APOPTOSE
VON
PANC-1
COSMC
KNOCKDOWN
ZELLEN
.
79
7.4
LOKALISATION
VON
TN
ANTIGEN
UND
NUCLEOLIN
IN
PDAC
PATIENTENPROBEN
.
80
7.4.1
IMMUNHISTOCHEMISCHE
FAERBUNG
VON
TN
ANTIGEN
UND
NUCLEOLIN
IN
PDAC
PATIENTENPROBEN
.
80
7.4.2
KORRELATION
KLINISCHER
DATEN
MIT
DER
CO-LOKALISATION
VON
TN
ANTIGEN
UND
NUCLEOLIN
IN
PDAC
PATIENTENPROBEN
.
83
8
DISKUSSION
.
85
9
ZUSAMMENFASSUNG
.
89
10
ABSTRACT
.
90
11
LITERATURVERZEICHNIS
.
91
12
VEROEFFENTLICHUNG
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DANKSAGUNG
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100
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LEBENSLAUF.
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101
15
EIDESSTATTLICHE
ERKLAERUNG
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102 |
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Inhaltsverzeichnis