Untersuchungen zur Interaktion zwischen dem endothelialen Na+-Kanal und dem kortikalen Aktin:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Münster
2019
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| Beschreibung: | III, 101 Blätter Illustrationen 30 cm |
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
...........................................................................................................
1
1.1
DAS
VASKULAERE
SYSTEM
................................................................................
1
1.2
DAS
ENDOTHEL
...............................................................................................
2
1.3
DAS
ZYTOSKELETT
UND
DER
ZELLKORTEX
...........................................................
3
1.3.1
AKTIN
.......................................................................................................
3
1.3.2
DER
ENDOTHELIALE
ZELLKORTEX
................................................................
6
1.4
STICKSTOFFMONOXID
(NO)
...............................................................................
7
1.5
DIE
KORTIKALE
STEIFIGKEIT
UND
DIE
ENDOTHELIALE
FUNKTION
.............................
9
1.6
DER
EPITHELIALE
UND
DER
ENDOTHELIALE
NATRIUMKANAL
................................
10
1.6.1
DER
EPITHELIALE
NATRIUMKANAL:
AUFBAU,
FUNKTION
UND
REGULATION
...........................................................................................
10
1.6.2
DER
ENDOTHELIALE
NATRIUMKANAL
IM
VERGLEICH
ZUM
EPITHELIALEN
NATRIUMKANAL
......................................................................................
14
1.7
DAS
ZUSAMMENSPIEL
VON
NATRIUM,
ENNAC,
AKTIN
UND
KORTIKALER
ZELLSTEIFIGKEIT
.............................................................................................
16
1.8
ZIEL
DER
ARBEIT
............................................................................................
17
2
MATERIAL
UND
METHODEN
..................................................................................
19
2.1
ZELLKULTUR
....................................................................................................
19
2.1.1
EA.HY926
ZELLEN
.................................................................................
19
2.1.2
KULTIVIERUNG
UND
SUBKULTIVIERUNG
DER
ZELLEN
...................................
19
2.2
BESTIMMUNG
DES
F-AKTINS
IM
ENDOTHELIALEN
ZELLKORTEX
MITTELS
FLUORESZENZFAERBUNGEN
.............................................................................
22
2.2.1
FLUORESZENZFAERBUNGEN
......................................................................
22
2.2.2
KONFOKALE
LASER-SCANNING-MIKROSKOPIE
..........................................
24
2.2.3
MESSPROTOKOLL
.....................................................................................
25
2.3
BESTIMMUNG
DER
F-/G-AKTIN-RATIO
MITTELS
SDS-PAGE
UND
WESTERN
BLOTS
............................................................................................
31
2.3.1
VORBEREITUNG
DER
PROTEINPROBEN
........................................................
31
2.3.2
SDS-PAGE
........................................................................................
33
2.3.3
WESTERN
BLOT
......................................................................................
35
2.3.4
IMMUNDETEKTION
.................................................................................
36
2.4
EXPERIMENT
1:
BLOCKADE
DES
ENNAC
.......................................................
38
2.5
EXPERIMENT
2:
HOHE
EXTRAZELLULAERE
NATRIUMKONZENTRATIONEN
................
39
2.6
EXPERIMENT
3:
ANTAGONISIERUNG
DES
MINERALOKORTIKOIDREZEPTORS
DURCH
SPIRONOLACTON
.................................................................................
39
2.7
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
..........................................................................
40
3
ERGEBNISSE
......................................................................................................
41
3.1
DIE
ENNAC-FUNKTION
UND
DAS
KORTIKALE
ZYTOSKELETT
...............................
42
3.1.1
AMILORID
REDUZIERT
F-AKTIN
UND
BEEINFLUSST
DIE
F-/G-AKTIN-
RATIO
...................................................................................................
42
3.1.2
100
NM
AMILORID
SIND
AUSREICHEND,
UM
DIE
FLUORESZENZINTENSITAET
VON
F-AKTIN
SIGNIFIKANT
ZU
REDUZIEREN
..........
45
3.1.3
BENZAMIL
REDUZIERT
F-AKTIN
UND
BEEINFLUSST
DIE
F-/G-AKTIN-
RATIO
..................................................................................................
47
3.1.4
CYTOCHALASIN
D
REDUZIERT
F-AKTIN
OHNE
DIE
F-/G-AKTIN-RATIO
ZU
BEEINFLUSSEN
................................................................................
49
3.1.5
DIE
FUNKTIONELLE
ENNAC-BLOCKADE
BEEINFLUSST
UEBERWIEGEND
DAS
KORTIKALE
AKTIN
.............................................................................
51
3.1.6
ZUSAMMENFASSUNG
DER
ERGEBNISSE
DES
EXPERIMENTS
1
...............
53
3.2
EINE
HOHE
EXTRAZELLULAERE
NATRIUMKONZENTRATION
BEEINFLUSST
DAS
KORTIKALE
F-AKTIN
.......................................................................................
56
3.2.1
EINE
HOHE
EXTRAZELLULAERE
NATRIUMKONZENTRATION
ERHOEHT
DAS
KORTIKALE
F-AKTIN
...............................................................................
57
3.2.2
AMILORID
REDUZIERT
DAS
KORTIKALE
F-AKTIN
BEI
HOHER
EXTRAZELLULAERER
NATRIUMKONZENTRATION
.............................................
58
II
3.3
SOWOHL
DIE
AKUTE,
ALS
AUCH
DIE
CHRONISCHE
APPLIKATION
VON
SPIRONOLACTON
VERMINDERT
DIE
POLYMERISIERUNG
DES
AKTIN
........
60
4
DISKUSSION
........................................................................................................
64
4.1
DIE
BLOCKIERUNG
DER
ENNAC-FUNKTION
FUEHRT
ZUR
DEPOLYMERISATION
DES
KORTIKALEN
F-AKTINS
............................................................................
65
4.2
DIE
STRUKTUR
DES
ENDOTHELIALEN
ZELLKORTEX
WIRD
DURCH
DEN
NATRIUMEINSTROM
IN
DIE
ZELLE
BESTIMMT
..................................................
68
4.3
SPIRONOLACTON
WIRKT
UEBER
GENOMISCHE
UND
NICHT-GENOMISCHE
MECHANISMEN
............................................................................................70
4.4
SCHLUSSFOLGERUNGEN
..................................................................................
71
4.5
KLINISCHE
IMPLIKATION
.................................................................................75
5
QUELLENVERZEICHNIS
........................................................................................
77
6
CHEMIKALIEN
.....................................................................................................
92
7
ARBEITSMATERIALIEN
UND
-GERATE
....................................................................
94
7.1
ARBEITSMATERIALIEN
.....................................................................................
94
7.2
ARBEITSGERAETE
.............................................................................................
94
8
ABKUERZUNGEN
...................................................................................................
96
9
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
..................................................................................
98
10
TABELLENVERZEICHNIS
.......................................................................................
99
11
LEBENSLAUF
...........................................................
100
12
DANKSAGUNG
....................................................................
101
III
|
| adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
.
1
1.1
DAS
VASKULAERE
SYSTEM
.
1
1.2
DAS
ENDOTHEL
.
2
1.3
DAS
ZYTOSKELETT
UND
DER
ZELLKORTEX
.
3
1.3.1
AKTIN
.
3
1.3.2
DER
ENDOTHELIALE
ZELLKORTEX
.
6
1.4
STICKSTOFFMONOXID
(NO)
.
7
1.5
DIE
KORTIKALE
STEIFIGKEIT
UND
DIE
ENDOTHELIALE
FUNKTION
.
9
1.6
DER
EPITHELIALE
UND
DER
ENDOTHELIALE
NATRIUMKANAL
.
10
1.6.1
DER
EPITHELIALE
NATRIUMKANAL:
AUFBAU,
FUNKTION
UND
REGULATION
.
10
1.6.2
DER
ENDOTHELIALE
NATRIUMKANAL
IM
VERGLEICH
ZUM
EPITHELIALEN
NATRIUMKANAL
.
14
1.7
DAS
ZUSAMMENSPIEL
VON
NATRIUM,
ENNAC,
AKTIN
UND
KORTIKALER
ZELLSTEIFIGKEIT
.
16
1.8
ZIEL
DER
ARBEIT
.
17
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.
19
2.1
ZELLKULTUR
.
19
2.1.1
EA.HY926
ZELLEN
.
19
2.1.2
KULTIVIERUNG
UND
SUBKULTIVIERUNG
DER
ZELLEN
.
19
2.2
BESTIMMUNG
DES
F-AKTINS
IM
ENDOTHELIALEN
ZELLKORTEX
MITTELS
FLUORESZENZFAERBUNGEN
.
22
2.2.1
FLUORESZENZFAERBUNGEN
.
22
2.2.2
KONFOKALE
LASER-SCANNING-MIKROSKOPIE
.
24
2.2.3
MESSPROTOKOLL
.
25
2.3
BESTIMMUNG
DER
F-/G-AKTIN-RATIO
MITTELS
SDS-PAGE
UND
WESTERN
BLOTS
.
31
2.3.1
VORBEREITUNG
DER
PROTEINPROBEN
.
31
2.3.2
SDS-PAGE
.
33
2.3.3
WESTERN
BLOT
.
35
2.3.4
IMMUNDETEKTION
.
36
2.4
EXPERIMENT
1:
BLOCKADE
DES
ENNAC
.
38
2.5
EXPERIMENT
2:
HOHE
EXTRAZELLULAERE
NATRIUMKONZENTRATIONEN
.
39
2.6
EXPERIMENT
3:
ANTAGONISIERUNG
DES
MINERALOKORTIKOIDREZEPTORS
DURCH
SPIRONOLACTON
.
39
2.7
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
.
40
3
ERGEBNISSE
.
41
3.1
DIE
ENNAC-FUNKTION
UND
DAS
KORTIKALE
ZYTOSKELETT
.
42
3.1.1
AMILORID
REDUZIERT
F-AKTIN
UND
BEEINFLUSST
DIE
F-/G-AKTIN-
RATIO
.
42
3.1.2
100
NM
AMILORID
SIND
AUSREICHEND,
UM
DIE
FLUORESZENZINTENSITAET
VON
F-AKTIN
SIGNIFIKANT
ZU
REDUZIEREN
.
45
3.1.3
BENZAMIL
REDUZIERT
F-AKTIN
UND
BEEINFLUSST
DIE
F-/G-AKTIN-
RATIO
.
47
3.1.4
CYTOCHALASIN
D
REDUZIERT
F-AKTIN
OHNE
DIE
F-/G-AKTIN-RATIO
ZU
BEEINFLUSSEN
.
49
3.1.5
DIE
FUNKTIONELLE
ENNAC-BLOCKADE
BEEINFLUSST
UEBERWIEGEND
DAS
KORTIKALE
AKTIN
.
51
3.1.6
ZUSAMMENFASSUNG
DER
ERGEBNISSE
DES
EXPERIMENTS
1
.
53
3.2
EINE
HOHE
EXTRAZELLULAERE
NATRIUMKONZENTRATION
BEEINFLUSST
DAS
KORTIKALE
F-AKTIN
.
56
3.2.1
EINE
HOHE
EXTRAZELLULAERE
NATRIUMKONZENTRATION
ERHOEHT
DAS
KORTIKALE
F-AKTIN
.
57
3.2.2
AMILORID
REDUZIERT
DAS
KORTIKALE
F-AKTIN
BEI
HOHER
EXTRAZELLULAERER
NATRIUMKONZENTRATION
.
58
II
3.3
SOWOHL
DIE
AKUTE,
ALS
AUCH
DIE
CHRONISCHE
APPLIKATION
VON
SPIRONOLACTON
VERMINDERT
DIE
POLYMERISIERUNG
DES
AKTIN
.
60
4
DISKUSSION
.
64
4.1
DIE
BLOCKIERUNG
DER
ENNAC-FUNKTION
FUEHRT
ZUR
DEPOLYMERISATION
DES
KORTIKALEN
F-AKTINS
.
65
4.2
DIE
STRUKTUR
DES
ENDOTHELIALEN
ZELLKORTEX
WIRD
DURCH
DEN
NATRIUMEINSTROM
IN
DIE
ZELLE
BESTIMMT
.
68
4.3
SPIRONOLACTON
WIRKT
UEBER
GENOMISCHE
UND
NICHT-GENOMISCHE
MECHANISMEN
.70
4.4
SCHLUSSFOLGERUNGEN
.
71
4.5
KLINISCHE
IMPLIKATION
.75
5
QUELLENVERZEICHNIS
.
77
6
CHEMIKALIEN
.
92
7
ARBEITSMATERIALIEN
UND
-GERATE
.
94
7.1
ARBEITSMATERIALIEN
.
94
7.2
ARBEITSGERAETE
.
94
8
ABKUERZUNGEN
.
96
9
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
.
98
10
TABELLENVERZEICHNIS
.
99
11
LEBENSLAUF
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12
DANKSAGUNG
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