Epigenetische Regulierung und HDAC Inhibition von kolorektalen Karzinomen:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Freiburg i. Br
[2019]
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| Beschreibung: | IX, 118 Blätter Illustrationen, Diagramme 30 cm |
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
I
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
IV
TABELLENVERZEICHNIS
V
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
...................................................................................................
VI
EINHEITENVERZEICHNIS
......................................................................................
VIII
ZUSAMMENFASSUNG
IX
1
EINLEITUNG
.................................................................................................................
1
1.1
DAS
KOLOREKTALE
KARZINOM
1
1.1.1
EPIDEMIOLOGIE
UND
EINTEILUNG
1
1.1.2
THERAPIEALGORITHMEN
1
1.1.2.1
OPERATIVE
TUMORENTFERNUNG
1
1.1.2.2
ADJUVANTE
CHEMOTHERAPIE
DES
KOLONKARZINOMS
2
1.1.2.3
PERIOPERATIVE
THERAPIE
DES
REKTUMKARZINOMS
2
1.1.2.4
THERAPIE
BEI
METASTASEN
UND
IN
PALLIATIVEN
SITUATIONEN
3
1.1.3
PATHOGENESE
DES
KOLOREKTALEN
KARZINOMS
4
1.1.3.1
DIE
ADENOM-KARZINOM-SEQUENZ
4
1.1.3.2
CHROMOSOMALE
INSTABILITAET
5
1.1.3.3
MIKROSATELLITENINSTABILITAET
6
1.1.3.4
CIMP
PHAENOTYP
7
1.2
EPIGENETIK
8
1.2.1
EPIGENETISCHE
ALTERATIONEN
IN
DER
KOLOREKTALEN
KARZINOGENESE
8
1.2.2
DER
HISTON-CODE
8
1.2.3
EINTEILUNG
DER
HDACS
9
1.2.4
EINFLUSS VON
HDACS
IN
DER
KARZINOGENESE
9
1.2.5
ZELLULAERE
BEDEUTUNG
DER
HDACS
1,
2
UND
3
10
1.2.6
HDAC
EXPRESSION
IM
KOLOREKTALEN
KARZINOM
10
1.3
HDAC
INHIBITOREN
11
1.3.1
WIRKMECHANISMUS
VON
HDAC
INHIBITOREN
11
1.3.2
EINSATZ
VON
HDAC
INHIBITOREN
GEGEN
KOLOREKTALE
KARZINOMZELLLINIEN
IN
VITRO
13
1.3.3
PROFIL
SPEZIFISCHER
HDAC
INHIBITOREN
UND
IHR
EINSATZ
IN
VIVO
14
1.3.3.1
SAHA
(VORINOSTAT)
14
1.3.3.2
MS-275
(ENTINOSTAT)
15
1.3.3.3
FK228
(ROMIDEPSIN)
15
1.3.4
DIVERGENTE
EFFEKTIVITAET
VON
HDAC
INHIBITOREN
IN
VITRO
UND
IN
VIVO
16
1.4
HDAC
INHIBITION
ASSOZIIERTE
KANDIDATENGENE
16
1.4.1
IDENTIFIZIERUNG
NEUER
KANDIDATENGENE
16
1.4.2
FUNKTION
DER
KANDIDATENGENE
UND
IHRE
ROLLE
IN
DER
KARZINOGENESE
17
1.4.2.1
HERUNTERREGULIERTE
GENE
17
FAIM
17
MLKL
18
PHF11
19
RECQL4
19
POLDIP2
20
1.4.2.2
HERAUFREGULIERTE
GENE
22
BCL6
22
PRDM1
23
HES2 23
INHALTSVERZEICHNIS
II
2
ZIELSTELLUNG
.....................................................................................................................
25
3
MATERIAL
......................
27
3.1
REAGENZIEN
UND
REAGENZIEN
KITS
.....................................................................................
27
3.2
PUFFER
UND
LOESUNGEN
..........................................................................................................
28
3.3
VERBRAUCHSMATERIAL
...........................................................................................................
29
3.4
ZELLKULTUR
..............................................................................................................................
30
3.4.1
ZELLLINIEN
..........................................................................................................................30
3.4.2
ZELLKULTUR
MEDIEN
UND
LOESUNGEN
...................................................................................30
3.5
ANTIKOERPER
............................................................................................................................
31
3.5.1
PRIMAERANTIKOERPER:
...........................................................................................................
31
3.5.2
SEKUNDAERANTIKOERPER
........................................................................................................
31
3.5.3
ANTIKOERPER
CHROMATIN-IMMUNPRAEZIPITATION
.................................................................
31
3.6
OLIGONUKLEOTIDE
...................................................................................................................
32
3.6.1
PRIMER
FUER
QUANTITATIVE
ECHTZEIT
PCR
MIT
CDNA
...........................................................
32
3.6.2
PRIMER
FUER
QUANTITATIVE
ECHTZEIT
PCR
NACH
CHROMATIN-IMMUNPRAEZIPITATION
.............
32
3.7
LABOR
EQUIPMENT
UND
SOFTWARE
.......................................................................................
33
3.7.1
LABOR
EQUIPMENT
............................................................................................................
33
3.7.2
SOFTWARE
...........................................................................................................................
34
4
METHODEN
........................................................................................................................
35
4.1
ZELLBIOLOGISCHE
EXPERIMENTE
.............................................................................................
35
4.1.1
VERWENDETE
ZELLLINIEN,
KULTIVIERUNG
UND
KRYOKONSERVIERUNG
....................................
35
4.2
INHIBITOREN
UND
BEHANDLUNG
.............................................................................................
37
4.2.1
INHIBITOREN
......................................................................................................................
37
4.2.2
BEHANDLUNG
DER
ZELLEN
UND
DOSISTESTUNG
......................................................................
37
4.2.3
MTS
ZELLVITALITAETS-ASSAY
.................................................................................................
37
4.2.4
STATISTIK
............................................................................................................................
38
4.3
MOLEKULARBIOLOGISCHE
EXPERIMENTE
.................................................................................
38
4.3.1
MRNA
EXPRESSIONSMUSTER
.............................................................................................
38
4.3.1.1
RNA
ISOLATION
AUS
ZELLEN
........................................................................................................
38
4.3.1.2
CDNA
ERSTSTRANGSYNTHESE
.....................................................................................................
39
4.3.1.3
QUANTITATIVE
ECHTZEIT
PCR
(QPCR)........................................................................................
39
4.3.2
PROTEINANALYSEN
..............................................................................................................
41
4.3.2.1
PROTEINISOLATION
AUS
ZELLEN
....................................................................................................
41
4.3.2.2
ISOLATION
NUKLEAERER
UND
ZYTOPLASMATISCHER
PROTEINE
..........................................................
41
4.3.2.3
BESTIMMUNG
DER PROTEINKONZENTRATION
...............................................................................
42
4.3.2.4
NATRIUMDODECYLSULFAT-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
.............................. 43
4.3.2.5
WESTERN
BLOT
..........................................................................................................................
43
4.3.3
CHROMATIN-IMMUNPRAEZIPITATION
(CHIP)
MIT
QPCR
ANALYSE
.........................................
45
4.3.3.1
ISOLIEREN
DES
CHROMATINS
......................................................................................................
45
4.3.3.2
IMMUNPRAEZIPITATION
..............................................................................................................
46
4.3.3.3
QPCR........................................................................................................................................
47
4.3.3.4
AUSWERTUNG
DER
CHLP-QPCR
..................................................................................................
48
4.4
HISTOLOGIE
UND
IMMUNHISTOCHEMIE
.................................................................................
49
4.4.1
HUMANE
GEWEBEPROBEN
UND
KOLLEKTIVBESCHREIBUNG
.................................................. 49
4.4.2
IMMUNHISTOCHEMIE
........................................................................................................
49
4.4.2.1
DURCHFUEHRUNG
IMMUNHISTOCHEMISCHER
FAERBUNGEN
............................................................. 49
4.4.2.2
AUSWERTUNG
IMMUNHISTOCHEMISCHER
FAERBUNGEN
.................................................................
51
INHALTSVERZEICHNIS
III
5
ERGEBNISSE
......................................................
52
5.1
KOLOREKTALE
KARZINOMZELLLINIEN
EXPRIMIEREN
HDACS
..................................................
52
5.2
DIE
KOLOREKTALE
KARZINOMZELLLINIE
RKO
EXPRIMIERT
HDAC1,
2
UND
3
........................
54
5.3
KOLOREKTALE
KARZINOMZELLLINIEN
REAGIEREN
AUF
EINE
HDAC
INHIBITOR
BEHANDLUNG
MIT
EINEM
DEUTLICHEN
VERLUST
IHRER
VITALITAET
..............
55
5.4
BESTIMMUNG
DER
MRNA
EXPRESSION
VON
MIT
HDAC
INHIBITION
ASSOZIIERTEN
KANDIDATENGENEN
IN
UNBEHANDELTEN
KOLOREKTALEN
KARZINOMZELLLINIEN
....................................................................................
58
5.5
DIE
MRNA
EXPRESSIONSAENDERUNGEN
DER
KANDIDATENGENE
LASSEN
SICH
BEI KOLOREKTALEN
KARZINOMZELLLINIEN
NACH
HDAC
INHIBITOR
BEHANDLUNG
BESTAETIGEN
................................................................
61
5.6
PROTEINEXPRESSION
DES
KANDIDATENGENS
POLDIP2
IN
KOLOREKTALEN
KARZINOMZELLLINIEN
.................................................................................
65
5.7
PROTEINEXPRESSION
DES
KANDIDATENGENS
RECQL4
IN
KOLOREKTALEN
KARZINOMZELLLINIEN
.................................................................................
66
5.8
CHROMATIN-IMMUNPRAEZIPITATION
(CHIP)
..........................................................................
68
5.8.1
ETABLIERUNG
DER
CHIP
......................................................................................................
68
5.8.2
ERGEBNISSE
DER
CHIP
........................................................................................................70
5.9
VALIDIERUNG
DER
POLDIP2
UND
RECQL4
PROTEINEXPRESSION
IN
TUMORGEWEBEN
KOLOREKTALER
KARZINOMPATIENTEN
..................................................
73
6
DISKUSSION
.......................................................................................................................
81
6.1
HDAC
EXPRESSION
UND
ANSPRECHEN
AUF
EINE
HDAC
INHIBITION
IN
KOLOREKTALEN
KARZINOMZELLLINIEN
................................................................................
81
6.2
EXPRESSIONSAENDERUNGEN
VON
MIT
EINER
HDAC
INHIBITION
ASSOZIIERTEN
GENEN
NACH
BEHANDLUNG
.................................................................................................................
84
6.3
MECHANISMUS
DER
VERAENDERTEN
KANDIDATENGEN
MRNA
EXPRESSION
NACH
HDAC
INHIBITION
........................................................................................................
88
6.4
DIE
KANDIDATENGENE
RECQL4
UND
POLDIP2
...................................................................
90
LITERATURVERZEICHNIS
...........................................................................................................
94
ANHANG
................................................................................................................................
113
EIDESSTAATLICHE
VERSICHERUNG
..........................................................................................
116
DANKSAGUNG
........................................................................................................................
118
|
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