Molekulare Mechanismen der durch Makrophagen induzierten oligodendroglialen Migration:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Münster
2019
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1
EINLEITUNG
..........................................................................................................................
1
1.1
MULTIPLE
SKLEROSE
......................................................................................................
1
1.2
REMYELINISIERUNG
ALS
ZUSAETZLICHER
ANSATZ
BEI
DER
MS-THERAPIE?
.......................
3
1.3
MAKROPHAGEN
REGULIEREN
DIE
REMYELINISIERUNG
.....................................................
4
1.4
MECHANISMEN
DER
ZELL-MIGRATION
............................................................................
9
1.5
OLIGODENDROGLIALE
MIGRATION
................................................................................
12
1.6
UL
26,
PF-228
UND
NEUTRALISIERENDE
ANTI-TNF
ANTIKOERPER
.................................
17
1.7
ZIEL
DER
ARBEIT
..........................................................................................................
18
2
MATERIAL
...........................................................................................................................
19
2.1
AUSSTATTUNG
.............................................................................................................
19
2.2
VERBRAUCHSMATERIALIEN
...........................................................................................
21
2.3
LOESUNGEN
UND
PUFFER
..............................................................................................
22
2.4
MEDIUM
UND
ZUSAETZE
.............................................................................................
27
2.4.1
BMM-MEDIUM
...............................................................................................
27
2.4.2
SATO
STOCK
(LOOX)
...........................................................................................
27
2.4.3
OPC-MEDIUM
(SATO)
.......................................................................................
28
2.4.4
M-CSF-HALTIGER
UEBERSTAND
(M-CSF)
...........................................................28
2.5
PRIMER
......................................................................................................................
28
2.6
INHIBITOREN
UND
NEUTRALISIERENDE
ANTIKOERPER
........................................................29
2.7
KITS
...........................................................................................................................
30
2.8
TIERE
.........................................................................................................................
31
3
METHODEN
.........................................................................................................................
31
3.1
KNOCHENMARKSMAKROPHAGEN
..................................................................................
31
3.1.1
GEWINNUNG
VON
KNOCHENMARKSMAKROPHAGEN
............................................
31
3.1.2
AKTIVIERUNG
DER
KNOCHENMARKSMAKROPHAGEN
.............................................
32
3.1.3
FUNKTIONELLE
AKTIVIERUNGSUEBERPRUEFUNG
.........................................................
33
3.2
OLIGODENDROZYTENVORLAEUFERZELLEN
.........................................................................
35
3.2.1
PLL-BESCHICHTUNG
..........................................................................................
35
3.2.2
ISOLATION
...........................................................................................................
35
3.2.3
ZELLKULTUR
UND
AUSSAEEN
..................................................................................
37
3.3
VIABILITAETS-ASSAY
....................................................................................................
38
3.4
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
..........................................................................
38
3.4.1
RNA-ISOLATION
................................................................................................
38
3.4.2
CDNA-SYNTHESE
..............................................................................................
39
3.4.3
PRIMER-ETABLIERUNG
.........................................................................................
40
3.4.4
QUANTITATIVE
ECHTZEIT-PCR
............................................................................42
3.5
MIGRATIONSVERSUCHE
.................................................................................................44
3.5.1
LEBENDZELLMIKROSKOPIE
.................................................................................
44
3.5.2
GERICHTETE
MIGRATION
.......................................................................................
45
3.6
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
.........................................................................................47
3.6.1
GEN-EXPRESSION
..............................................................................................
48
3.6.2
GERICHTETE
MIGRATION
......................................................................................
48
4
ERGEBNISSE
.......................................................................................................................
50
4.1
DIFFERENZIELLE
AKTIVIERUNG
VON
KNOCHENMARKSMAKROPHAGEN
............................
50
4.2
EINFLUSS
VON
MAKROPHAGEN-UEBERSTAENDEN
AUF
DIE
MIGRATION
VON
CEREBRALEN
UND
SPINALEN
OPCS
.........................................................................................................
52
4.2.1
MAKROPHAGEN-UEBERSTAENDE
ZEIGEN
KEINEN
EINFLUSS
AUF
DIE
PROLIFERATION,
DIFFERENZIERUNG
UND
VIABILITAET
VON
CEREBRALEN
UND
SPINALEN
OPCS
..........
52
4.2.2
M(IFNY)
BEEINFLUSST
NICHT
DIE
UNGERICHTETE
MIGRATION
CEREBRALER
UND
SPINALER
OPCS
.................................................................................................
55
4.2.3
M(IFNY)-UEBERSTAND
INDUZIERT
EINE
GESTEIGERTE
GERICHTETE
MIGRATION
CEREBRALER
UND
SPINALER
OPCS
........................................................................
56
4.3
DIE
ROLLE
VON
ERK
BEI
DER
VON
MAKROPHAGEN
INDUZIERTEN
OLIGODENDROGLIALEN
MIGRATION
...........................................................................
59
4.3.1
M(IFNY)
HAT
KEINEN
EINFLUSS
AUF
DIE
OLIGODENDROGLIALE
EXPRESSION
VON
ERKL
UND
ERK2
................................................................................................
60
4.3.2
EINFLUSS
VON
U0126
AUF
DIE
VIABILITAET
SPINALER
OPCS
................................ 60
4.3.3
ERK
INHIBTION
ZEIGT
KEINEN
EINFLUSS
AUF
DIE
PROLIFERATION
UND
DIFFERENZIERUNG
VON
SPINALEN
OPCS
.............................................................
61
4.3.4
ERK-INHIBITION
REDUZIERT
DIE
GESCHWINDIGKEIT
UND
STRECKE
UNGERICHTETER
MIGRATION
.........................................................................................................
63
4.3.5
ERK-INHIBITION
ZEIGT
KEINEN
SIGNIFKANTEN
EINFLUSS
AUF
DIE
GERICHTETE
MIGRATION
SPINALER
OPCS
...............................................................................
63
4.3.6
ERK-INHIBITION
FOERDERT
DIE
MAKROPHAGEN-INDUZIERTE
MIGRATION
............... 64
4.4
DIE
ROLLE
VON
FAK
BEI
DER
VON
MAKROPHAGEN
INDUZIERTEN
OLIGODENDROGLIALEN
MIGRATION
................................................................................................................
66
4.4.1
TNF
UND
VEGF-A
WERDEN
PRAEFERENZIELL
DURCH
M(IFNY)
EXPRIMIERT
...... 66
4.4.2
BEHANDLUNG
VON
OPCS
MIT
M(IFNY)-UEBERSTAND
UND
IFNY
INDUZIERT
DIE
EXPRESSION
VON
TNFRSFL
B
................................................................................
67
4.4.3
EINFLUSS
VON
PF-228
UND
DEM
TNF-NEUTRALISIERENDEN
ANTIKOERPER
XT-22
AUF
DIE
VIABILITAET
VON
SPINALEN
OPCS
..........................................................
68
4.4.4
FAK
INHIBITION
BEEINFLUSST
NICHT
DIE
PROLIFERATION
UND
DIFFERENZIERUNG
VON
SPINALEN
OPCS
.................................................................................................
69
4.4.5
EINFLUSS
DER
INHIBITION
VON
FAK
AUF
DIE
MIGRATION
VON
SPINALEN
OPCS
.
71
4.4.6
FAK-INHIBITION
REDUZIERT
NICHT
DIE
MAKROPHAGEN-INDUZIERTE
MIGRATION
.
73
4.4.7
ANTI-TNF
ANTIKOERPER
XT-22
REDUZIERT
NICHT
DIE
DURCH
MAKROPHAGEN
INDUZIERTE
MIGRATION
.......................................................................................
75
5
DISKUSSION
.......................................................................................................................
77
5.1
THEORETISCHER
HINTERGRUND
.....................................................................................
77
5.2
IFNY
UND
IL-4
INDUZIEREN
EINE
DIFFERENZIELLE
AKTIVIERUNG
VON
BMMS
...........77
5.3
MAKROPHAGEN
BEEINFLUSSEN
DIE
OLIGODENDROGLIALE
MIGRATION
............................
79
5.3.1
EINORDNUNG
DES
EINFLUSSES
VON
PROLIFERATION
UND
DIFFERENZIERUNG
AUF
DIE
UNTERSUCHUNG
DER
GERICHTETEN
MIGRATION
......................................................
79
5.3.2
LINEAR
MIXED
MODELS
ERMOEGLICHEN
EINE
DIFFERENZIERTE
INTERPRETATION
DER
XCELLIGENCE-DATEN
ZUR
GERICHTETEN
MIGRATION
..........................................
80
5.3.3
MAKROPHAGEN
UND
MIKROGLIA
ZEIGEN
EINEN
DIFFERENZIELLEN
EINFLUSS
AUF
VERSCHIEDENE
ASPEKTE
DER
ZELLMIGRATION
......................................................
81
5.4
DIE
ROLLE
VON
ERK
IN
DER
OLIGODENDROGLIALEN
MIGRATION
..................................
82
5.5
WEDER
TNF
NOCH
FAK
VERMITTELN
DIE
MAKROPHAGEN-INDUZIERTE
OLIGODENDROGLIALE
MIGRATION
.................................................................................
84
5.6
METHODISCHE
EINORDNUNG
UND
LIMITATIONEN
DER
UNTERSUCHUNGEN
.....................
87
5.7
ZUSAMMENFASSUNG
DER
ERGEBNISSE
UND
AUSBLICK
...............................................
89
ERGAENZENDE
ABBILDUNGEN
.....................................................................................................
92
LITERATURVERZEICHNIS
...............................................................................................................
96
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
........................................................................................................
111
TABELLENVERZEICHNIS
.............................................................................................................
113
LEBENSLAUF
..........................................................................................................................
114
DANKSAGUNG
..........................................................................................................................
115
ANHANG
......................................................................................................................................
I
|
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