Stabile Amylasen für die biotechnologische Anwendung - Screening und Charakterisierung:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Berlin
Mensch und Buch Verlag
[2019]
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NHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
________________________________________________________________________
1
1.1
B
IOKATALYSE
IN
INDUSTRIELLEN
P
RODUKTIONSPROZESSEN
1
1.2
M
ETAGENOMICS
ZUR
I
DENTIFIZIERUNG
IDEALER
E
NZYME
FUER
DIE
I
NDUSTRIE
2
1.2.1
S
EQUENZBASIERTES
S
CREENING
4
1.2.2
A
KTIVITAETSBASIERTES
S
CREENING
5
1.3
S
TAERKE
6
1.4
STAERKE-ABBAUENDE
ENZYME
8
1.5
CAZ
Y
-K
LASSIFIZIERUNG
VON
A-
A
MYLASEN
UND
IHRE
S
TRUKTUR
10
1.6
A
KTUELLE
B
IOTECHNOLOGISCHE
A
NWENDUNGEN
12
1.7
Z
IELE
DER
A
RBEIT
16
Z
MATERIAL
UND
METHODEN
12
2.1
M
ATERIALIEN
UND
C
HEMIKALIEN
17
2.2
S
TAEMME
,
P
LASMIDE
UND
O
LIGONUKLEOTIDE
17
2.3
K
ULTIVIERUNG
VON
M
IKROORGANISMEN
20
2.3.1
A
NZUCHT
VON
E
SCHERICHIA
COLI
20
2.3.2
F
ERMENTATION
VON
E
SCHERICHIA
COLI
20
2.3.3
A
NREICHERUNG
VON
S
TANDORTPROBEN
EINES
E
RBSENSTAERKE
-G
EWINNUNGSPROZESSES
21
2.4
M
OLEKULARBIOLOGISCHE
M
ETHODEN
21
2.4.1
A
GAROSEGELELEKTROPHORESE
21
2.4.2
D
ENATURIERENDE
G
RADIENTENGELELEKTROPHORESE
22
2.4.3
I
SOLIERUNG
VON
METAGENOMISCHER
DNA
23
2.4.4
I
SOLIERUNG
VON
P
LASMID
-DNA
23
2.4.5
E
XTRAKTION
VON
DNA
AUS
A
GAROSEGELEN
24
2.4.6
E
XTRAKTION
VON
DNA
AUS
DGGE-G
ELEN
24
2.4.7
K
ONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
DNA
25
2.4.8
H
ERSTELLUNG
CHEMISCH
-
KOMPETENTER
Z
ELLEN
25
2.4.9
P
OLYMERASEKETTENREAKTION
25
2.4.10
L
IGATION
26
2.4.11
R
ESTRIKTIONSVERDAU
26
2.4.12
T
RANSFORMATION
CHEMISCH
-
KOMPETENTER
Z
ELLEN
27
2.5
B
IOINFORMATORISCHE
M
ETHODEN
27
2.5.1
S
EQUENZIERUNG
,
A
SSEMBLIERUNG
UND
A
NNOTATION
DER
S
EQUENZIERUNGSDATEN
27
2.5.2
/
NS
/
L
/
CO
-A
NALYSEN
DER
S
EQUENZEN
28
2.6
S
CREENINGMETHODEN
28
2.6.1
S
EQUENZBASIERTES
S
CREENING
29
2.6.2
A
KTIVITAETSBASIERTES
S
CREENING
28
2.7
B
IOCHEMISCHE
M
ETHODEN
30
2.7.1
D
ENATURIERENDE
P
OLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
30
2.7.2
B
ESTIMMUNG
DER
MOLEKULAREN
M
ASSE
31
2.7.3
G
EWINNUNG
VON
R
OHEXTRAKT
31
2.7.4
P
ROTEINREINIGUNG
MITTELS
N
I
2+
-NTA-A
FFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
32
2.7.5
P
ROTEINREINIGUNG
MITTELS
G
ROEEENAUSSCHLUSSCHROMATOGRAPHIE
32
2.7.6
P
ROTEINKONZENTRATIONSBESTIMMUNG
33
2.7.7
A
KTIVITAETSNACHWEIS
IN
SDS-G
ELEN
33
2.7.8
B
ESTIMMUNG
DERA
-A
MYLASE
-A
KTIVITAET
34
2.7.9
B
ESTIMMUNGDES
S
UBSTRATSPEKTRUMS
35
2.7.10
B
ESTIMMUNGDES
T
EMPERATURPROFILS
35
2.7.11
B
ESTIMMUNG
DER
T
EMPERATURSTABILITAET
35
2.7.12
B
ESTIMMUNG
DES
P
H-P
ROFILS
35
2.7.13
B
ESTIMMUNG
DER
P
H-S
TABILITAET
35
2.7.14
B
ESTIMMUNG
DER
KINETISCHEN
P
ARAMETER
36
2.7.15
E
INFLUSS
VON
R
EAGENZIEN
36
2.7.16
C
ALCIUMABHAENGIGKEIT
37
2.7.17
O
XIDATIVE
S
TABILITAET
37
2.7.18
P
RODUKTANALYSE
DURCH
H
OCHLEISTUNGSFLUESSIGKEITSCHROMATOGRAPHIE
38
3
ERGEBNISSE
_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _
_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _
32
3.1
D
IVERSITAETSANALYSEN
EINER
P
ROBE
AUS
DER
S
TAERKE
-
VERARBEITENDEN
I
NDUSTRIE
39
3.1.1
I
DENTIFIZIERUNG
EINES
GEEIGNETEN
S
TANDORTES
39
3.1.2
DGGE-A
NALYSEN
ZUR
B
ESTIMMUNG
DER
D
IVERSITAET
IN
EINZELNEN
P
ROZESSABSCHNITTEN
39
3.1.3
A
USWERTUNG
DES
M
ETAGENOM
-D
ATENSATZES
42
3.1.4
B
IODIVERSITAETSANALYSEN
DES
M
ETAGENOM
-D
ATENSATZES
42
3.2
I
DENTIFIZIERUNG
VON
A
MYLASEN
MIT
H
ILFE
DES
SEQUENZBASIERTEN
S
CREENINGS
44
3.2.1
A
NALYSE
DES
METAGENOMISCHEN
D
ATENSATZES
44
3.2.2
K
LONIERUNG
UND
E
XPRESSION
DER
PUTATIVEN
A
MYLASE
-
KODIERENDEN
G
ENE
AUS
DEM
S
EQUENZBASIERTEN
S
CREENING
46
3.2.3
R
EINIGUNG
DER
PUTATIVEN
A
MYLASEN
46
3.2.4
Q
UALITATIVE
HPLC-A
NALYSEN
47
3.3
I
DENTIFIZIERUNG
NEUER
A
MYLASEN
MITTELS
AKTIVITAETSBASIERTEN
S
CREENINGS
50
3.3.1
S
CREENING
DER
M
ETAGENOM
-B
IBLIOTHEK
EINER
A
NREICHERUNGSKULTUR
AUF
A
LGENKOMPOST
UND
A
NALYSE
DES
G
ENBANK
-K
LONS
50
3.3.2
K
LONIERUNG
UND
E
XPRESSION
VON
AMY
1.2
52
3.3.3
R
EINIGUNG
VON
A
MY
I.2
53
3.3.4
S
CREENING
DER
M
ETAGENOM
-B
IBLIOTHEK
EINER
B
IOGASANLAGE
UND
A
NALYSE
DES
G
ENBANK
-
K
LONS
54
3.3.5
K
LONIERUNG
UND
E
XPRESSION
VON
AMY
2.
AUND
AMY
2.
B
57
3.3.6
R
EINIGUNG
VON
A
MY
2
58
3.3.7
S
EQUENZVERGLEICHE
60
3.4
B
IOCHEMISCHE
C
HARAKTERISIERUNG
VON
A
MY
I.2
UND
A
MY
2
62
3.4.1
S
UBSTRATSPEZIFITAETEN
62
3.4.2
H
YDROLYSEPRODUKTE
63
3.4.3
T
EMPERATURPROFILE
65
3.4.4
T
EMPERATURSTABILITAETEN
67
3.4.5
P
H-P
ROFILE
69
3.4.6
P
H-S
TABILITAETEN
70
3.4.7
K
INETISCHE
P
ARAMETER
72
3.4.8
E
INFLUSS
VON
Z
USAETZEN
AUF
DIE
A
KTIVITAET
VON
A
MY
1.2
UND
A
MY
2
73
3.4.9
C
ALCIUMABHAENGIGKEIT
77
3.4.10
O
XIDATIVE
S
TABILITAET
78
1
DISKUSSION
______________________________________________________________________
80
4.1
D
IVERSITAETSANALYSEN
80
4.1.1
B
EWERTUNG
DER
MOLEKULARBIOLOGISCHEN
M
ETHODEN
ZUR
A
BBILDUNG
DER
D
IVERSITAET
80
4.1.2
V
ERGLEICH
VON
DGGE
UND
N
EXT
G
ENERATION
S
EQUENCING
82
4.1.3
B
EDEUTUNG
DER
IDENTIFIZIERTEN
O
RGANISMEN
FUER
DIE
L
EBENSMITTEL
-
VERARBEITENDE
I
NDUSTRIE
84
4.2
M
ETAGENOM
-A
NALYSEN
ZUR
I
DENTIFIZIERUNG
STABILER
A
MYLASEN
86
4.2.1
S
EQUENZBASIERTES
S
CREENING
86
4.2.2
A
KTIVITAETSBASIERTES
S
CREENING
88
4.2.3
M
ETATRANSKRIPTOM
-A
NALYSE
89
4.3
R
EKOMBINANTE
P
RODUKTION
UND
R
EINIGUNG
DER
IDENTIFIZIERTEN
A
MYLASEN
90
4.3.1
H
ETEROLOGE
E
XPRESSION
IN
E.
COLI
90
4.3.2
A
LTERNATIVE
A
NSAETZE
ZUR
S
TEIGERUNG
DER
A
USBEUTE
VON
A
MY
2
93
4.3.3
R
EINIGUNG
DER
R
EKOMBINANTEN
A
MYLASEN
93
4.4
A
NALYSE
DER
H
YDROLYSEPRODUKTE
VON
A
MY
3-
13
94
4.5
B
IOCHEMISCHE
C
HARAKTERISIERUNG
96
4.5.1
B
IOCHEMISCHE
C
HARAKTERISIERUNG
VON
A
MY
I.
2
96
4.5.2
B
IOCHEMISCHE
C
HARAKTERISIERUNG
VON
A
MY
2
99
4.6
P
ROTEIN
-E
NGINEERING
102
4.6.1
E
RHOEHUNG
DER
T
HERMO
-
UND
L
AGERSTABILITAET
103
4.6.2
V
ERBESSERUNG
DER
OXIDATIVEN
S
TABILITAET
105
4.7
B
IOTECHNOLOGISCHE
A
NWENDUNG
106
5
ZUSAMMENFASSUNG
LOEFI
LITERATURVERZEICHNIS
_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _
_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _
L1UE
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