Modulation des Ischämie-Reperfusionsschadens durch pharmakologische Beeinflussung der MicroRNA-100-Expressionslevel:
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| Veröffentlicht: |
Freiburg im Breisgau
2017
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1
EINLEITUNG
UND
ZIELSETZUNG
4
1.1
ISCHAEMIE-REPERFUSIONSSCHADEN
4
1.1.1
KLINISCHE
RELEVANZ
4
1.1.2
MECHANISMEN
5
1.1.2.1
ELEKTROLYTVERAENDERUNGEN
5
1.1.2.2
SAUERSTOFFPARADOXON
6
1.1.2.3
ENDOTHELIALE
BARRIERE
UND
LEUKOZYTEN
7
1.2
RNA-KLASSEN
9
1.3
MICRORNAS
9
1.3.1
BIOGENESE
10
1.3.2
MODULATION
DER
MICRORNA
EXPRESSIONSLEVEL
12
1.4
MICRORNA-100
12
1.5
ARBEITSHYPOTHESE
UND
ZIELSETZUNG
13
2
MATERIAL
14
2.1
STANDARDPUFFER,
-MEDIEN
UND
-REAGENZIEN
14
2.2
VERSUCHSTIERE
15
2.3
INTRAVITALMIKROSKOPIE
15
2.4 HISTOLOGIE
16
2.5
ENDOTHEL-PERMEABILITAETS-ASSAY
16
2.6
INTERZELLULAERE
ENDOTHELIALE
SPALTENBILDUNG
17
2.7
ANTIKOERPER,
OLIGONUKLEOTIDE
UND
TRANSFEKTIONSREAGENZIEN
17
2.8
AUSSTATTUNG
UND
SOFTWARE
18
3
METHODEN
20
3.1
TIERVERSUCHE
20
3.1.1
VERSUCHSTIERE
20
3.1.2
INTRAVITALMIKROSKOPISCHE
UNTERSUCHUNGEN
20
3.1.2.1
MESSUNG
DER
LEUKOZYTEN-ENDOTHEL-INTERAKTION
23
3.1.2.2
MESSUNG
DER
GEFAESSPERMEABILITAET
24
3.2 HISTOLOGISCHE
UNTERSUCHUNGEN
25
3.2.1
PROBENGEWINNUNG
UND
EINBETTUNG
25
3.2.2
HERSTELLUNG
DER
SCHNITTPRAEPARATE
25
3.2.3
IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG
ZUR
QUANTIFIZIERUNG
DER
LEUKOZYTENIMMIGRATION
25
I
3.3
PCR-ANALYSE
26
3.3.1
MURINE
SKELETTMUSKELPROBEN
26
3.3.2
RNA-ISOLATION 26
3.3.3
CDNA-SYNTHESE 27
3.3.4
MRNA-EXPRESSIONSANALYSE
MITTELS
QUANTITATIVER
REAL-TIME-PCR
27
3.3.5
MICRO-RNA-EXPRESSIONSANALYSE
MITTELS
STEM-LOOP
RT-QPCR
28
3.4
IN
VITRO
VERSUCHE
29
3.4.1
ENDOTHEL-PERMEABILITAETS-ASSAY
29
3.4.2
INTERZELLULAERE
ENDOTHELIALE
SPALTENBILDUNG
30
3.5
STATISTISCHE
DATENAUSWERTUNG
32
4
ERGEBNISSE
33
4.1
INTRAVITALMIKROSKOPISCHE
UNTERSUCHUNGEN
33
4.1.1
VISUALISIERUNG
DER
DISTRIBUTION
DER
INTRAVENOESEN
OLIGONUKLEOTIDE
33
4.1.2
ENDOTHEL-LEUKOZYTEN-INTERAKTION
34
4.1.3
GEFAESSPERMEABILITAET
36
4.1.4
VISUALISIERUNG
VON
VE-CADHERIN
IN
DER
MIKROZIRKULATION
37
4.2
HISTOLOGIE
38
4.3
PCR-ANALYSEN
40
4.3.1
VALIDIERUNG
DER
MICRORNA-100-TRANSFEKTION
MIT
INTRAVENOESEN
OLIGONUKLEOTIDEN
40
4.3.2
EXPRESSION
DER
PROINFLAMMATORISCHEN
INTERLEUKINE
IL-LSS,
IL-6
UND
TNF-A
41
4.4
IN
VITRO
ENDOTHEL-PERMEABILITAETS-ASSAY
43
4.5
IN
VITRO
INTERZELLULAERE
ENDOTHELIALE
SPALTENBILDUNG
43
5
DISKUSSION
45
5.1
ROLLE
UND
REGULATION
DER
MICRORNA-100
IM
IRI
45
5.2
IN
VIVO
MAUSMODELL
46
5.2.1
ENDOTHEL-LEUKOZYTEN-INTERAKTION
47
5.2.2
GEFAESSPERMEABILITAET
48
5.3
EX
VIVO
UNTERSUCHUNGEN
49
5.3.1
HISTOLOGIE
UND
LEUKOZYTENTRANSMIGRATION
49
5.3.2
EXPRESSION
PROINFLAMMATORISCHER
ZYTOKINE
50
5.4
IN
VITRO
UNTERSUCHUNGEN
51
5.4.1
ENDOTHEL-PERMEABILITAETS-ASSAY
51
5.4.2
INTERZELLULAERE
ENDOTHELIALE
SPALTENBILDUNG
51
5.5
LIMITATION
UND
AUSBLICK
53
6
ZUSAMMENFASSUNG
54
II
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
55
LITERATURVERZEICHNIS
59
DANKSAGUNG
68
LEBENSLAUF
69
EIDESSTATTLICHE
VERSICHERUNG
71
ERKLAERUNG
UEBER
BISHERIGE
PUBLIKATIONEN
73
III
|
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