Untersuchungen der Liganden Rezeptor Interaktion der Netrinproteinfamilie:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Köln
[2018]
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NHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS...................................................................................................................................
6
1.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS.................................................................................................................
9
2.
EINLEITUNG..............................................................................................................................................11
2.1 DIE PROTEINFAMILIE DER
NETRINE...............................................................................................................
11
2.2 NETRIN 1 IN
VERTEBRATEN..........................................................................................................................
12
2.3 NETRIN A UND B IN
D.MELANOGASTER.........................................................................................................
15
2.4 UNC-6 IN
C.E/EGANS..................................................................................................................................17
2.5 STRUKTUR DER
NETRINE................................................................................................................................19
2.6
REZEPTOREN...............................................................................................................................................
20
2.6.1 DCC
REZEPTORFAMILIE..............................................................................................
21
2.6.2 UNC-5
REZEPTORFAMILIE..........................................................................................................................
25
2.7 WEITERE REZEPTOREN UND
BINDUNGSPROTEINE..........................................................................................
26
2.7.1
NEOGENIN...................................................................................................................................................26
2.7.2 DSC
AM.....................................................................................................................................................27
2.7.3 NGL REZEPTOREN UND NETRIN G
LIGANDEN............................................................................................
28
2.7.4
INTEGRINE....................................................................................................................................................28
2.8 ZIEL DIESER
ARBEIT.....................................................................................................................................
29
3. MATERIAL UND
METHODEN...............................................................................................................
31
3.1
MATERIAL....................................................................................................................................................
31
3.1.1 EUKARYOTISCHER
EXPRESSIONSVEKTOR........................................................................................................
31
3.1.2
ANTIKOERPER...............................................................................................................................................
31
3.1.3
LOESUNGEN...................................................................................................................................................32
3.2
METHODEN..................................................................................................................................................37
3.2.1 MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN...........................................................................................................
37
3.2.1.1 POLYMERASE
KETTENREAKTION....................................................................................................................
37
3.2.1.2 AGAROSE
GELELEKTROPHORESE....................................................................................................................
38
3.2.1.3 DNA-ISOLIERUNG AUS EINEM
AGAROSEGEL..................................................................................................
39
3.2.1.4
RESTRIKTIONSVERDAU..................................................................................................................................
39
3.2.1.5
LIGATION.....................................................................................................................................................40
3.2.1.6 TRANSFORMATION KOMPETENTER
BAKTERIEN...............................................................................................40
3.2.1.7 PLASMID VERMEHRUNG UND
DNA-ISOLATION.............................................................................................
41
3.2.1.8 BESTIMMUNG DER
DNA-KONZENTRATION...................................................................................................
41
3.2.1.9 DNA-SEQUENZIERUNG................ 41
3.2.2
ZELLKULTUR..................................................................................................................................................
41
3.2.2.1 KULTIVIERUNG VON 293 EBNA
ZELLEN........................................................................................................
41
3.2.2.2 MEDIUMWECHSEL UND PASSAGIEREN VON 293 EBNA ZELLEN
.....................................................................
42
3.2.2.3
TRANSFEKTION..............................................................................................................................................42
3.2.2.4 EINFRIERUNG, LAGERUNG UND AUFTAUEN VON 293 EBNA
ZELLEN................................................................43
3.2.3 BIOCHEMISCHE
METHODEN..........................................................................................................................
43
3.2.3.1 SDS POLYACRYLAMID
GELELEKTROPHORESE..................................................................................................43
3.2.3.2 WESTERN
BLOT.............................................................................................................................................
44
3.2.3.3 AUFREINIGUNG REKOMBINANTER
PROTEINE...................................................................................................45
3.2.3.4 NACHWEIS VON PROTEINEN IN DER COOMASSIE FAERBUNG
............................................................................
46
3.2.3.5
MASSENSPEKTROMETRIE...............................................................................................................................
46
4.
ERGEBNISSE...............................................................................................................................................48
4.1 STRATEGIE DER
ARBEIT.................................................................................................................................
48
4.2 DESIGN UND KLONIERUNG DER
KONSTRUKTE.................................................................................................49
4.3 PROTEINEXPRESSION UND
PROTEINAUFREINIGUNG..........................................................................................51
4.4 BINDUNGSVERHALTEN DER NETRINE MIT SEINEN REZEPTOREN INNERHALB EINER
SPEZIES..............................52
4.4.1
C.ELEGANS....................................................................................................................................................53
4.4.2
D.MELANOGASTER..........................................................................................................................................54
4.4.3 VERTEBRATE SPEZIES
(MAUS)......................................................................................................................
54
4.5 BINDUNGSVERHALTEN DER NETRINE IM KREUZVERSUCH MIT REZEPTOREN ANDERER
SPEZIES
..........................
56
4.5.1
UNC-6........................................................................................................................................................56
4.5.2 NETRIN A UND B
.........................................................................................................................................
57
4.5.3 NETRIN 1
......................................................................................................................................................58
4.5.4 ZUSAMMENFASSUNG DER
BINDUNGSVERSUCHE.............................................................................................59
5.
DISKUSSION................................................................................................................................................60
5.1
EVOLUTION....................................................................................................................................................60
5.2 PROTEINAUFREINIGUNG VON HIS-TAG GEKOPPELTEN PROTEINEN
...................................................................
60
5.3 FUNKTIONELLE
UNTERSUCHUNGEN.................................................................................................................
60
5.3.1 NETRIN A UND B
.........................................................................................................................................
61
5.3.2
KREUZVERSUCHE..........................................................................................................................................
62
5.3.2.1
UNC-5........................................................................................................................................................62
5.3.2.2
DCC............................................................................................................................................................62
5.3.2.3
NEOGENIN...................................................................................................................................................
63
5.4 ABGLEICH DER AMINOSAEURESEQUENZEN IN DER DCC REZEPTORFAMILIE
........................................................
65
5.5 WEITERE
VORGEHENSWEISE.........................................................................................................................
66
5.6 ZUSAMMENFASSUNG UND AUSBLICK UNTER BERUECKSICHTIGUNG DER
MUND-KIEFER-ZAHNHEILKUNDE
.......
67
6.
ZUSAMMENFASSUNG.............................................................................................................................
69
7.
LITERATURVERZEICHNIS...................................................................................................................
70
LEBENSLAUF......................................................................................................................................................78
|
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