Holdings: Untersuchungen der Liganden Rezeptor Interaktion der Netrinproteinfamilie

Untersuchungen der Liganden Rezeptor Interaktion der Netrinproteinfamilie:

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Main Author:	Wrzosek, Paul 1991- (Author)
Format:	Thesis Book
Language:	German
Published:	Köln [2018]
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adam_text	I NHALTSVERZEICHNIS INHALTSVERZEICHNIS................................................................................................................................... 6 1. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS................................................................................................................. 9 2. EINLEITUNG..............................................................................................................................................11 2.1 DIE PROTEINFAMILIE DER NETRINE............................................................................................................... 11 2.2 NETRIN 1 IN VERTEBRATEN.......................................................................................................................... 12 2.3 NETRIN A UND B IN D.MELANOGASTER......................................................................................................... 15 2.4 UNC-6 IN C.E/EGANS..................................................................................................................................17 2.5 STRUKTUR DER NETRINE................................................................................................................................19 2.6 REZEPTOREN............................................................................................................................................... 20 2.6.1 DCC REZEPTORFAMILIE.............................................................................................. 21 2.6.2 UNC-5 REZEPTORFAMILIE.......................................................................................................................... 25 2.7 WEITERE REZEPTOREN UND BINDUNGSPROTEINE.......................................................................................... 26 2.7.1 NEOGENIN...................................................................................................................................................26 2.7.2 DSC AM.....................................................................................................................................................27 2.7.3 NGL REZEPTOREN UND NETRIN G LIGANDEN............................................................................................ 28 2.7.4 INTEGRINE....................................................................................................................................................28 2.8 ZIEL DIESER ARBEIT..................................................................................................................................... 29 3. MATERIAL UND METHODEN............................................................................................................... 31 3.1 MATERIAL.................................................................................................................................................... 31 3.1.1 EUKARYOTISCHER EXPRESSIONSVEKTOR........................................................................................................ 31 3.1.2 ANTIKOERPER............................................................................................................................................... 31 3.1.3 LOESUNGEN...................................................................................................................................................32 3.2 METHODEN..................................................................................................................................................37 3.2.1 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN........................................................................................................... 37 3.2.1.1 POLYMERASE KETTENREAKTION.................................................................................................................... 37 3.2.1.2 AGAROSE GELELEKTROPHORESE.................................................................................................................... 38 3.2.1.3 DNA-ISOLIERUNG AUS EINEM AGAROSEGEL.................................................................................................. 39 3.2.1.4 RESTRIKTIONSVERDAU.................................................................................................................................. 39 3.2.1.5 LIGATION.....................................................................................................................................................40 3.2.1.6 TRANSFORMATION KOMPETENTER BAKTERIEN...............................................................................................40 3.2.1.7 PLASMID VERMEHRUNG UND DNA-ISOLATION............................................................................................. 41 3.2.1.8 BESTIMMUNG DER DNA-KONZENTRATION................................................................................................... 41 3.2.1.9 DNA-SEQUENZIERUNG................ 41 3.2.2 ZELLKULTUR.................................................................................................................................................. 41 3.2.2.1 KULTIVIERUNG VON 293 EBNA ZELLEN........................................................................................................ 41 3.2.2.2 MEDIUMWECHSEL UND PASSAGIEREN VON 293 EBNA ZELLEN ..................................................................... 42 3.2.2.3 TRANSFEKTION..............................................................................................................................................42 3.2.2.4 EINFRIERUNG, LAGERUNG UND AUFTAUEN VON 293 EBNA ZELLEN................................................................43 3.2.3 BIOCHEMISCHE METHODEN.......................................................................................................................... 43 3.2.3.1 SDS POLYACRYLAMID GELELEKTROPHORESE..................................................................................................43 3.2.3.2 WESTERN BLOT............................................................................................................................................. 44 3.2.3.3 AUFREINIGUNG REKOMBINANTER PROTEINE...................................................................................................45 3.2.3.4 NACHWEIS VON PROTEINEN IN DER COOMASSIE FAERBUNG ............................................................................ 46 3.2.3.5 MASSENSPEKTROMETRIE............................................................................................................................... 46 4. ERGEBNISSE...............................................................................................................................................48 4.1 STRATEGIE DER ARBEIT................................................................................................................................. 48 4.2 DESIGN UND KLONIERUNG DER KONSTRUKTE.................................................................................................49 4.3 PROTEINEXPRESSION UND PROTEINAUFREINIGUNG..........................................................................................51 4.4 BINDUNGSVERHALTEN DER NETRINE MIT SEINEN REZEPTOREN INNERHALB EINER SPEZIES..............................52 4.4.1 C.ELEGANS....................................................................................................................................................53 4.4.2 D.MELANOGASTER..........................................................................................................................................54 4.4.3 VERTEBRATE SPEZIES (MAUS)...................................................................................................................... 54 4.5 BINDUNGSVERHALTEN DER NETRINE IM KREUZVERSUCH MIT REZEPTOREN ANDERER SPEZIES .......................... 56 4.5.1 UNC-6........................................................................................................................................................56 4.5.2 NETRIN A UND B ......................................................................................................................................... 57 4.5.3 NETRIN 1 ......................................................................................................................................................58 4.5.4 ZUSAMMENFASSUNG DER BINDUNGSVERSUCHE.............................................................................................59 5. DISKUSSION................................................................................................................................................60 5.1 EVOLUTION....................................................................................................................................................60 5.2 PROTEINAUFREINIGUNG VON HIS-TAG GEKOPPELTEN PROTEINEN ................................................................... 60 5.3 FUNKTIONELLE UNTERSUCHUNGEN................................................................................................................. 60 5.3.1 NETRIN A UND B ......................................................................................................................................... 61 5.3.2 KREUZVERSUCHE.......................................................................................................................................... 62 5.3.2.1 UNC-5........................................................................................................................................................62 5.3.2.2 DCC............................................................................................................................................................62 5.3.2.3 NEOGENIN................................................................................................................................................... 63 5.4 ABGLEICH DER AMINOSAEURESEQUENZEN IN DER DCC REZEPTORFAMILIE ........................................................ 65 5.5 WEITERE VORGEHENSWEISE......................................................................................................................... 66 5.6 ZUSAMMENFASSUNG UND AUSBLICK UNTER BERUECKSICHTIGUNG DER MUND-KIEFER-ZAHNHEILKUNDE ....... 67 6. ZUSAMMENFASSUNG............................................................................................................................. 69 7. LITERATURVERZEICHNIS................................................................................................................... 70 LEBENSLAUF......................................................................................................................................................78
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