Holdings: Untersuchungen zur cAMP-abhängigen Modulation von HCN2-Kanälen bei inflammatorischem und neuropathischem Schmerz

Untersuchungen zur cAMP-abhängigen Modulation von HCN2-Kanälen bei inflammatorischem und neuropathischem Schmerz:

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Bibliographic Details
Main Author:	Höfler, Daniel (Author)
Format:	Thesis Book
Language:	German
Published:	Erlangen ; Nürnberg 2018
Subjects:	Hochschulschrift
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adam_text	INHALTSVERZEICHNIS ABBILDUNGSVERZEICHNIS....................................................................................................IV ABKUERZUNGSVERZEICHNIS.................................................................................................. VI 1 ABSTRACT........................................................................................................................1 2 ZUSAMMENFASSUNG.................................................................................................. 2 3 EINLEITUNG....................................................................................................................3 3.1 NOZIZEPTIVES SYSTEM ....................................................................................... 3 3.2 SCHMERZARTEN....................................................................................................5 3.3 IHUND HCN-KANAELE............................................................................................7 3.4 STRUKTUR VON HCN-KANAELEN.............................................................................8 3.5 HCN-KANAELE IN DER ENTSTEHUNG VON INFLAMMATORISCHEM UND NEUROPATHISCHEM SCHMERZ.............................................................................9 3.6 ZIELSETZUNG...................................................................................................... 11 4 MATERIAL UND METHODEN..........................................................................................13 4.1 EXPRESSION UND AUFREINIGUNG VON GST-FUSIONSPROTEINEN .................... 13 4.1.1 KLONIERUNG GST-FUSIONSPROTEIN EXPRIMIERENDER VEKTOREN..............15 4.1.2 PROTEINEXPRESSION UND LYSAT ................................................................. 16 4.1.3 REINIGUNG...................................................................................................17 4.2 IN-VITRO-PHOSPHORYLIERUNG.............................................................................. 17 4.3 SDS-PA G E...................................................................................................... 18 4.4 COOMASSIE-FAERBUNG......................................................................................20 4.5 WESTERNBLOT.....................................................................................................21 4.5.1 SEMIDRY-ELEKTROBLOT................................................................................. 21 4.5.2 IMMUNDETEKTION........................................................................................ 22 4.6 PKAPS-ALGORITHMUS........................................................................................23 4.7 VERSUCHSTIERE.................................................................................................. 23 4.6 VERHALTENSVERSUCHE........................................................................................ 25 4.8.1 HARGREAVES-TEST...................................................................................... 26 4.8.2 VON FREY-TEST...........................................................................................26 4.9 PFOTENDICKE...................................................................................................... 27 4.10 ENTZUENDUNGSMODELLE..................................................................................... 27 4.10.1 INJEKTION VON KOMPLETTEM FREUND-ADJUVANZ .................................... 27 4.10.2 INJEKTION VON 8-BROMO-CAMP...............................................................28 4.11 NEUROPATHIE-MODELL........................................................................................ 28 4.12 STATISTISCHE ANALYSE...................................................................................... 30 5 ERGEBNISSE................................................................................................................31 5.1 GENERIERUNG EINER SNSHCN2-FEA-MAUS .................................................. 31 5.1.1 GEFLOXTE HCN2-MUTANTE..........................................................................31 5.1.2 NOZIZEPTORSPEZIFISCHE CRE-REKOMBINASE EXPRESSION ..................... 31 5.1.3 NICHT DIREKT CAMP-MODULIERBARER HCN2-KANAL DURCH FEA-MUTATION. .....................................................................................................................32 5.1.4 NOZIZEPTORSPEZIFISCHES HCN2-FEA-KNOCK-LN .................................... 34 5.2 VERHALTENSVERSUCHE....................................................................................... 35 5.2.1 BASALWERTE.................................................................................................36 5.2.2 ENTZUENDUNGSMODELLE............................................................................... 37 5.2.3 NEUROPATHIE............................................................................................... 43 5.3 IN-VITRO-PHOSPHORYLIERUNG.............................................................................46 5.3.1 VORBEREITUNG DER PROTEINEXPRESSION .................................................... 47 5.3.2 EXPRESSION VON FUSIONSPROTEINEN........................................................ 47 5.3.3 IN-VITRO-PHOSPHORYLIERUNG....................................................................... 48 5.4 IN SILICO ANALYSE VON PKA-PHOSPHORYLIERUNGSSTELLEN..............................50 6 DISKUSSION................................................................................................................52 7 ANHANG..................................................................................................................... 57 7.1 VERWENDETE PRIMER ........................................................................................ 57 7.2 VERWENDETE AMINOSAEURE-SEQUENZEN DES HCN2-KANALS......................57 7.3 VERWENDETE ANTIKOERPER..................................................................................59 8 VEROEFFENTLICHUNG...................................................................................................... 61 9 DANKSAGUNG............................................................................................................. 63 10 LITERATURVERZEICHNIS............................................................................................65
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