Untersuchungen zur cAMP-abhängigen Modulation von HCN2-Kanälen bei inflammatorischem und neuropathischem Schmerz:
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| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Erlangen ; Nürnberg
2018
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
ABBILDUNGSVERZEICHNIS....................................................................................................IV
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS..................................................................................................
VI
1
ABSTRACT........................................................................................................................1
2
ZUSAMMENFASSUNG..................................................................................................
2
3
EINLEITUNG....................................................................................................................3
3.1 NOZIZEPTIVES SYSTEM
.......................................................................................
3
3.2
SCHMERZARTEN....................................................................................................5
3.3 IHUND
HCN-KANAELE............................................................................................7
3.4 STRUKTUR VON
HCN-KANAELEN.............................................................................8
3.5 HCN-KANAELE IN DER ENTSTEHUNG VON INFLAMMATORISCHEM UND
NEUROPATHISCHEM
SCHMERZ.............................................................................9
3.6
ZIELSETZUNG......................................................................................................
11
4 MATERIAL UND
METHODEN..........................................................................................13
4.1 EXPRESSION UND AUFREINIGUNG VON GST-FUSIONSPROTEINEN
....................
13
4.1.1 KLONIERUNG GST-FUSIONSPROTEIN EXPRIMIERENDER
VEKTOREN..............15
4.1.2 PROTEINEXPRESSION UND LYSAT
.................................................................
16
4.1.3
REINIGUNG...................................................................................................17
4.2
IN-VITRO-PHOSPHORYLIERUNG..............................................................................
17
4.3 SDS-PA G
E......................................................................................................
18
4.4
COOMASSIE-FAERBUNG......................................................................................20
4.5
WESTERNBLOT.....................................................................................................21
4.5.1
SEMIDRY-ELEKTROBLOT.................................................................................
21
4.5.2
IMMUNDETEKTION........................................................................................
22
4.6
PKAPS-ALGORITHMUS........................................................................................23
4.7
VERSUCHSTIERE..................................................................................................
23
4.6
VERHALTENSVERSUCHE........................................................................................
25
4.8.1
HARGREAVES-TEST......................................................................................
26
4.8.2 VON
FREY-TEST...........................................................................................26
4.9
PFOTENDICKE......................................................................................................
27
4.10
ENTZUENDUNGSMODELLE.....................................................................................
27
4.10.1 INJEKTION VON KOMPLETTEM FREUND-ADJUVANZ
....................................
27
4.10.2 INJEKTION VON
8-BROMO-CAMP...............................................................28
4.11
NEUROPATHIE-MODELL........................................................................................
28
4.12 STATISTISCHE
ANALYSE......................................................................................
30
5
ERGEBNISSE................................................................................................................31
5.1 GENERIERUNG EINER SNSHCN2-FEA-MAUS
..................................................
31
5.1.1 GEFLOXTE
HCN2-MUTANTE..........................................................................31
5.1.2 NOZIZEPTORSPEZIFISCHE CRE-REKOMBINASE EXPRESSION
.....................
31
5.1.3 NICHT DIREKT CAMP-MODULIERBARER HCN2-KANAL DURCH FEA-MUTATION.
.....................................................................................................................32
5.1.4 NOZIZEPTORSPEZIFISCHES HCN2-FEA-KNOCK-LN
....................................
34
5.2
VERHALTENSVERSUCHE.......................................................................................
35
5.2.1
BASALWERTE.................................................................................................36
5.2.2
ENTZUENDUNGSMODELLE...............................................................................
37
5.2.3
NEUROPATHIE...............................................................................................
43
5.3
IN-VITRO-PHOSPHORYLIERUNG.............................................................................46
5.3.1 VORBEREITUNG DER PROTEINEXPRESSION
....................................................
47
5.3.2 EXPRESSION VON
FUSIONSPROTEINEN........................................................
47
5.3.3
IN-VITRO-PHOSPHORYLIERUNG.......................................................................
48
5.4 IN SILICO ANALYSE VON
PKA-PHOSPHORYLIERUNGSSTELLEN..............................50
6
DISKUSSION................................................................................................................52
7
ANHANG.....................................................................................................................
57
7.1 VERWENDETE PRIMER
........................................................................................
57
7.2 VERWENDETE AMINOSAEURE-SEQUENZEN DES
HCN2-KANALS......................57
7.3 VERWENDETE
ANTIKOERPER..................................................................................59
8
VEROEFFENTLICHUNG......................................................................................................
61
9
DANKSAGUNG.............................................................................................................
63
10
LITERATURVERZEICHNIS............................................................................................65
|
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