Untersuchungen zur Physiologie der Blaulichtrezeptoren Channelrhodopsin 1 und Phototropin in Chlamydomonas reinhardtii: = Studies on the physiology of the blue-light receptors Channelrhodopsin 1 and Phototropin in Chlamydomonas reinhardtii
Gespeichert in:
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Erlangen ; Nürnberg
[2018]
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INHALTSVERZEICHNIS
..........................................................................................................................
1
2
ZUSAMMENFASSUNG
.........................................................................................................................
5
3
ABSTRACT
...........................................................................................................................................
8
4
EINLEITUNG
......................................................................................................................................
10
4.1
DER
MODELLORGANISMUS
CHLAMYDOMONAS
REINHARDTII
.........................................................
10
4.2
DER
AUGENFLECKAPPARAT
..........................................................................................................
11
4.3
CHANNELRHODOPSINE
................................................................................................................
14
4.4
PHOTOTROPIN
.............................................................................................................................
16
4.5
GEISSELN
.....................................................................................................................................
19
4.5.1
INTRAFLAGELARER
TRANSPORT
(IFT)
.....................................................................................
20
4.5.2
CENTRAL
PAIR
COMPLEX
(CPC)
........................................................................................
21
4.5.3
RADIAL
SPOKES
(RS)
UND
CAM-
AND
SPOKE-ASSOCIATED
COMPLEX
(CSC)
...................
22
4.5.4
DYNEINE
............................................................................................................................
24
4.6
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
...........................................................................................................
26
5
MATERIAL
UND
METHODEN
.........................................................................................................
29
5.1
GERAETE
......................................................................................................................................
29
5.2
KULTURMEDIEN
.........................................................................................................................
31
5.3
STAEMME
UND
KULTURBEDINGUNGEN
.........................................................................................
32
5.3.1
KLEINE
BATCH-KULTUREN
...................................................................................................
33
5.3.2
MASSENKULTUREN
...............................................................................................................
33
5.4
PHOSPHORYLIERUNGS-ASSAYS
....................................................................................................
34
5.4.1
ALLGEMEINE
PHOSPHORYLIERUNGS-ASSAYS
.......................................................................
34
5.4.2
PH-SCHOCK
.......................................................................................................................
35
5.4.3
PROTEIN-DEPHOSPHORYLIERUNG
DURCH
X-PHOSPHATASE
.....................................................
36
5.5
AUGENFLECKISOLATION
...............................................................................................................
37
5.6
GEISSELISOLATIONEN
UND
FRAKTIONIERUNG
.................................................................................
39
5.6.1
STANDARD-GEISSELISOLATION
UND
EXTRAKTION
..................................................................... 39
1
5.6.2
FRAKTIONIERUNG
MITTELS
LINEARER
SACCHAROSEGRADIENTEN
................................................
41
5.6.3
GEISSELISOLATION
UNTER
KONTROLLIERTEN
LICHTBEDINGUNGEN
..............................................
41
5.6.4
PROTEINAUFBEREITUNG
DER
GEISSELISOLATIONEN
UND
SACCHAROSE-GRADIENTEN-FRAKTIONEN42
5.7
PROTEINBESTIMMUNG NACH
NEUHOFF
........................................................................................
45
5.8
GELELEKTROPHORESEN
UND
WESTERN-BLOT
................................................................................
46
5.8.1
SDS-PAGE,
WESTERN-BLOT
UND
IMMUNFAERBUNG
...........................................................
46
5.8.2
PHOS-TAG-PAGE
...............................................................................................................
48
5.8.3
PDA-GEL
..........................................................................................................................
51
5.8.4
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
..............................................................................................
52
5.9
MS-PRAEPARATION
.......................................................................................................................
54
5.10
PHOTOTAXIS-ASSAY
.................................................................................................................
57
5.11
GLASPERLENREINIGUNG
.............................................................................................................
58
5.12
DOKUMENTATION
UND
AUSWERTUNG
........................................................................................
58
5.12.1
FOTO-DOKUMENTATION
.....................................................................................................
58
5.12.2
QUANTIFIZIERUNG
DER
WESTEM-BLOTS
.............................................................................
58
5.12.3
BESTIMMUNG
DES
APPARENTEN
MOLEKULARGEWICHTS
......................................................
59
6
ERGEBNISSE
.................................................................................................................................
60
6.1
PHOSPHORYLIERUNGSANALYSE
VON
CHRL
..................................................................................
60
6.2
X-PROTEIN-PHOSPHATASEBEHANDLUNG
VON
CHRL
....................................................................
62
6.3
CHRL-PHOSPHORYLIERUNG
UNTER
LICHTEINFLUSS
.......................................................................64
6.4
VERAENDERUNG
DER
PHOSPHORYLIERUNG
VON
CHRL
DURCH
BEEINFLUSSUNG
DES
MEMBRANPOTENTIALS
.......................................................................................................................
69
6.5
EINFLUSS
VON
KALZIUMIONEN
AUF
DIE
PHOSPHORYLIERUNG
VON
CHRL
....................................
72
6.5.1
EINFLUSS
VON
KALZIUM-
UND
PH-SCHOCK
AUF
DIE
PHOSPHORYLIERUNG
VON
CHRL
.........
74
6.5.2
VERDRAENGUNG
VON
KALZIUM
DURCH
BARIUM
....................................................................
76
6.6
EFFEKTE
VON
1BMX
AUF
DIE
PHOSPHORYLIERUNG
VON
CHRL
..................................................
77
6.7
WIRKUNG
VON
PHOSPHATASEINHIBITOREN
AUF
DIE
PHOSPHORYLIERUNG
VON
CHRL
...................
79
6.8
EINFLUSS
VON
IBMX
UND
SANGUINARIN
AUF
DAS
PHOTOTAKTISCHE
VERHALTEN
VON
C.
REINHARDTII
......................................................................................................................................
81
6.9
UNTERSCHIEDLICHE
PHOSPHORYLIERUNGSAKTIVITAET
VON
PHOT
IN
WILDTYP
UND
KIN-
UEBEREXPRESSIONSSTAMM
................................................................................................................
82
6.9.1
AUTOPHOSPHORYLIERUNG
VON
PHOT
...................................................................................
82
6.9.2
UNTERSCHIEDE
IN
DEN
PHOSPHORY
1
IERUNGSMUSTEM
DER
GEISSELN
....................................
84
6.10
LICHTABHAENGIGE
LOKALISATIONSAENDERUNGEN
VON
PHOT
IN
DER
GEISSEL
.................................
85
6.11
LOKALISATION
VON
PHOT
UND
POTENTIELLEN
INTERAKTIONSPARTNERN
IN
DER
GEISSEL
..................
87
6.12
IDENTIFIZIERUNG
DER
IN
DEN
KIN-MUTANTEN
DIFFERENTIELL
PHOSPHORYLIERTEN
AXONEMALEN
PROTEINE
..........................................................................................................................................
89
6.12.1
FRAKTIONIERUNG
DER
KCL
UND
KL-EXTRAKTE
..................................................................
89
6.12.2
IDENTIFIZIERUNG
DER
BANDEN
DURCH
MS
.......................................................................
91
6.13
VERTEILUNG
VON
PHOT
IN
SACCHAROSE-DICHTEGRADIENTEN
VERSCHIEDENER
GEISSELMUTANTEN
93
6.13.1
RS-MUTANTE
...................................................................................................................
93
6.13.2
CPC-MUTANTE
................................................................................................................
95
6.13.3
DYNEIN-MUTANTE
............................................................................................................
97
6.14
AENDERUNG
DES
SACCHAROSE-DICHTEGRADIENTENS
UND
ABSCHAETZUNG
DER
GROESSE
DES
PHOT-
KOMPLEXES
....................................................................................................................................
98
6.15
KOMPLEXAUFTRENNUNG
MIT
AGAROSEGEL
UND
IDENTIFIZIERUNG
POTENTIELLER
INTERAKTIONSPARTNER
.........................................................................................
101
7
DISKUSSION
...............................................................................................................................
107
7.1
ANALYSEN
ZUM
CHRL
.............................................................................................................
107
7.1.1
PHOSPHORYLIERUNGSSTELLEN
VON
CHRL
...........................................................................
107
7.1.2
BEEINFLUSSUNG
DER
PHOSPHORYLIERUNG
VON
CHRL
DURCH
LICHT
...................................
110
7.1.3
MANIPULATION
DES
RUHE-MEMBRAN-POTENTIALS
BEEINFLUSST
DEN
PHOSPHORYLIERUNGSSTATUS
DES
CHRL.
:
.............................................................................
113
7.1.4
BEEINFLUSSUNG
DER
PHOSPHORYLIERUNG
VON
CHRL
DURCH
KALZIUM
.............................
117
7.1.5
EINFLUSS
VON
IBMX
UND
SANGUINARIN
AUF
DIE
PHOSPHORYLIERUNG
VON
CHRL
UND
DAS
PHOTOTAKTISCHE
VERHALTEN
VON
C.
REINHARDTII
.......................................................................
119
7.2
ANALYSEN
ZUM
PHOTOTROPIN
..................................................................................................
122
7.2.1
PHOT-AUTOPHOSPHORYLIERUNG
UND
EIN
PHOT-KINASE-DOMAENE-UEBEREXPREMIERENDER
STAMM
......................................................................................................................................
122
7.2.2
LOKALISATION
VON
PHOT
IN
DER
GEISSEL
UND
IDENTIFIZIERUNG
VON
ZWEI
POTENTIELLEN
INTERAKTIONSPARTNEM
................................................................................................................
123
7.2.3
ANALYSE
DIVERSER
AXONEMMUTANTEN
MIT
LINEAREN
SACCHAROSE-DICHTEGRADIENTEN
...
125
7.2.4
PROTEINAUFTRENNUNG
MIT
AGAROSEGEL
UND
MS-ANALYSE
DES
PUTATIVEN
PHOT-KOMPLEXES
128
7.3
AUSBLICK
.................................................................................................................................
131
8.
ANHANG
.......................................................................................................................................
133
8.1
MS-ERGEBNISSE
DER
MIT
EINEM
AGAROSEGEL
AUFGETRENNTEN,
ELEKTROPHORETISCH
HERAUSGELOESTEN
AXONEM-PROTEINE
.............................................................................................
133
8.2.
SAEMTLICHE
AKZEPTIERTE
CHRL
PHOSPHOPEPTIDE
...................................................................
138
9
LITERATURVERZEICHNIS
...................................................................................................
146
10
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
...........................................................................................................
166
11
TABELLEN
VERZEICHNIS
.................................................................................................................
168
12
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
..........................................................................................................
169
13
DANKSAGUNG
..............................................................................................................................
171
14
EIDESSTATTLICHE
ERKLAERUNG
......................................................................................................
172
15
PUBLIKATIONEN
...........................................................................................................................
173
|
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| spelling | Boness, David Verfasser aut Untersuchungen zur Physiologie der Blaulichtrezeptoren Channelrhodopsin 1 und Phototropin in Chlamydomonas reinhardtii = Studies on the physiology of the blue-light receptors Channelrhodopsin 1 and Phototropin in Chlamydomonas reinhardtii vorgelegt von David Boness Studies on the physiology of the blue-light receptors Channelrhodopsin 1 and Phototropin in Chlamydomonas reinhardtii Erlangen ; Nürnberg [2018] 173 Seiten Illustrationen, Diagramme 21 cm txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Dissertation Friedrich-Alexander-Universität Erlangen-Nürnberg 2018 Phototropin (DE-588)4767756-9 gnd rswk-swf Pflanzenphysiologie (DE-588)4045580-4 gnd rswk-swf Chlamydomonas reinhardii (DE-588)4147746-7 gnd rswk-swf Channelrhodopsin-1 (DE-588)1110990081 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Chlamydomonas reinhardii (DE-588)4147746-7 s Pflanzenphysiologie (DE-588)4045580-4 s Phototropin (DE-588)4767756-9 s Channelrhodopsin-1 (DE-588)1110990081 s DE-604 B:DE-101 application/pdf http://d-nb.info/1182058043/04 Inhaltsverzeichnis DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=030935249&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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