Hormonelle und parakrine Beeinflussung der endometrialen Stroma-Epithel-Interaktionen in einem humanen endometrialen 3D-Kokultursystem:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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Aachen
[2018?]
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS.................................................................................................
IV
1
EINLEITUNG.................................................................................................................
1
1.1 DIE ANATOMIE DES
ENDOMETRIUMS...................................................................................
1
1.2
DIE VIER ENDOMETRIALEN PHASEN IM MENSTRUATIONSZYKLUS
.2
DEZIDUALISIERUNG..
1.3.1
MORPHOLOGIE.....................................................................................................................
3
1.3.2
PROLAKTIN............................................................................................................................4
1.3.3 DEZIDUALISIERUNG
IN-VITRO.................................................................................................5
1.4
STEROIDHORMONREZEPTOREN.................................................................................................5
1.4.1 AUFBAU UND
SIGNALTRANSDUKTION......................................................................................6
1.4.2 ESTROGENREZEPTOREN IM
ENDOMETRIUM............................................................................
7
1.4.3 PROGESTERONREZEPTOREN IM
ENDOMETRIUM.......................................................................7
1.5
STROMA-EPITHEL-INTERAKTIONEN..........................................................................................
8
1.5.1 HAND2 IM
ENDOMETRIUM...................................................................................................9
1.6 3D-KOKULTUR UND
ZELLLINIEN.............................................................................................10
2
ZIELSETZUNG.............................................................................................................12
3 MATERIAL UND
METHODEN.......................................................................................
13
3.1
ZELLKULTUR...........................................................................................................................
13
3.1.1 GEWINNUNG HUMANER ENDOMETRIALER
ZELLEN.................................................................13
3.1.2 ZELLISOLATION UND
SEPARATION.........................................................................................14
3.1.3
STROMAZELLLINIEN.......................................................................................
16
3.1.4
EPITHELZELLLINIE...............................................................................................................
16
3.1.5
KULTIVIERUNG....................................................................................................................17
3.1.6
DEZIDUALISIERUNG............................................................................................................21
3.2
PROLAKTINBESTIMMUNG......................................................................................................
24
3.2.1
FLUSHPROBEN....................................................................................................................
24
3.2.2 PROLAKTIN
ELISA.............................................................................................................26
3.3
IMMUNFLUORESZENZ............................................................................................................27
3.3.1
GEWEBE............................................................................................................................27
3.3.2 ENDOMETRIALE STROMAZELLEN
..........................................................................................
30
3.3.3 VERWENDETE ANTIKOERPER, KONTROLLSEREN, PUFFER- UND EINDECKLOESUNGEN
...................
35
3.4
KOKULTUR.............................................................................................................................38
3.4.1 VORBEREITUNG ENDOMETRIALER STROMAZELLEN
.................................................................
39
3.4.2 VORBEREITUNG DES MATRIGELS FUER 3D-KULTUREN
.............................................................
40
T
3.4.3 EINBRINGEN VON ISHIKAWA-EPITHELZELLEN IN M
ATRIGEL..................................................40
3.4.4 EINBRINGEN VON PRIMAEREN HEECS IN MATRIGEL
............................................................
41
3.4.5
3D-KOKULTIVIERUNG.........................................................................................................41
3.4.6
3D-EPITHEL-MONOKULTUREN.............................................................................................43
3.5
IMMUNHISTOCHEMIE...........................................................................................................
45
3.5.1 EINBETTUNG UND FIXIERUNG DER
MATRIGEL-EPITHELZELL-KISSEN......................................45
3.5.2
PARAFFINSCHNITTE..............................................................................................................
46
3.5.3
HAEMATOXYLIN-EOSIN-FAERBUNG.........................................................................................47
3.5.4 ENTPARAFFINIERUNG UND ANTIGENDEMASKIERUNG
............................................................
48
3.5.5 INDIREKTER ANTIGENNACHWEIS AN EPITHELZELLEN
............................................................
49
3.6 REAL TIME REVERSE TRANSKRIPTASE POLYMERASEKETTENREAKTION
.................................
52
3.6.1 ZELLAUFSCHLUSS UND
RNA-ISOLIERUNG..............................................................................53
3.6.2 BESTIMMUNG DER RNA-KONZENTRATION
........................................................................
53
3.6.3
CDNA-SYNTHESE.............................................................................................................
53
3.6.4 REAL TIME R T-PC R
..........................................................................................................54
3.7
AUSWERTUNG........................................................................................................................
55
3.7.1 MIKROSKOPIE UND FOTODOKUMENTATION
..........................................................................
55
3.7.2
BILDBEARBEITUNG..............................................................................................................
56
3.7.3 STATISTIK UND
SATZ............................................................................................................
56
ERGEBNISSE..............................................................................................................57
4.1 DEZIDUALISIERUNG ENDOMETRIALER STROMAZELLEN
IN-VITRO.......................................... 57
4.1.1 DEZIDUALISIERUNGSVERLAUF VON PRIMAEREN H ESCS
........................................................
58
4.1.2 DEZIDUALISIERUNGSVERLAUF DER THESC-ZELLLINIE
.........................................................
66
4.1.3 DEZIDUALISIERUNGSVERLAUF DER ST-T 1 B-ZELLLINIE
..........................................................
70
4.1.4 ZUSAMMENFASSUNG DER ERGEBNISSE ZUR DEZIDUALISIERUNG
..........................................
72
4.2
IMMUNFLUORESZENZ-REAKTIONEN......................................................................................74
4.2.1 KRYOSTATPROBEN: DIE STROMALE EXPRESSION VON HAND2 UEBER DEN ZYKLUS
.......................
74
4.2.2 ENDOMETRIALE STROMAZELLEN IN-VITRO:
FIXIERUNGSETABLIERUNG.....................................80
4.2.3 ENDOMETRIALE STROMAZELLEN IN-VITRO: MARKIERUNGSETABLIERUNG FUER ER
UND PR
......
80
4.2.4 VERGLEICH VON THESCS MIT PRIMAEREN HESCS: EXPRESSION VON
HORMONREZEPTOREN
UND HAND2 NACH HORMONSUBSTITUTION
.........................................................................
89
4.2.5 VERGLEICH VON ST-TLBS MIT PRIMAEREN HESCS: EXPRESSION VON
HORMONREZEPTOREN,
CONNEXIN 43 UND HAND2 NACH
HORMONSUBSTITUTION...................................................95
4.3 3D-KOKULTURVERSUCHE: MORPHOLOGISCHE VERAENDERUNG IM VERLAUF
......................
104
4.4 IMMUNHISTOCHEMIE-REAKTIONEN
..................................................................................
112
4.4.1 EPITHELIALES WACHSTUM UND HORMONREZEPTOR-EXPRESSION NACH
3D-KOKULTUR
....
114
4.4.2 EPITHELIALES WACHSTUM UND HORMONREZEPTOR-EXPRESSION IN
3D-MONOKULTUR UNTER
HORMONSUBSTITUTION......................................................................................................
125
4.4.3 EPITHELIALES WACHSTUM UND HORMONREZEPTOR-EXPRESSION IN
3D-MONOKULTUR UNTER
SUBSTITUTION STROMALEN
ZELLKULTURUEBERSTANDS............................................................132
4.5 REAL TIME RT-PCR AUS STROMALER R N A
....................................................................
138
4.5.1 GENEXPRESSION VON PROLAKTIN NACH KOKULTIVIERUNG UND
HORMONSUBSTITUTION
.....
138
4.5.2 GENEXPRESSION VON HAND2 NACH KOKULTIVIERUNG UND HORMONSUBSTITUTION
..........
140
4.5.3 GENEXPRESSION VON FGF1 NACH KOKULTIVIERUNG UND HORMONSUBSTITUTION
............
142
4.5.4 GENEXPRESSION VON FGF2 NACH KOKULTIVIERUNG UND HORMONSUBSTITUTION
.............
142
4.5.5 STROMALE GENEXPRESSION UND EPITHELIALE PROLIFERATION IN
KOKULTURVERSUCH 3
.......
145
4.6 PROLAKTINKONZENTRATION UTERINER FLUSHPROBEN
....................................................147
5
DISKUSSION.............................................................................................................
150
5.1 ETABLIERUNG IMMORTALISIERTER STROMAZELLLINIEN FUER
DEZIDUALISIERUNGSANSAETZE. 150
5.1.1 DEZIDUALISIERUNG
IN-VITRO............................................................................................150
5.1.2 HORMONREZEPTOR-EXPRESSION IN-VITRO: PROGESTERONREZEPTOR
....................................
154
5.1.3 HORMONREZEPTOR-EXPRESSION IN-VITRO: ESTROGENREZEPTOR
.........................................
157
5.1.4 HAND2-EXPRESSION IM ENDOMETRIUM UND
IN-VITRO....................................................158
5.1.5 CONNEXIN 43-EXPRESSION
IN-VITRO...............................................................................159
5.1.6 ZUSAMMENFASSUNG: IMMORTALISIERTE STROMAZELLLINIEN
...........................................
160
5.2 EIN 3D-KOKULTURSYSTEM FUER STROMA-EPITHEL-INTERAKTIONEN UNTER DER
DEZIDUALISIERUNG.............................................................................................................
161
5.2.1 3D-KOKULTURSYSTEME: MODELLAUFBAU UND MORPHOLOGIE
..........................................
161
5.2.2 EINFLUSS DER DEZIDUALISIERUNG AUF EPITHELIALE PROLIFERATION IN
3D-KOKULTUR
........
163
5.2.3 EINFLUSS DER DEZIDUALISIERUNG AUF HORMONREZEPTOR-EXPRESSION IN
3D-KOKULTUR 166
5.2.4 GRENZEN UND
AUSBLICK.............................................................................
.
..................
168
6
ZUSAMMENFASSUNG...............................................................................................
169
7
SUMMARY....................................................................................
.
170
8
LITERATURVERZEICHNIS............................................................................................171
I.
MATERIALTABELLEN.......................................................................................................
I
II.
HERSTELLERVERZEICHNIS.........................................................................................
VIII
III.
ABBILDUNGSVERZEICHNIS...........................................................................................X
IV.
TABELLENVERZEICHNIS.............................................................................................XII
V. KONGRESSPRAESENTATION
..........................
XIV
VI.
DANKSAGUNG..........................................................................................................
XV
VH.
ERKLAERUNGEN.........................................................................................
XVIII
ITT
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