Verfügbarkeit: Einfluss von Dimethylsulfoxid auf die frühe embryonale Entwicklung des Rindes in vitro

Einfluss von Dimethylsulfoxid auf die frühe embryonale Entwicklung des Rindes in vitro:

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Bibliographische Detailangaben
1. Verfasser:	Stöhr, Judith (VerfasserIn)
Format:	Abschlussarbeit Buch
Sprache:	German
Veröffentlicht:	Giessen VVB Laufersweiler Verlag 2018
Ausgabe:	1. Auflage
Schriftenreihe:	Edition scientifique
Schlagworte:	cattle reproduction pathology research embryo development Hochschulschrift
Online-Zugang:	Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis
Beschreibung:	iii, 182 Seiten Illustrationen, Diagramme
ISBN:	9783835966925

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adam_text	INHALTSVERZEICHNIS 1 EINLEITUNG........................................................................................................................................... 1 2 LITERATUR.............................................................................................................................................4 2.1 IN-VITRO-PRODUKTION VON EMBRYONEN...............................................................................................4 2.2 DIMETHYLSULFOXID (DMSO)................................................................................................................9 2.2.1 PHYSIKALISCHE UND CHEMISCHE EIGENSCHAFTEN...................................................................... 9 2.2.2 ANWENDUNGSBEREICHE DES DIMETHYLSULFOXIDS................................................................... 10 2.2.3 AUSWIRKUNGEN VON DMSO AUF ZELLEN.................................................................................11 2.2.4 EINSATZ VON DMSO IN DER EMBRYONENKULTUR..................................................................... 19 2.3 GENOMAKTIVIERUNG BOVINER EMBRYONEN....................................................................................... 25 2.4 MESSENGER RNA-EXPRESSION IN PRAEIMPLANTATORISCHEN BOVINEN EMBRYONEN ............................ 27 2.4.1 GLUKOSETRANSPORTER (SLC2A3).............................................................................................28 2.4.2 GLUKOSE-6-PHOSPHAT-DEHYDROGENASE (G6PD)...................................................................30 2.4.3 HITZESCHOCKPROTEIN 70 (HSPA1A)....................................................................................... 31 2.4.4 ANTI-APOPTOTISCHE (B-ZELL CLL/LYMPHOMA 2 LIKE 1) UND PRO-APOPTOTISCHE GENE (BCL-2 ASSOZIIERTES X PROTEIN) DER BCL-2 FAMILIE......................................................................... 34 2.4.5 FETTSAEURE-SYNTHASE FASN (FATTY ACID SYNTHASE) .............................................................. 36 2.4.6 STEAROYL-COA-DESATURASE 1 (SCD1)....................................................................................37 2.4.7 ACETYL-COENZYMA-ACYLTRANSFERASE 1 (ACAA1) UND CARNITIN- PALMITOYL-TRANSFERASE 2 (CPT2).................................................................................................................................... 39 3 MATERIAL UND METHODEN................................................................................................................43 3.1 IN-VITRO-PRODUKTION DER EMBRYONEN............................................................................................ 43 3.1.1 HERKUNFT UND TRANSPORT DER OVARIEN ................................................................................ 43 3.1.2 GEWINNUNG DER KUMULUS-OOZYTEN-KOMPLEXE ................................................................. 44 3.1.3 SELEKTION DER KUMULUS-OOZYTEN-KOMPLEXE......................................................................45 3.1.4 IN-VITRO-MATURATION............................................................................................................. 46 3.1.5 IN-VITRO-FERTILISATION............................................................................................................ 47 3.1.6 IN-VITRO-KULTIVIERUNG............................................................................................................ 48 3.2 BESTIMMUNG DER OSMOLALITAET DES KULTIVIERUNGSMEDIUMS.......................................................... 49 3.3 TEILUNGS- UND ENTWICKLUNGSRATEN..................................................................................................50 3.4 LEBEND-TOT-FAERBUNG MIT HOECHST UND ETHIDIUM HOMODIMER...................................................51 3.5 BESTIMMUNG DER ANZAHL APOPTOTISCHER ZELLEN DURCH TUNEL-FAERBUNG.....................................54 3.6 ERMITTLUNG DER INTRAEMBRYONALEN FETTAKKUMULATION ANHAND OIL-RED.....................................56 3.6.1 FARBANALYSE MITTELS DER BEARBEITUNGS- UND AUSWERTESOFTWARE......................................57 3.7 ANALYSE DES INNERE ZELLMASSE/TROPHEKTODERM-VERHAELTNISSES DER EMBRYONEN MITTELS HOECHST UND PROPIDIUMIODID.........................................................................................................59 3.8 MESSENGERRNA-ANALYSE VIA RT-QPCR............................................................................................61 3.8.1 ISOLIERUNG DER MRNA............................................................................................................63 3.8.2 REVERSE TRANSKRIPTION..........................................................................................................64 3.8.3 QUANTITATIVE POLYMERASE-KETTENREAKTION ......................................................................... 65 3.9 STATISTISCHE AUSWERTUNG................................................................................................................ 68 3.10 VERSUCHSAUFBAU.............................................................................................................................. 69 4 ERGEBNISSE........................................................................................................................................70 4.1 ERSTELLUNG DER IN VITRO PRODUZIERTEN EMBRYONEN ........................................................................ 70 4.1.1 ERGEBNISSE DER OSMOLALITAETSMESSUNGEN ........................................................................... 70 4.1.2 ERMITTLUNG DER TEILUNGS- UND ENTWICKLUNGSRATEN ............................................................ 71 4.1.3 RESULTATE DER LEBEND-TOT-FAERBUNG.................................................................................... 73 4.1.4 ERGEBNISSE DER TUNEL-FAERBUNG..........................................................................................75 4.1.5 RESULTATE DER OIL-RED FAERBUNG............................................................................................78 4.1.6 AUSWERTUNG DER ZELLZAHLEN VON INNERER ZELLMASSE (ICM) UND TROPHEKTODERM (TE)... 79 4.2 DARSTELLUNG DER EMBRYONALEN MRNA-EXPRESSION DER VERSCHIEDENEN ENTWICKLUNGSRELEVANTEN GENTRANSKRIPTE................................................................................................................................ 82 4.2.1 ACETYL-COENZYMA-ACYLTRANSFERASE 1 (ACAA1)..................................................................83 4.2.2 FETTSAEURE-SYNTHASE (FASN).................................................................................................83 4.2.3 CARNITIN-PALMITOYL-TRANSFERASE 2 (CPT2) ........................................................................... 83 4.2.4 STEAROYL-COENZYMA-DESATURASE 1 (SCD1) ........................................................................ 83 4.2.5 GLUKOSETRANSPORTER TYP 3 (SLC2A3)................................................................................... 84 4.2.6 GLUKOSE-6-PHOSPHAT-DEHYDROGENASE (G6PD)...................................................................84 4.2.7 HITZESCHOCKPROTEIN 70 (HSPA1A)....................................................................................... 85 4.2.8 BCL2-LIKE-PROTEIN 1 (BCL2L1) UND BCL2-ASSOZIIERTES X PROTEIN (BAX) ........................... 86 5 DISKUSSION........................................................................................................................................88 5.1 TEILUNGS- UND ENTWICKLUNGSRATEN.................................................................................................. 90 5.2 QUALITAETSBEURTEILUNG DER EMBRYONEN AUS DEN UNTERSCHIEDLICHEN DMSO- SUPPLEMENTATIONSGRUPPEN AUF MORPHOLOGISCHER EBENE ........................................................... 93 5.3 QUALITAETSBEURTEILUNG DER EMBRYONEN AUS DEN UNTERSCHIEDLICHEN DMSO- SUPPLEMENTATIONSGRUPPEN AUF MOLEKULARER EBENE..................................................................102 5.4 SCHLUSSFOLGERUNGEN.......................................................................................................................108 6 ZUSAMMENFASSUNG........................................................................................................................111 7 SUMMARY........................................................................................................................................116 8 ANHANG........................................................................................................................................... 119 8.1 MEDIEN DER IVP............................................................................................................................. 119 8.2 MEDIEN FUER DIE FAERBUNGEN...........................................................................................................124 8.2.1 MEDIEN FUER DIE LEBEND-TOT-FAERBUNG .............................................................................. 124 8.2.2 MEDIEN FUER DIE TUNEL-ANALYSE........................................................................................ 125 8.2.3 MEDIEN FUER DIE OIL-RED-FAERBUNG...................................................................................... 125 8.2.4 MEDIEN FUER DIE ICM/TE-FAERBUNG...................................................................................... 126 8.3 LABORMATERIAL UND GERAETE............................................................................................................128 8.4 EINZELDATEN DER DURCHGEFUEHRTEN UNTERSUCHUNGEN................................................................... 129 9 VERZEICHNISSE................................................................................................................................ 134 9.1 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS................................................................................................................. 134 9.2 ABBILDUNGSVERZEICHNIS................................................................................................................. 138 9.3 TABELLENVERZEICHNIS...................................................................................................................... 139 9.4 LITERATURVERZEICHNIS..................................................................................................................... 142
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