Interaktion mikroglialer Vorläuferzellen mit Gliomzellen:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Bonn
2018
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG.......................................................................................................................................13
1.1. GLIOM UND
GLIOBLASTOM.....................................................................................................
13
1.1.1.
EPIDEMIOLOGIE.................................................................................................................
14
1.1.2. THERAPIE UND
VERLAUF....................................................................................................
14
1.2.
MIKROGLIA..................................................................................................................................16
1.2.1. MIKROGLIAZELLEN IM
GLIOM..............................................................................................
17
1.2.2 ES ABGELEITETE MIKROGLIA (E S DM
)................................................................................
18
1.3. ZIEL DER
ARBEIT........................................................................................................................
19
2. M
ATERIAL..........................................................................................................................................
20
2.1.
CHEMIKALIEN............................................................................................................................20
2.2.
LOESUNGEN................................................................................................................................
21
2.2.1. 10X (0.125 M) PHOSPHATE BUFFERED SALINE (PBS), PH 7 .3
....................................
21
2.2.2. 10X ANNEXIN BINDING BUFFER
...................
21
2.2.3. 1 % AGAROSE G E
L...........................................................................................................22
2.2.4. 4 % PARAFORMALDEHYD (PFA), PH 7 ,3
........................................................................22
2.2.5. 6X LOADING
BUFFER...........................................................................................................22
2.2.6.
MOVIOL...............................................................................................................................23
2.2.7.
TRIS-BUFFER......................................................................................................................23
2.2.8. REVERSE TRANSKRIPTION-LOESUNG
...................................................................................
23
2.2.9. REALTIME
RTPCR-LOESUNG...............................................................................................
24
2.2.10. KRYOKONSERVIERUNGSLOESUNG ESDM
...........................................................................
24
2.2.11. KRYOKONSERVIERUNGSLOESUNG SMA560, GL261,
KEK293FT.................................24
2.3.
KULTURMEDIEN..........................................................................................................................
25
2.3.1.
N2-MEDIUM.....................................................................................................................
25
2.3.2.
G-MEDIUM........................................................................................................................25
2.3.3. 293FT-M EDIUM
..............................................................................................................
25
2.3.4. WEITERE
ZELLKULTURLOESUNGEN.........................................................................................
26
2.4. ANTIKOERPER UND
FARBSTOFFE...................................................................................................26
2.5.
OLIGONUKLEOTIDPRIMER............................................................................................................
26
2.6.
VERBRAUCHSMATERIAL..............................................................................................................
27
2.7.
KITS............................................................................................................................................
28
2.8.
VEKTOREN.................................................................................................................................
28
2.9.
ZELLLINIEN..................................................................................................................................
29
2.10. M
AEUSE....................................................................................................................................30
2.11. GERAETE UND SONSTIGE
HILFSMITTEL.......................................................................................30
2.12.
SOFTWARE................................................................................................................................
32
3.
METHODEN...................................................................................................................................
33
3.1. ZELLBIOLOGISCHE
TECHNIKEN...................................................................................................33
3.1.1.
ZELLKULTUR..........................................................................................................................
33
3.1.2. LENTIVIRALE
TRANSDUKTION...............................................................................................
34
3.1.3. KOKULTUREN DER
ZELLLINIEN..............................................................................................35
3.1.4. DURCHFLUSSZYTOMETRIE UND
ZELLSEPARATION.................................................................36
3.1.5.
APOPTOSE-ASSAY............................................................................................................
37
3.1.6.
PHAGOZYTOSEASSAY.......................................................................................................
37
3.2. TECHNIKEN ZUR ARBEIT MIT
NUKLEINSAEUREN.........................................................................38
3.3. TECHNIKEN ZUR
PROTEINANALYSE............................................................................................39
3.4.
IMMUNZYTOCHEMIE.................................................................................................................40
3.5. TECHNIKEN ZUR ARBEIT MIT
TIEREN........................................................................................40
3.5.1. VERSUCHSTIERE
40
3.5.2. TUMORINDUKTION UND TRANSPLANTATION VON
ZELLEN....................................................41
3.5.3. GEWINNUNG VON GEWEBESCHNITTEN
............................................................................
41
3.6.
STATISTIK................................................................................................................................
42
4.
ERGEBNISSE....................................................................................................................................
43
4.1. LENTIVIRALE TRANSDUKTION UND
SORTIERUNG.........................................................................43
4.2. ZELLPROLIFERATION VON SMA560- UND GL261-GLIOMZELLEN IN KOKULTUR MIT
ES DM
.....
43
4.3. QUANTITATIVE ANALYSE DER APOPTOSEINDUKTION IN GL261- UND
SMA560-GLIOMZELLEN
DURCH E S DM
....................................................................................................................................45
4.4. QUALITATIVE UND QUANTITATIVE ANALYSE DER PHAGOZYTOSE VON GL261- UND
SMA560-
GLIOMZELLEN DURCH ESDM MITTELS KONFOKALER
MIKROSKOPIE....................................................47
4.5. QANTITATIVE ANALYSE DES TRANSKRIPTIONSMUSTERS DER ESDM IN KOKULTUR
MIT
GLIOMZELLEN MITTELS
RT-PCR..........................................................................................................49
4.6. QUANTITATIVE ANALYSE DER EXPRESSION VON CXCL10 DER ESDM IN KOKULTUR
MIT
SMA560 ODER GL261 MITTELS
ELISA.........................................................................................
53
4.7. IN V/VO-UNTERSUCHUNG MURINEN GLIOMWACHSTUMS IN ABHAENGIGKEIT
INTRATUMORAL
INJIZIERTER ESDM
..............................................................................................................................55
4.8. QUALITATIVER NACHWEIS N K L. 1-POSITIVER ZELLEN NACH INTRATUMORALER
INJEKTION VON
E S DM
................................................................................................................................................59
5.
DISKUSSION.....................................................................................................................................
61
5.1. ESDM HEMMEN SMA560 UND GL261-TUMORWACHSTUM IN VITRO
............................
62
5.2. ESDM PHAGOZYTIEREN SMA560 UND GL261 OHNE VERMEHRTE
APOPTOSEINDUKTION
IN
VITRO...........................................................................................................................................63
5.3. INTRATUMORALE INJEKTION VON ESDM INHIBIERT DAS WACHSTUM INDUZIERTER
SMA560-
TUMORE IN
VIVO...........................................................................................................................
65
5.4. MIKROGLIALE VORLAEUFERZELLEN ALS THERAPEUTISCHE
OPTION.............................................67
6.
ZUSAMMENFASSUNG......................................................................................................................69
7.
LITERATURVERZEICHNIS.....................................................................................................................70
8.
ABBILDUNGSVERZEICHNIS...............................................................................................................
77
9. DANKSAGUNG
10. LEBENSLAUF. 81
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