Verfügbarkeit: S100A8/A9-induzierte Signalkaskaden in der Regulation monozytärer Effektormechanismen

S100A8/A9-induzierte Signalkaskaden in der Regulation monozytärer Effektormechanismen:

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Bibliographische Detailangaben
1. Verfasser:	Freise, Nicole 1989- (VerfasserIn)
Format:	Abschlussarbeit Buch
Sprache:	German
Veröffentlicht:	Münster 2018
Schlagworte:	Hochschulschrift
Online-Zugang:	Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis
Beschreibung:	145 Blätter Illustrationen 30 cm

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adam_text	1 INHALTSVERZEICHNIS 1 INHALTSVERZEICHNIS............................................................................................... 1 2 ZUSAMMENFASSUNG..............................................................................................5 4 SUMMARY..............................................................................................................7 5 EINLEITUNG..............................................................................................................9 5.1 DAS IMMUNSYSTEM............................................................................................................................. 9 5.1.1 DIE ANGEBORENE IMMUNITAET............................................................................................... 9 5.1.1.1 HUMANE M ONOZYTEN..............................................................................................................................10 5.1.1.2 PATTERN RECOGNITION REZEPTOREN (PRRS).............................................................................................11 5.1.1.3 DIE TLR4 SIGNALKASKADE......................................................................................................................... 13 5.2 DAMAGE-ASSOCIATED MOLECULAR PATTERNS (DAMPS)......................................................................15 5.2.1 DIE 5100 PROTEINFAMILIE....................................................................................................16 5.2.1.1 S100A8 UND S100A9...............................................................................................................................17 5.3 SEPSIS UND SIRS................................................................................................................................ 19 5.3.1 ENDOTOXIN-TOLERANZ...........................................................................................................22 5.3.1.1 REGULATIONSMECHANISMEN DER ENDOTOXIN-TOLERANZ........................................................................23 5.3.1.2 EPIGENETISCHE MODIFIKATIONEN IN DER ENDOTOXIN-TOLERANZ ............................................................ 25 5.3.1.3 POSTTRANSKRIPTIONELLE REGULATIONSMECHANISMEN IN DER TOLERANZ................................................25 5.3.1.4 AUSBILDUNG EINES STERILEN TOLERANZSTATUS.........................................................................................26 5.3.1.5 VORARBEITEN ZU DIESER DISSERTATION.................................................................................................... 27 6 ZIELSETZUNG......................................................................................................... 28 7 MATERIAL..............................................................................................................29 7.1 LABORAUSSTATTUNG.............................................................................................................................29 7.1.1 LABORGERAETE......................................................................................................................29 7.1.2 VERBRAUCHSMATERIALIEN.....................................................................................................30 7.2 REAGENZIEN, CHEMIKALIEN UND ENZYME........................................................................................ 31 7.3 INHIBITOREN........................................................................................................................................ 33 7.4 MAUSSTAEMME....................................................................................................................................34 7.5 PRIMER................................................................................................................................................ 34 7.6 ANTIKOERPER........................................................................................................................................ 35 7.6.1 PRIMAERANTIKOERPER..............................................................................................................35 7.6.2 SEKUNDAERANTIKOERPER..........................................................................................................36 7.7 KITS 36 7.8 PUFFER, LOESUNGEN UND M E D IE N ...................................................................................................... 37 7.9 SOFTWARE............................................................................................................................................40 8 METHODEN......................................................................................................... 41 8.1 ZELLBIOLOGISCHE M ETHODEN............................................................................................................. 41 8.1.1 ISOLATION HUMANER MONOZYTEN AUS BUFFY COATS...............................................................41 8.1.2 STIMULATION HUMANER MONOZYTEN.................................................................................... 42 8.1.3 AUFBEREITUNG VON VOLLBLUTPROBEN.................................................................................... 43 8.1.4 ISOLATION MURINER KNOCHENMARKSZELLEN........................................................................... 44 8.1.5 ISOLATION MURINER MILZZELLEN............................................................................................ 44 8.1.6 GENERIERUNG MYELOIDER MURINER ER-HOXB8 ZELLEN........................................................... 45 8.1.7 KULTIVIERUNG MURINER ER-HOXB8 ZELLEN............................................................................. 46 8.1.8 AUSDIFFERENZIERUNG MURINER ER-HOXB8 ZELLEN ZU MONOZYTEN.........................................46 8.1.9 EINFRIEREN UND AUFTAUEN MURINER ER-HOXB8 ZELLEN.........................................................46 8.1.10 ZELLZAHLBESTIMMUNG UND VITALITAETSPRUEFUNG..................................................................... 47 8.2 BIOCHEMISCHE UND IMMUNOLOGISCHE M ETHODEN ....................................................................... 47 8.2.1 AUFREINIGUNG UND ISOLATION DER 5100 PROTEINE.................................................................47 8.2.2 HERSTELLUNG VON ZELLLYSATEN............................................................................................. 47 8.2.3 ZELLFRAKTIONIERUNG HUMANER MONOZYTEN......................................................................... 48 8.2.4 PROTEINKONZENTRATIONSBESTIMMUNG MIT HILFE DES ADVANCED PROTEIN ASSAYS...................48 8.2.5 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE).........................................................48 8.2.6 IMMUNO-WESTERN BLOT..................................................................................................... 49 8.2.7 ELISA.................................................................................................................................49 8.2.7.1 HUMANER TNFCT-ELISA.................................................................................................. 50 5.2.7.2 MURINER TNFA-ELISA...................................................................................................51 8.2.7.Z MURINER S100A8/A9-ELISA............................................................................................51 8.2.8 PROTEOME PROFILER* ANTIBODY ARRAYS.............................................................................. 52 8.3 MOLEKULARBIOLOGISCHE M ETH O D EN ................................................................................................ 52 8.3.1 RNA-ISOLATION....................................................................................................................52 8.3.2 REVERSE TRANSKRIPTION...................................................................................................... 52 8.3.3 QUANTITATIVE REAL-TIME PCR............................................................................................. 53 8.4 IMMUNFLUORESZENZ.......................................................................................................................... 54 8.4.1 BIOLEGEND LEGENDPLEX*................................................................................................. 54 8.4.2 IMAGESTREAM IMAGING FLOW CYTOMETER......................................................................... 55 8.5 MAUSMODELLE................................................................................................................................... 55 8.5.1 LPS/D-GALAKTOSAMIN MODELL DES SEPTISCHEN SCHOCKS...................................................... 55 8.5.2 LPS TOLERANZ M ODELL........................................................................................................ 56 9 ERGEBNISSE........................................................................................................ 57 9.1 IN VIVO UND IN VITRO TOLERANZINDUKTION INHIBIERT TN FA SEKRETION 57 9.1.1 KONZENTRATIONSABHAENGIGE TOLERANZINDUKTION IN HUMANEN MONOZYTEN ......................... 59 9.1.2 TLR4 ABHAENGIGKEIT DER SLOOAS-INDUZIERTEN STRESS-TOLERANZ .......................................... 60 9.2 SIGNALWEGE DER ENDOTOXIN- UND STRESS-TOLERANZ......................................................................62 9.2.1 KONZENTRATIONSABHAENGIGE AKKUMULATION DES HSP27 ...................................................... 62 9.2.2 EINFLUSS DER GSK-3SS AUF DEN TOLERANZMECHANISMUS ....................................................... 63 9.2.2.1 TOLERANZINDUKTION DURCH DEN GSK-3 INHIBITOR CHIR99021............................................................65 9.2.2 2 IN VIVO RELEVANZ DER GSK-3 INHIBITION IM SEPTISCHEN SCHOCK M O D ELL ......................................... 66 9.2.2.3 EINFLUSS DER GSK-3 INHIBIERUNG AUF DIE AUSBILDUNG EINER HYPOREAKTIVEN PHASE ...................... 68 9.2.3 AKT ALS GEGENSPIELER DER GSK-3 IM TOLERANZMECHANISMUS ............................................ 69 9.2.4 ANALYSEN DES PI3K/AKT/GSK-3 SIGNALWEGS IN DER TOLERANZ.............................................70 9.2.5 IXBA UND BCL-3 ALS ZIELPROTEINE DER GSK-3.......................................................................72 9.2.6 EINFLUSS DER GSK-3 UND AKT INHIBITION AUF IXBA UND BCL-3.............................................75 9.3 DER TRANSKRIPTIONSREPRESSOR BCL-3 ALS SCHLUESSELPROTEIN DER ENDOTOXIN- UND STRESS- TOLERANZ.............................................................................................................................................77 9.3.1 ROLLE DES TRANSKRIPTIONSREPRESSORS BCL-3 IM HOXBS SYSTEM .......................................... 77 9.3.2 ZYTOKINABHAENGIGKEIT DER BCL-3 AKKUMULATION.................................................................78 9.3.3 DIE ROLLE DES TRANSKRIPTIONSFAKTORS STAT3 IM TOLERANZMECHANISMUS ........................... 80 9.3.3.1 STAT3-ABHAENGIGE GENEXPRESSION VON BCL3.....................................................................................83 9.3.3.2 STAT3-ABHAENGIGE BCL-3 PROTEINAKKUMULATION................................................................................ 84 9.4 VERHALTEN DER TOLERANZMEDIATOREN GSK-3, BCL-3 UND STAT3 NACH 72 H .............................. 86 9.5 ANREICHERUNG VON BCL-3 UND STAT3 NACH KARDIOPULMONALEM BYPASS.................................87 9.6 EINFLUSS DER ENDOGENEN S100A8 UND S100A9 PROTEINE AUF DEN TOLERANZMECHANISMUS... 91 10 DISKUSSION.......................................................................................................... 95 10.1 UNTERSCHIEDE DER HOCH- UND NIEDRIG-DOSIS TOLERANZ ............................................................... 96 10.2 DIE AKTIVIERUNG DES PI3K/AKT/GSK-3 SIGNALWEGS ALS ERSTE KASKADE DER ANTIINFLAMMATORISCHEN GEGENREAKTION.......................................................................................98 10.2.1 REGULATION DES PI3K/AKT/GSK-3 SIGNALWEGS IN DER TOLERANZ .......................................... 98 10.2.2 INAKTIVITAET DER GSK-3 - AKTIVIERUNGS- ODER TOLERANZMECHANISMUS? .............................. 100 10.2.3 RELEVANZ DER GSK-3 INAKTIVIERUNG IM TOLERANZPROZESS ................................................. 100 10.2.4 DIE GSK-3 ALS POTENTIELLES BEHANDLUNGSTARGET .............................................................. 101 10.2.5 IXBOT UND BCL-3 ALS ZIELPROTEINE DER GSK-3....................................................................103 10.3 BCL-3 ALS SCHLUESSELPROTEIN DER ENDOTOXIN- UND STRESS-TOLERANZ .......................................... 103 10.3.1 BCL-3 REGULATION DURCH DEN TRANSKRIPTIONSFAKTOR STAT3..............................................105 10.4 IN VIVO RELEVANZ DER TOLERANZMEDIATOREN BCL-3 UND STAT3 ................................................ 107 10.5 EINFLUSS ENDOGENER S100A8 UND S100A9 PROTEINE AUF DEN TOLERANZMECHANISMUS ....... 108 10.6 FAZIT..................................................................................................................................................109 10.7 AUSBLICK 112 11 LITERATURVERZEICHNIS....................................................................................... 114 12 ANHANG.............................................................................................................134 12.1 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS.................................................................................................................134 12.2 ABBILDUNGSVERZEICHNIS.................................................................................................................136 12.3 TABELLENVERZEICHNIS.......................................................................................................................139 13 PUBLIKATIONEN UND TAGUNGSBEITRAEGE ............................................................ 140 13.1 ORIGINALARTIKEL................................................................................................................................ 140 13.2 TAGUNGSBEITRAEGE........................................................................................................................... 140 13.2.1 VORTRAEGE..........................................................................................................................140 13.2.2 POSTER..............................................................................................................................140 14 LEBENSLAUF....................................................................................................... 142 15 DANKSAGUNG.....................................................................................................144 16 SELBSTSTAENDIGKEITSERKLAERUNG..........................................................................145
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