Apoptoseinduktion in humanen CD8+-T-Lymphozyten durch Mykolaktone:
Gespeichert in:
1. Verfasser: | |
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Format: | Abschlussarbeit Buch |
Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
Jena
[2018]
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INHALTSVERZEICHNIS.........................................................................................................................I
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS.............................................................................................................
IV
ZUSAMMENFASSUNG...................................................................................................................
VII
1
EINLEITUNG...............................................................................................................................1
1.1 EPIDEMIOLOGIE DER TUBERKULOSE (M.
TUBERKULOSIS-KOMPLEX)................................1
1.2 KRANKHEITSBILD DER
TUBERKULOSE................................................................................
2
1.3 IMMUNANTWORT AUF M. FUBERCU/OS/S-L NFEKTION
..........................................................
4
1.4 BEISPIELE FUER MODULATION UND INHIBITION DER IMMUNANTWORT DURCH
M.
TUBERCULOSIS.............................................................................................................
5
1.5 HISTORISCHES UEBER M. BOVIS BCG 84
JENA...............................................................7
1.6 BEDEUTUNG VON M. BOVIS BCG ALS IMPFSTOFF
...........................................................
7
1.7 THERAPIE DES NICHT MUSKELINVASIVEN UROTHELKARZINOMS
....................................
10
1.8 BEDEUTUNG VON M. BOVIS BCG ALS ADJUVANTE THERAPIE FUER DAS
HARNBLASENKARZINOM..................................................................................................11
1.9 EPIDEMIOLOGIE VON BURULI ULKUS (M.
ULCERANS).....................................................12
1.10 MYKOLAKTONE - HISTORISCHE BELEGE
......................................................................
13
1.11 ZUR STRUKTUR DER
MYKOLAKTONE..............................................................................
17
1.12 HUMANE
T-LYMPHOZYTEN......................................................................................
19
1.12.1 CD4+- UND CD8+-T-LYMPHOZYTEN BEI DER M. TUBERCULOSIS-INFEKTION...
20
1.12.2 ZYTOTOXISCHE T-LYMPHOZYTEN (C TL)
...........................................................
21
1.13
APOPTOSE..................................................................................................................23
1.13.1 EXTRINSISCHER W EG
...........................................................................................24
1.13.2 INTRINSISCHER W E G
............................................................................................25
2 ZIELE DER
ARBEIT..................................................................................................................26
3 M
ETHODEN...................................................................................................................
28
3.1 REKRUTIERUNG UND
BLUTENTNAHME.............................................................................28
3.2 PRINZIP FUNKTIONSUNTERSUCHUNGEN INTERFERON-GAMMA (IFN-Y) ASSAY
(ELISPO
T)...................................................................................................................28
3.3 ELISPOT TEILVERFAHREN
FICOLL-GRADIENTEN-ZENTRIFUGATION.................................29
3.4 ZELLZAEHLUNG UND
KRYOKONSERVIERUNG......................................................................30
3.5 GEWINNUNG VON
CD8+-T-LYMPHOZYTEN.................................................................
30
3.6 HERSTELLUNG DES GROB AUFGEREINIGTEN
MYKOLAKTONS..............................................32
3.7 APOPTOSEVERSUCH MIT DEM LASER-SCANNING-MIKROSKOP (LSM
).........................33
3.7.1 FLUORESZENZMESSUNG AM KONFOKALEN LASER-SCANNING-MIKROSKOP
.....
34
3.8 FLUORESZENZMESSUNG AM DURCHFLUSSZYTOMETER
..................................................
35
3.8.1 APOPTOSEMESSUNG MITTELS ANNEXIN-A5-FITC/ PROPIDIUMIODID A SSAY..
37
3.8.2 PRAEPARATION DES APOPTOSEVERSUCHS AM DURCHFLUSSZYTOMETER
..................
37
3.9 IN SILICIO ANALYSE DER POLYKETIDSYNTHASEN VON M. TUBERCULOSIS H37RV,
M. BOVIS BCG PASTEUR 1173P2 UND M. ULCERANS AGY-99 MITTELS BASIC LOCAL
ALIGNMENT SEARCH TOOL,
BLAST..............................................................................38
3.9.1 NUKLEOTIDSEQUENZVERGLEICH DER POLYKETIDSYNTHASEN VON M. BOVIS BCG
PASTEUR 1173P2 MIT NAHE VERWANDTEN MYKOBAKTERIENARTEN MITTELS
B LA S
T..................................................................................................................39
3.9.2 DARSTELLUNG DER AMINOSAEURESEQUENZ MIT HILFE DER MATLAB-SOFTWARE .
40
3.10 STATISTISCHE
ANALYSEN..........................................................................................
40
4
ERGEBNISSE........................................................................................................................
41
4.1 PROBANDENKOLLEKTIV UND -CHARAKTERISTIKA
.............................................................
41
4.2 EINFLUSS DER EXPOSITION MIT M. BOVIS BCG 84 JENA-TOXIN AUF
MORPHOLOGIE
DER
CD8+-T-LYMPHOZYTEN........................................................................................
42
4.3 APOPTOSEMESSUNG MITTELS
ANNEXIN-A5-FITC/PROPIDIUMIODID.........................45
4.4 GEGENUEBERSTELLUNG AUSGEWAEHLTER POLYKETIDSYNTHASEGENE UND DEREN
POLYKETIDSYNTHASEN....................................................................................................51
5
DISKUSSION..........................................................................................................................58
5.1 EFFEKT VON M. BOVIS BCG S4 JENA-TOXIN AUF DIE MORPHOLOGIE DER
CD8+-T-
LYMPHOZYTEN..............................................................................................................
58
5.2 EFFEKT VON M. BOVIS BCG 34 JENA-TOXIN AUF VIABILITAET VON CD8+-T-
LYMPHOZYTEN..............................................................................................................
60
5.3 VERGLEICH DER POLYKETIDSYNTHASEN VON M. TUBERCULOSIS H37RV, M. BOVIS
BCG
PASTEUR 1173P2 UND M. ULCERANS A GY-99
............................................................
62
5.4 SCHLUSSFOLGERUNG FUER DIE BEDEUTUNG VON BCG ALS IMPFSTOFF
............................
66
5.5 SCHLUSSFOLGERUNG FUER DIE BEWERTUNG VON MYCOBACTERIUM BOVIS BCG ALS
THERAPEUTIKUM GEGEN TUMOREN DER HARNBLASE
..................................................
68
5.6
AUSBLICK........................................................................................................................69
6
LITERATURVERZEICHNIS:.........................................................................................................71
7
ANHANG................................................................................................................................77
7.1 ORIGINALDATEN DER APOPTOSEMESSUNG AM DURCHFLUSSZYTOMETER
(NEUNERSERIE)
..................................................
77
7.2 GEN- UND
PROTEINSEQUENZEN....................................................................................87
7.3
MATERIAL.........................................................................................................................92
7.3.1
VERBRAUCHSMATERIALIEN......................................................................................
92
7.3.2 REAGENZIEN UND CHEMIKALIEN
................................................................
93
7.3.3 PUFFER UND LOESUNGEN
.........................................................................................
93
7.3.4 ANTIKOERPER UND FLUORESZENZFARBSTOFFE
...........................................................
94
7.3.5 G
ERAETE.................................................................................................................
95
7.4
ABBILDUNGSVERZEICHNIS..............................................................................................
96
7.5
TABELLENVERZEICHNIS...................................................................................................98
7.6
DANKSAGUNG.............................................................................................................
100
7.7
LEBENSLAUF.................................................................................................................
101
7.8 EHRENWOERTLICHE
ERKLAERUNG......................................................................................
103
7.9 VOTUM
.......................................................................................................................
104
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