Untersuchungen zur Regulation kardialer Gene in Drosophila durch das LIM-Domäne-Bindeprotein Chip und den LIM-Homöodomäne Transkriptionsfaktor Tailup:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Ulm
2017
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Datensatz im Suchindex
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG..........................................................................................................................1
1.1 DER MODELLORGANISMUS
DROSOPHILA
MELANOGASTER.........................................................1
1.2 DAS EMBRYONALE HERZ VON
DROSOPHILA
..........................................................................
2
1.2.1 MORPHOLOGIE UND FUNKTION DES
DROSOPHILA HERZENS
..........................................
2
1.2.2 ENTWICKLUNG DES
DROSOPHILA HERZENS
..................................................................
4
1.2.3 DAS MOLEKULARE NETZWERK DER EMBRYONALEN HERZENTWICKLUNG IN
DROSOPHILA.... 5
1.2.3.1 WICHTIGE INDUKTIVE SIGNALE DER EMBRYONALEN HERZENTWICKLUNG
.....................
5
1.2.3.2 KEMKOMPONENTEN DER EMBRYONALEN HERZENTWICKLUNG
....................................
7
1.2.3.3 TRANSKRIPTIONELLE REGULATION DER KARDIALEN GENE
HAND UND EVE
..................
10
1.3 LIM-HOMOEODOMAENE
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN...............................................................11
1.4 DER LIM-DOMAIN-BINDING FAKTOR
CHIP........................................................................14
1.5 ZIELSETZUNG DER
ARBEIT.................................................................................................
16
2. MATERIAL &
METHODEN.....................................................................................................
17
2.1
MATERIALEN...................................................................................................................
17
2.1.1 CHEMIKALIEN, LOESUNGEN UND MEDIEN
..................................................................
17
2.1.2 KITS UND
ENZYME................................................................................................
18
2.1.3
ZELLEN..................................................................................................................19
2.1.4
FLIEGENSTAEMME....................................................................................................20
2.1.5
PLASMIDE............................................................................................................
21
2.1.6
ANTIKOERPER..........................................................................................................
22
2.1.7
OLIGONUKLEOTIDE..................................................................................................23
2.1.8 COMPUTERPROGRAMME
.........................................................................................
26
2.1.9
GERAETE................................................................................................................
26
2.1.10
SONSTIGES............................................................................................................
28
2.2
METHODEN...................................................................................................................
29
2.2.1 MOLEKULARBIOLOGISCHE
ARBEITEN..........................................................................29
2.2.1.1 ISOLIERUNG GENOMISCHER DNA AUS EINZELNEN
FLIEGEN.......................................29
2.2.1.2
SEQUENZIERUNG.................................................................................................30
2.2.1.3 RNA-ISOLIERUNG AUS
DROSOPHILA 82
ZELLEN.....................................................30
2.2.1.4
CDNA-SYNTHESE..............................................................................................
31
2.2.2 PROTEINBIOCHEMISCHE ARBEITEN
...........................................................................
31
2.2.2.1
EMSA...............................................................................................................31
2.2.3
ZELLKULTUR.............................................................................................................34
2.2.3.1 KULTIVIERUNG VON
DROSOPHILA 82 ZELLEN
..........................................................
34
2.2.3.2 LUCIFERASE REPORTER ASSAY
..............................................................................
35
2.2.4 ARBEIT MIT
FLIEGEN...............................................................................................37
2.2.4.1
FLIEGENHALTUNG..................................................................................................37
2.2.4.2 ZUBEREITUNG DES
FLIEGENFUTTERS........................................................................38
2.2.4.3 ANSETZEN VON KREUZUNGEN
..............................................................................
38
2.2.4.4 ABSAMMELN VON EMBRYONEN
...........................................................................
39
2.2.4.5 FIXIERUNG VON EMBRYONEN MIT UND OHNE ANSCHLIESSENDER
X-GAL-FAERBUNG
....
40
2.2.4.6 AUFBEREITUNG VON EMBRYONEN FUER EINE DIREKTE ANALYSE AM
FLUORESZENZ
MIKROSKOP........................................................................................................42
2.2.4.7 IMMUNFLUORESZENZ-FAERBUNGEN AN DROSOPHILA EMBRYONEN
............................
43
2.2.4.8 FLUORESZENZ-M-SZYU-HYBRIDISIERUNG GEKOPPELT MIT
IMMUNFLUORESZENZ-
FAERBUNG
...........................................................................................................44
2.2.4.9 HERSTELLUNG NEUER FLIEGENLINIEN
.....................................................................
46
2.2.4.10 VERWENDUNG DES GAL4/UAS-SYSTEMS ZUR EXPRESSION BZW.
UEBEREXPRESSION
GENETISCHER KONSTRUKTE IN DROSOPHILA
...........................................................
48
3.
ERGEBNISSE........................................................................................................................49
3.1 CHARAKTERISIERUNG DES HERZPHAENOTYPS IN CHIP65 5 MUTANTEN
.....................................
49
3.2 UNTERSUCHUNG EINER GENETISCHEN INTERAKTION ZWISCHEN CHIP UND DEN
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN TUP UND
PN R
...........................................................................
52
3.2.1 ANALYSE EINER GENETISCHEN INTERAKTION ZWISCHEN
CHIP UND TUP
.........................
52
3.2.2 ANALYSE EINER GENETISCHEN INTERAKTION ZWISCHEN
CHIP UND
PN R
.........................
55
3.3 ANALYSE DER HERZPHAENOTYPEN NACH EXPRESSION VERSCHIEDENER CHIP UND
TUP
DELETIONSKONSTRUKTE IM DORSALEN MESODERM VON
DROSOPHILA
...................................
59
3.4 UNTERSUCHUNG DER INTERAKTIONEN ZWISCHEN CHIP UND DEN
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN TUP,
PNR UND TIN BEI DER TRANSKRIPTIONEILEN REGULATION DER GENE
HAND UND EVE
.............
66
3.4.1 ANALYSE DER INTERAKTION ZWISCHEN CHIP UND TUP BEI DER
TRANSKRIPTIONELLEN
REGULATION DER GENE
HAND UND EVE
...................................................................
67
3.4.2 ANALYSE DER INTERAKTIONEN ZWISCHEN CHIP UND PNR RESPEKTIVE CHIP
UND TIN BEI
DER TRANSKRIPTIONEILEN REGULATION DER GENE
HAND UND EVE
...............................
69
3.5 UNTERSUCHUNG DER INTERAKTIONEN ZWISCHEN TUP UND DEN
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN PNR
UND TIN BEI DER TRANSKRIPTIONEILEN REGULATION VON
HAND
.........................................
72
3.6 ANALYSE DER FUNKTION VON TUP BEI DER REGULATION MESODERMALER EVE
EXPRESSION... 73
3.7 UNTERSUCHUNGEN ZUR SPLEISSVARIANTE TUP B
...............................................................
78
3.8. SCREEN DES DRITTEN CHROMOSOMS VON
DROSOPHILA ZUR IDENTIFIZIERUNG NEUER KARDIALER
GENE...........................................................................................................................80
4.
DISKUSSION.......................................................................................................................85
4.1 DIE FUNKTION DES ADAPTERMOLEKUELS CHIP IST WICHTIG FUER DIE EMBRYONALE
HERZENTWICKLUNG IN
DROSOPHILA.................................................................................
85
4.2 BETEILIGUNG EINES TUP::CHIP PROTEINKOMPLEXES AN DER REGULATION
KARDIALER GENE... 87
4.3 TUP - NEUER REGULATOR DER MESODERMALEN EVE
EXPRESSION.........................................90
4.4 DIE BEDEUTUNG DES C-TERMINUS FUER DIE FUNKTION VON
TUP........................................ 92
4.5 EIN *LIM-CODE* FUER DIE
HERZENTWICKLUNG.................................................................93
4.6 DER CHROMOSOMALE BEREICH 88E12-89A1 BEINHALTET GENE, DIE FUER DIE
EMBRYONALE
HERZENTWICKLUNG IN DROSOPHILA WICHTIG
SIND............................................................94
5.
LITERATURVERZEICHNIS.......................................................................................................97
DANKSAGUNG...........................................................................................................................115
ANHANG..................................................................................................................................117
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS.......................................................................................................
117
ABBILDUNGSVERZEICHNIS.......................................................................................................
119
TABELLENVERZEICHNIS............................................................................................................
121
ERKLAERUNG............................................................................................................................122
HINWEIS ZUR
ERSTVEROEFFENTLICHUNG.......................................................................................
123
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